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肺炎链球菌的转化缺陷导致细菌毒力减弱
目的探讨肺炎链球菌的自然转化与其条件致病的关系. 方法采用插入失活的方法制备肺炎链球菌的转化缺陷菌株,通过黏附实验和小鼠毒力实验观察它们毒力的变化,应用RT-PCR测定黏附因子PsaA在野生和缺陷菌株中的表达. 结果实验获得了3株肺炎链球菌(1、2和22)的转化缺陷菌株(1d、2d和22d).毒力研究发现转化缺陷菌株对ECV 304细胞的黏附能力显著弱于相应的野生菌株,1和2株肺炎链球菌腹腔感染BALB/c小鼠的能力显著强于相应的转化缺陷菌株;研究还发现PsaA基因在2和22株肺炎链球菌中的表达量显著高于其缺陷菌株. 结论肺炎链球菌具有自然转化的能力有助于其毒力的表现,且可能通过黏附因子PsaA等相关毒力因子表达增加而增强其毒力.
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DNA 处理蛋白 A 在细菌自然转化中的作用
自然转化是水平基因转化的一种基因编程机制，是细菌通过水平基因转移获得新的遗传信息的一种途径。DNA 处理蛋白 A(DNA processing protein A，DprA)是一种保守蛋白，它参与自然转化的多个环节，可以结合单链 DNA 并保护其免受核酸酶损伤；与重组酶 A 相互作用，利于重组酶 A 装载到裸露的单链 DNA 及被单链 DNA 结合蛋白覆盖的单链 DNA 上，随后进行染色体同源搜索及配对，可以减弱单链 DNA 结合蛋白的屏障作用，通过限制感受态刺激因子的早期基因表达，参与细胞感受态的关闭过程。本文对 DprA 蛋白在细菌自然转化中的作用进行综述。
关键词： DNA 处理蛋白 A 细菌 自然转化 -
肺炎链球菌实验室转化模型的方法学研究
目的建立肺炎链球菌的实验室转化模型,以便于对该菌的各种目的基因进行重组改造.方法通过检测细菌的吸光度值,在特定的菌密度时利用感受态刺激因子(CSP)诱导,采用血平板培养筛选的方法,获取发生转化了的菌株.通过抗生素培养基培养和PCR鉴定是否发生转化.结果发现不同肺炎链球菌株的转化适菌密度不同,构建了肺炎链球菌感受态缺陷菌株,建立了肺炎链球菌在实验室的转化模型.结论实验室条件下,在不同菌密度时可利用CSP诱导肺炎链球菌成为感受态而发生转化.
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在卓越医师培养中构建“行动导向”教学体系
“行动导向”教学是通过行为引导提高学生学习兴趣，培养其创新思维，形成关键能力。以“行动导向”教学为中心构建卓越医师教学体系，就是时刻将学生作为主体，更新教师观念，实现教学重心转移；模拟职业情景，强化医学生医德和实践能力的培养，就是“生物－心理－社会”医学模式的自然转化；将教学内容和方法案例化、项目化、角色化，就是培养医学生关爱病人、尊重生命的职业操守和解决临床实际问题的能力。因此，以“行动导向”教学为中心构建教学体系，全面改革卓越医师培养计划和方案，能够使卓越医师的培养有理可循、有据可依。具体措施：（1）应用“行动导向”思维，构建学生为主体的教育理念；（2）优化培养方案计划，推进医学理论课程整合建设；（3）推进教学方法改革，培养自主和终身学习；（4）能力完善考核评价体系，注重综合能力素质培养。
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肺炎链球菌自然转化机制的研究进展
肺炎链球菌的自然转化与其自身的染色体基因突变有着密切联系.研究发现,调控肺炎链球菌发生转化的关键基因是操纵子comCDE,它调控肺炎链球菌产生感受态,从而能获取外源基因.comC的产物CSP可诱导基因comDE的表达,而comE可反过来诱导comC的表达.comAB有修饰和运输comC的转录及翻译产物的作用.ciaRH则有抑制comC表达的作用.comE可通过诱导comX表达,从而诱导一系列的基因表达使细菌发生转化.一些环境因素可影响肺炎链球菌自然转化的发生.氧气可通过基因nox调节肺炎链球菌的转化发生,其中可能有基因ciaRH和MicAB的参与.Ca2+对其转化的影响可能是通过调节基因ciaRH而实现的.而pH值则可能是通过改变CSP的活性对转化进行调节.
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变形链球菌UA159磷酸蔗糖变位酶基因功能丧失菌株的构建
目的:构建变形链球菌UA159磷酸蔗糖变位酶基因(phospho-sugar mutase gene,psm)功能丧失菌株,为进一步研究变形链球菌psm功能做准备.方法:将变形链球菌UA159 psm内部上、下游2段序列分别克隆至自杀质粒pFW5的2个多克隆位点(MCS-Ⅰ和MCS-Ⅱ),构建重组质粒,并经酶切和测序证实.利用同源重组(homologous recombination)原理,采用自然转化的方法,实现重组自杀质粒和变形链球菌UA159同源序列的等位交换(allelic exchange).结果:经过PCR和测序分析,证实变形链球菌UA159基因组中的psm被重组质粒的基因(含有壮观霉素抗性)取代.结论:成功构建了变形链球菌UA159 psm功能丧失菌株.
