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临床型医学研究生优化培养的思考
医学研究生培养模式分为医学科学学位型和医学临床专业型两种[1],过去对医学科学学位型研究生关注较多.近年来,由于国家政策调整,临床型医学研究生人数逐年上升,为了更好地发挥临床型医学研究生的优势,实现培养具有临床实践能力的高级应用型医学专业人才的目标,本文试从临床型医学研究生的自身特点、导师引导、学校教育、临床实践及发挥研究生的主观能动性等方面进行探讨,为临床型医学研究生的培养提供参考.
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羊水间充质干细胞体外培养方案的优化及生物学特性
背景:目前干细胞工程种子来源多样化,羊水中存在胎儿脱落细胞,可分离培养出间充质来源干细胞.目的:探索不同成分培养基对人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,h-AFMSCs) 体外培养的影响,并分析适培养基体外培养的h-AFMSCs 的生物学特性,建立优化的h-AFMSCs 培养方案.方法:孕16~24 周的孕妇产前检查中获得羊水进行原代及传代培养并采用6 种不同的培养基成分对h-AFMSC 进行培养.结果与结论:从孕中期羊水中可分离出h-AFMSCs,体外使用低糖DMEM 培养基(L-DMEM)+ 体积分数10% 胎牛血清与合成培养基MESEN PRO 体积比1∶1 配制的培养基对其扩增促进作用强.h-AFMSCs 高表达CD29 、CD73 、CD90 、CD105 、CD166,低表达CD14 、CD34 、CD45 及HLA-DR;分离培养的h-AFMSCs 高表达的干细胞基因为OCT-4 和Nanog;h-AFMSCs 体外具有向成骨、成脂细胞分化的潜能且具有抑制淋巴细胞增殖的作用.提示孕中期羊水是低免疫原性的h-AFMSCs 的良好细胞来源.
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人脐带内皮细胞与平滑肌细胞的分离培养特照
目的:如何便捷有效地获取种子细胞是构建组织工程皮肤、角膜、血管等成功与否的关键,实验对人胎儿脐带内皮细胞和平滑肌细胞的分离、纯化、培养扩增技术进行探讨.方法:实验于2006-11在暨南大学医学院完成.①实验材料:剖宫产正常胎儿脐带由暨南大学第一临床学院提供,产妇均知情同意.②实验方法:配制培养液,A液为在M199培养液中加入20%胎牛血清、20 mg/L肝素、10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,B液为在M199培养基中加入10%胎牛血清、250 mg/L G418.取脐带15～20 cm,采用胶原酶"灌注消化法"获取脐带内皮细胞制成悬液,静置0.5 h后利用成纤维细胞短时间内贴壁的特点,把尚未贴壁细胞吸出重新接种于含有A液的培养瓶,初步去除部分成纤维细胞,细胞贴壁24 h后将培养液换为B液,继续培养3 d,去除成纤维细胞,然后再用A液扩大培养.从消化完脐静脉内皮细胞的脐带中剥取脐动脉,刮除内皮细胞,将血管条剪成小块均匀贴于培养瓶底,培养瓶内加入含20%小牛血清的DMEM培养液2 mL,缓慢竖直培养瓶,以培养液刚未浸没培养块为佳,放入37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱内干涸8 h后,将培养瓶轻轻翻转,使植块刚浸入培养液中,绝对静置3 d,以后每3 d换液1次,待植块周围生长晕的细胞融合成片时,即可传代,传代后DMEM培养液的血清浓度由原来的20%改为5%,且在培养液中加入0.2 L肝素.③实验评估:通过倒置相差显微镜观察细胞生长情况,分别以第Ⅷ因子、α-肌动蛋白免疫组织化学染色法鉴定内皮细胞和平滑肌细胞.结果:①内皮细胞的生长观察:接种24 h后,镜下可见刚贴壁的细胞呈圆形,逐渐转变为多角形或梭形,胞间可见有成纤维细胞混杂,加入B液3 d后成纤维细胞逐渐死亡.传代细胞呈"铺路石"样,细胞周围特别是近胞核处可见明显光晕,为典型的内皮细胞生长特点.②内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原的检测:胞浆丰富且有棕黄色颗粒,细胞核不着色,呈阳性反应.③平滑肌细胞的生长观察:镜下组织块贴壁后5～7 d可见有少数细胞从植块边缘游出,第10～15天植块周围形成明显的细胞生长晕,细胞呈长梭形、带状或三角状,有1～4个细胞核,可见半透明颗粒,第20～25天细胞密集、平行排列,形成"峰谷样"结构,是平滑肌细胞的特征性生长表现.④平滑肌细胞特异性α-肌动蛋白单克隆抗体检测:胞浆内可见棕黄色细丝,为特异性α-平滑肌肌动蛋白,细胞核不着色.结论:以胎儿脐带作为种子细胞的来源,成功分离后通过调节培养液的成分,既能排除成纤维细胞的污染又可以令内皮细胞和平滑肌细胞快速增殖.
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产表面活性剂石油降解菌BS-5的特性研究
目的 确定培养条件对产表面活性剂菌株BS-5的生长及降解特性的影响.方法 利用紫外分光光度法、表面张力测定法和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS),分别以菌体浓度、培养液表面张力及原油降解率为评价指标.结果 菌体生长与产表面活性物质的能力及降解能力呈正相关,且确定优碳源为0.5％的可溶性淀粉,氮源为1.0％的玉米浆,降解时间为6d,在此条件下原油降解率高达42.3％.结论 菌株培养条件的优化提高了菌株自身生长、产表面活性剂及降解原油的能力,为石油污染修复提供理论依据.
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高分子量聚谷氨酸的微生物合成及其发酵过程的研究
目的:以枯草芽孢杆菌纳豆亚种为出发菌株,考察不同碳氮源及NaCl浓度、谷氨酸、种龄、接种量对微生物发酵产γ-聚谷氨酸的影响,以提高γ-聚谷氨酸的产量.方法:该菌菌种活化后,接入种子培养基,于37℃、200 r/min震荡培养18 h,然后按2%接种量接入不同发酵培养基进行发酵培养.γ-聚谷氨酸分离纯化后,根据其产量筛选适发酵培养基组成及发酵条件,并对产物进行分析测定.结果:①佳碳氮源分别为葡萄糖、蛋白胨,NaCl浓度为30 g/L、种龄15 h、接种量3%,且需在培养基中添加谷氨酸.②该菌株在适条件下发酵56h时,γ-聚谷氨酸产量达32.7 g/L,凝胶渗透色谱分析其相对分子质量为426 kDa,呈多分子质量聚集体形式.③γ-聚谷氨酸的合成与菌体生长并非完全同步.结论:γ-聚谷氨酸作为一种天然的、可生物降解的、对环境和人体无害的多聚物,可由微生物发酵合成,且在此适宜条件下产量较高.
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在卓越医师培养中构建“行动导向”教学体系
“行动导向”教学是通过行为引导提高学生学习兴趣，培养其创新思维，形成关键能力。以“行动导向”教学为中心构建卓越医师教学体系，就是时刻将学生作为主体，更新教师观念，实现教学重心转移；模拟职业情景，强化医学生医德和实践能力的培养，就是“生物－心理－社会”医学模式的自然转化；将教学内容和方法案例化、项目化、角色化，就是培养医学生关爱病人、尊重生命的职业操守和解决临床实际问题的能力。因此，以“行动导向”教学为中心构建教学体系，全面改革卓越医师培养计划和方案，能够使卓越医师的培养有理可循、有据可依。具体措施：（1）应用“行动导向”思维，构建学生为主体的教育理念；（2）优化培养方案计划，推进医学理论课程整合建设；（3）推进教学方法改革，培养自主和终身学习；（4）能力完善考核评价体系，注重综合能力素质培养。
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优化分离及培养骨髓间充质类成纤维样集落细胞的实验研究
[目的]探讨分离培养骨髓间充质类成纤维样集落细胞的佳条件,并观察其生物学活性.[方法]采用优化分离方法,常规细胞培养、传代技术,光镜技术及细胞增殖活性检测法,观察不同浓度血清、不同接种密度对骨髓间充质类成纤维样集落细胞生长、增殖、形态及集落形成率的影响,观察培养细胞的生物学特性并将该类细胞向成骨细胞诱导分化.[结果]以差速贴壁法,加入10%进口胎牛血清、接种密度为5×104个/ml的培养条件为适宜细胞生长;在此条件下,具有快速增殖的能力及较高的集落形成率;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状,2～8代的细胞呈均质状;诱导后的成骨细胞AKP检测成阳性.[结论]明确了骨髓间充质类成纤维样集落细胞培养所需的细胞接种密度,血清培养浓度,该类细胞具有干细胞特性,为进一步深入研究该类细胞的应用打下了基础.
关键词： 优化分离 优化培养 骨髓间充质类成纤维样集落细胞 -
优化农村卫生人员培养服务模式的探讨与研究
农村卫生事业的发展关系到农村社会发展和稳定大局,对促进农村生产力、振兴农村经济及提高全民素质具有深远的意义,同时也是我国卫生工作的重点.为了充分利用高等医学院校教学和管理资源,进一步加强农村卫生人员在职、在岗培训,拓宽乡村医生的培训渠道,建立健全乡村医生终身教育制度,加强非学历教育.应结合农村卫生工作的特点和需求,科学制订教学计划和课程设置,构建教学和培训工作的检查、考核和评价体系,进而建立农村卫生人员培养服务模式.
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甲型副伤寒沙门菌培养条件的优化
优化甲型副伤寒沙门菌的培养条件，提高菌体产量。方法通过单因素及正交试验，对影响甲型副伤寒沙门菌生长的培养温度、NaCl浓度和pH等条件进行优化。结果甲型副伤寒沙门菌在NaCl浓度0．75％、温度35℃、pH6．5时菌体产量高。结论通过对甲型副伤寒沙门菌培养条件进行优化，获得较高的菌体产量，为后期诊断试剂盒的开发奠定了基础。
