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人工蛹虫草与谷胱甘肽组方对酒精性肝损伤保护作用的实验研究
目的 研究人工蛹虫草与谷胱甘肽(GSH)组方对酒精性肝损伤的保护作用.方法 将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、蛹虫草与GSH低、中、高剂量组(0.200、0.400和1.200g/kg),灌胃给药,1次/d,连续30 d.实验末期采用50％乙醇一次灌胃,造成小鼠急性肝损伤模型.测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,制作肝组织病理切片,测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、三酰甘油(TG)含量.结果 0.400和1.200 g/kg剂量组ALT和AST活性、MDA和TG含量以及肝脏脂肪变性评分,明显低于模型对照组(P ＜0.05或P＜0.01);0.200、0.400和1.200g/kg剂量组SOD活性,1.200g/kg剂量组GSH含量明显高于模型对照组(P＜0.01).结论 人工蛹虫草与GSH组方对乙醇所致急性肝损伤具有明显的保护作用.
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糖脂欣口服液中多糖及腺苷含量测定
目的:建立糖脂欣口服液中多糖及腺苷含量测定方法.方法:采用苯酚-硫酸法测定了糖脂欣口服液中多糖的含量;采用HPLC法测定糖脂欣口服液中腺苷的含量.结果:测定多糖含量时,回归方程Y=0.0072X+0.010 3,r=0.999 6,线性范围为12.5～100μg·mL-1,平均加样回收率为99.7%;HPLC测定腺苷含量时,以磷酸盐缓冲液(pH6.5)-甲醇(17:3)为流动相;流速为1 mL·min-1,检测波长为260 nm,回归方程Y=110.47X-4.11,r=0.999 9,线性范围为3.04×10-2～15.20×10-2μG,平均加样回收率为99.0%.结论:建立的测定方法灵敏度高、重现性好,可用于糖脂欣口服液的质量控制.
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人工蛹虫草子实体化学成分研究
目的:研究人工蛹虫草子实体的化学成分.方法:大孔吸附树脂和硅胶色谱柱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构.结果:分离鉴定了9个化合物,分别为:麦角甾-4,6,8(14)-四烯-3-酮(1),柠檬甾二烯醇(2),二十四烷酸单甘油酯(3),麦角甾醇(4),麦角甾醇过氧化物(5),麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(6),虫草素(7),腺苷(8),N-(2-羟乙基)腺苷(9).结论:化合物1～3,6,9均为首次从该种真菌子实体中分离得到.
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不同级别人工蛹虫草腺苷含量的比较
目的 测定不同级别人工蛹虫草中腺苷含量.方法 按照<中国药典)2005年版一部冬虫夏草项下含量测定方法 ,比较3个级别的蛹虫草腺苷含量.结果 3个级别的人工蛹虫草以腺苷含量为评价指标,均符合药典规定,一级蛹虫草样品的平均含量为(9.73×10-2)%,二级蛹虫草样品腺苷平均含量为(13.0×10-2)%,三级蛹虫草样品腺苷平均含量为(20.3×10-2)%,显著高于一级、二级蛹虫草样品.结论 提示将人工蛹虫草按生长性状分级是否合适值得进一步探讨.
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人工蛹虫草化学成分研究
人工蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Link又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属.北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用[1].<新华本草纲要>记载其"性平,味甘,有益肺肾,补精髓,止血化痰"等功效,用于肺结核及老人虚弱和贫血等症,为珍贵的中药材[2].目前由于人们疯狂搜寻挖掘冬虫夏草,导致生态环境的破坏,因而与冬虫夏草齐名的蛹虫草在国际上日益受到人们的关注,它的开发与生产也为我国开辟了新的营养源和药源.对于冬虫夏草化学成分的研究较多,而对人工蛹虫草化学成分研究较少,仅见姜弘等[3]从人工蛹虫草子实体中分离得到8个化合物,分别为核苷类、甾醇和脂肪酸类化合物.我们现报道从其人工培养的子实体中得到7个化合物,其中化合物Ⅰ,Ⅴ～Ⅶ,为首次从该真菌中分离得到.本实验通过对人工蛹虫草化学成分的系统研究,对比两者的化学成分的异同,为人工蛹虫草代替冬虫夏草药用提供研究基础.
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冬虫夏草及其代用品有效成分比较研究
冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc为子囊菌门麦角菌科虫草属药用真菌,生产于西藏、青海、四川、云南等地.由于冬虫夏草的野生资源十分有限,人工培育这一研究课题引起了国内学者的关注,东北地区的学者培育出蚕蛹虫草及人工蛹虫草子实体并先后通过了国家科委组织的专家鉴定.由国家专利局1993年公布,经化学、药效、毒理等系列实验研究,结果表明,它们所含虫草素、甘露醇等成分均达到或超过名贵中药冬虫夏草,而且证明三者都具有滋补、强壮、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力和性功能的作用,本文对虫草属的主要有效成分--核苷类成分进行比较研究,为虫草的质量考察提供科学依据.
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HPLC测定人工蛹虫草中6种核苷类成分的含量
目的 建立人工蛹虫草中核苷类成分的HPLC测定方法,为产品质量标准提供参考.方法 用高效液相色谱法测定人工蛹虫草中的有效成分,选用Waters XBridgeTM C18柱色谱柱(250×4.6 nm,5μm);流动相为甲醇-0.2％磷酸二氢钾溶液梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃.结果 虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷、胸苷、胞苷分别在0.025 ～0.5mg/mL,0.01～0.2 mg/mL,0.01 ～0.2mg/mL,0.01～0.2mg/mL,0.01～0.2mg/mL,线性关系良好,平均回收率虫草素为99.34％,胞苷为99.04％,尿苷为99.09％,鸟苷为98.75％,胸苷为102.38％,腺苷为99.27％.结论 该测定方法简便易行、准确性好、灵敏度高、重复性好,可用于人工蛹虫草中核苷类成分的质量控制.
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从人工蛹虫草培养基残基提取虫草素的研究
目的:探索人工蛹虫草培养基残基中虫草素的纯化技术,为进一步工业纯化打下基础.方法:经收割子实体的人工蛹虫草培养基残基先用石油醚脱脂,残渣干燥后以热乙醇提取得浸膏,浸膏转水溶后调节等电点,再用活性炭脱色,脱色后的溶液后过732阳离子交换树脂以NH3·H2O洗脱液洗脱.结果:所得虫草素纯度约为80%,总得率约为1‰.结论:该提取方案设计合理、操作简便,便于工业化生产.
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人工蛹虫草子实体中游离麦角甾醇的提取及含量测定
目的:从人工蛹虫草子实体中提取游离型麦角甾醇,并测定其含量.方法:采用正交设计法筛选麦角甾醇佳提取条件,用HPLC法测定麦角甾醇含量.结果:麦角甾醇在5.8～58.0μg·ml-1范围内线性关系良好(r=O.999 9),平均加样回收率为99.5%(RSD=1.3%).结论:该提取方法快速、简便,结果准确、可靠.
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人工蛹虫草子实体提取物对肾小球系膜细胞增殖的影响
目的:探讨人工蛹虫草不同溶剂提取部位对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响.方法:系膜细胞与不同溶剂提取物共同培养或加入LPS刺激细胞增殖,培养68 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(Mar)法观察人工蛹虫草不同溶剂提取物对培养的肾小球系膜细胞增殖的影响.结果:正丁醇提取物在2-250μg·ml-1浓度范围内呈浓度依赖性抑制系膜细胞增殖;乙酸乙酯提取物的抑制浓度为0.51～100μg·ml-1,甲醇提取物的抑制浓度为62.5～250.0μg·ml-1,而水提醇沉提取物在0.5～12.5μg·ml-1范围内具有促进系膜细胞增殖作用;乙醇提取物作用不明显.结论:人工蛹虫草子实体存在对肾小球系膜细胞增殖有抑制和促进作用的成分.
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人工蛹虫草子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
目的:观察人工蛹虫草子实体及其不同提取物对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,分析其影响免疫功能的有效提取部位.方法:以不同浓度提取物与脾细胞共孵育72h,采用MTT法测定淋巴细胞的增殖,观察提取物对淋巴细胞增殖的影响.另以10 mg·kg-1,30 mg·kg-1剂量人工蛹虫草子实体的水提取物及微粉化原药水溶液小鼠ig给药11 d,制备脾淋巴细胞悬液,培养72h后测定细胞增殖.结果:在体外,水提取物有显著增强脾淋巴细胞增殖效应,且与ConA和LPS有协同促增殖效应,水提醇沉提取物可促进正常淋巴细胞增殖,而对ConA、LPS活化后的增殖无明显影响;甲醇提取物对淋巴细胞增殖有抑制作用.体内给予水提物和子实体微粉水溶液两个剂量也均显示促进淋巴细胞的自然增殖作用(P＜0.05),但对ConA或LPS活化后的淋巴细胞无协同作用.结论:人工蛹虫草子实体含有免疫促进和免疫抑制的成分.其水溶性和中等浓度的醇溶性成分有免疫促进作用.甲醇提取物抑制淋巴细胞增殖.
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高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草子实体中核苷类成分的含量
目的:建立高效液相测定人工培养蛹虫草子实体中核苷类成分含量的方法.方法:采用KNAUER Eurospher-100C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-50mmol·L-1磷酸二氢钾(7∶93)为流动相,检测波长为260 nm.结果:测定3批人工培育蛹虫草中核苷类成分的含量,腺苷、腺嘌呤、虫草素的平均含量分别为0.14%,0.0095%,0.42%.结论:本方法能同时测定人工蛹虫草中多种核苷类成分的含量,具有较高的灵敏度,操作简单,可用于人工蛹虫草的质量评价.
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人工蛹虫草HPLC指纹图谱的建立
目的:建立人工蛹虫草药材的高效液相色谱指纹图谱.方法:收集11个不同产地的蛹虫草样品,用HPLC法测定色谱图,采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件生成指纹图谱,并对其进行相似度评价.结果:所建立的指纹图谱检测方法操作简单,重现性、稳定性和精密度均良好,得到具有14个共有峰的指纹图谱,各批样品图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.9以上.结论:建立了准确、快速、简便的指纹图谱检测方法,所得到的指纹图谱适用于蛹虫草质量控制.
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人工蛹虫草中核苷类化学成分的研究
目的:研究人工蛹虫草Cordyceps militaris中核苷类化学成分.方法:建立人工蛹虫草中核苷类化合物的提取方法并用色谱水法分离各个核苷类化合物.结果:分离鉴定了4个化合物,分别是尿嘧啶核苷(1)、腺嘌呤核苷(2)、鸟嘌呤核苷(3)和酪氨酸(4).结论:从核苷类物质分析来看,该人工蛹虫草菌丝体中核苷类物质含量丰富,主要为化合物1、2、3,三者总和约占菌丝体干重的1.3%.
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人工蛹虫草总核苷提取工艺优化考察
目的:优化考察利用大孔吸附树脂纯化提取分离人工蛹虫草总核苷的工艺方法.方法:通过正交设计优化总核苷的提取分离条件,用高效液相色谱分析和检测各组分.结果:佳提取条件为样品在10倍量水中80℃水浴提取3次,每次2 h,滤液合并,减压浓缩后上AB-8弱极性大孔树脂柱,蒸馏水洗脱除去多糖类大分子物质.以30%乙醇洗脱得总核苷提取液,减压浓缩,真空干燥后得到人工蛹虫草总核苷.结论:利用色谱法对提取过程中与提取液前体及中间体进行了比较分析,结果显示该工艺具有简单、快速、高效等优点.
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人工蛹虫草药材高效毛细管电泳指纹图谱研究
目的:利用高效毛细管电泳(HPCE)技术建立人工蛹虫草药材的指纹图谱.方法:采用50 cm×75 μm毛细管柱,以0.5 mmol/L硼砂溶液为缓冲液,运行电压为20 kv,检测波长为254 nm,柱温25℃.结果:建立的指纹图谱中共有11个共有峰,且方法学考察符合规定的标准.结论:该法准确简便,可作为控制人工蛹虫草中药材内在质量的有效手段.
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人工蛹虫草成分的提取分离研究
目的 以人工蛹虫草为原料提取分离其有效成分.方法 采用碱液室温浸提、乙醇沉淀法得到人工蛹虫草粗多糖CBP.结果 通过离子交换柱DEAE-Cellulose 52分离,得到2种人工蛹虫草多糖:人工蛹虫精多糖CBP-1和人工蛹虫草精多糖CBP-2.结论 由凝胶过滤色谱的洗脱图谱可见,精多糖CBP-1、CBP-2的洗脱图谱均为单一、对称的峰形,故可认为所分离、纯化得到的多糖CBP-1、CBP-2为纯品.
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HPLC法同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分的含量
目的:建立同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Inert-Sustain C18,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为0.6 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃.结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素检测进样量线性范围分别为0.568~3.408μg(r=0.9999)、0.284~1.704μg(r=0.9999)、0.264~1.584μg(r=0.9999)、0.232~1.392μg(r=0.9999)、1.672~10.032μg(r=0.9998);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为98.2%~103.9%(RSD=1.97%,n=9)、96.2%~101.6%(RSD=1.76%,n=9)、96.7%~102.0%(RSD=1.94%,n=9)、95.1%~99.4%(RSD=1.43%,n=9)和95.6%~101.3%(RSD=1.82%,n=9).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于人工蛹虫草中5种核苷类成分含量的同时测定,蛹虫草不同部位中所含核苷类成分含量不同.
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ICP-MS法同时测定人工蛹虫草中4种重金属元素的含量
目的:建立同时测定人工蛹虫草中4种重金属元素含量的方法.方法:采用硝酸加热法消解样品,采用电感耦合等离子体质谱法进行测定:射频功率为1.15 kW,采样深度为65 mm,辅助气流速为1.0 L/min,冷却气体流量为13.0 L/min,环境温度为25℃,自动等离子体观测.结果:砷、镉、汞、铅检测质量浓度线性范围分别为0~20μg/mL(r=0.9970)、0~10μg/mL(r=0.9995)、0~5μg/mL(r=0.9955)、0~20μg/mL(r=0.9960);检测限分别为0.128、0.003、0.002、0.004 mg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<6.5%;加样回收率分别为90.4%~100.6%(RSD=3.45%,n=9)、94.3%~101.3%(RSD=2.93%,n=9)、90.0%~102.3%(RSD=4.03%,n=9)、92.3%~103.0%(RSD=3.53%,n=9).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于人工蛹虫草中4种重金属元素含量的同时测定;所测10批人工蛹虫草中As、Cd、Hg、Pb 4种重金属元素含量均符合国家相关标准.
关键词： 人工蛹虫草 重金属 电感耦合等离子体质谱 -
用色谱技术测定人工蛹虫草中有效成分的含量
目的:建立人工蛹虫草中有效成分虫草素、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量测定方法.方法:用高效液相色谱法,以C18(250mm×4.0 mmI.D.,5μm)为色谱柱;以甲醇(10%～60% in 30 min)-水(90%～40% in 30 min)体系为流动相,在流速l ml/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样量10μl的条件下对样品中有效成分的含量进行分析测定.结果:人工蛹虫草中上述5种含量分别为725.64,1125.58,382.05,26.77,22.32μg/g.结论:该法快速简便、重现性好,能有效测定样品中有效成分.
