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钒化钠对人食管癌细胞系EC109的增殖抑制作用与诱导凋亡作用
目的 探索不同浓度钒化钠对食管癌细胞系EC109的抑增殖和促凋亡作用.方法 体外培养食管癌细胞系EC109,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0和200.0μmol/L钒化钠处理,分别培养15、30min、1、2和4h后,通过Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1与细胞凋亡蛋白Caspase-3在不同时间、不同浓度的表达变化.给予以上相同浓度的钒化钠分别处理细胞4、12、24和48h后,MTT法与流式细胞术检测不同时间、不同浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109细胞株的增殖与周期影响.结果 蛋白印迹结果显示,在100～200μmol/L的浓度范围内随着钒化钠药物浓度的增加,药物处理时间的延长,Cyclin D1的表达呈现逐渐下降的趋势(P＜0.05);当钒化钠浓度小于10μmol/L时,Caspase-3的表达变化无统计学意义(P＞0.05),当处理浓度达到50μmol/L或者更高以及处理时间达到30min甚至更长时,Caspase-3的蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT法结果显示,钒化钠浓度达到50～200μmoL/L时,EC109细胞的增值受到抑制(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,当钒化钠浓度为50～200μmol/L时,随着处理时间24和48h时的增加,EC109细胞被阻滞在S期,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109的生长,表现出一定的抗肿瘤作用,为钒化钠成为食管癌的临床治疗药物提供实验依据.
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食醋干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞凋亡及Survivin表达的影响
目的研究长期高醋饮食 SD大鼠血清诱导食管癌 EC109细胞凋亡及其对 Survivin蛋白表达的影响。
方法采用普通 SD大鼠血清和长期高醋饮食条件下 SD大鼠血清培养食管癌 EC109细胞。I组：以含20%灭活普通 SD大鼠血清培养液培养食管癌 EC109细胞；II组：以含20%灭活长期高醋饮食干预条件下 SD大鼠血清培养液培养食管癌 EC109细胞；应用流式细胞仪分别采用 Annexin V-EGFP/PI双染法和亚倍体峰法检测两组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率；应用 Western blot方法检测 Survivin蛋白的表达水平。
结果 II组细胞凋亡率明显高于 I组，有统计学差异（P <0.05）；II组细胞中 Survivin蛋白的表达水平明显低于 I组，差异有统计学显著意义（P <0.05）。
结论长期高醋饮食 SD大鼠血清能促进食管癌 EC109细胞的凋亡并抑制 Survivin蛋白的表达。关键词： 食管肿瘤 细胞凋亡 食醋 Survivin蛋白 EC109细胞 -
叶酸受体在食管癌细胞中的表达及其与食管癌生物学行为的关系
目的 研究PI3K/AKT信号通路靶向抑制剂LY294002对食管癌细胞EC109中FR的表达的影响,从而了解食管癌生物学行为与叶酸受体的关系.方法 将LY294002作用于食管癌细胞株EC109,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测食管癌细胞FR的表达.结果 随LY294002浓度的增加及作用时间(12h、24h)的延长,实验组EC109细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关.LY294002干预食管癌细胞24小时后,实验组叶酸受体表达的表达较对照组明显降低.结论 阻断PI3K/AKT信号通路可以改变食管癌细胞株EC109中FR的表达,并能明显抑制细胞增殖,其机制可能与其抑制AKT磷酸化,从而改变食管癌细胞的生物学行为有关.
关键词： PI3K/Akt信号通路 LY294002 EC109细胞 FR -
腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制
目的 探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用.方法 腺苷2 mmol·L-1作用于EC109细胞24 ～72 h或腺苷0.5 ～4 mmol·L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系；免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78( GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB (NF-κB)的表达及亚细胞定位；原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡；Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达.结果 腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用.腺苷2 mmol·L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)％,(56.5±11.1)％,(43.8±5.7)％和(28.8±4.1)％,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P＜0.01)；腺苷0.5,1,2和4 mmol· L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±1 1.2)％,(67.9±6.7)％,(55.3±5.0)％和(45.4±5.4)％,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P＜0.01).腺苷0.5 ～4mmol·L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)％,(28.2±0.8)％,(40.1±2.2)％和(50.6±1.3)％,与对照组(2.1±0.3)％相比均明显增加(P＜0.05).腺苷2 mmol· L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P ＜0.05,P＜0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位.GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,(r)胱天蛋白酶4=0.8977,(r)胱天蛋白酶3=0.968,(r)CHOP=0.9762,(r)NF-κB=0.9471,P＜0.05).结论 腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关.
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大蒜素干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨长期大蒜素干预下SD大鼠血清对食管癌EC109细胞增殖以及凋亡的影响.方法 采用普通SD大鼠血清和长期大蒜素干预条件下SD大鼠血清培养食管癌EC109细胞.Ⅰ组:以普通灭活SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;Ⅱ组:以大蒜素干预SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞;应用流式细胞术测定细胞周期分布,并计算细胞S期分数和增殖指数;采用AnnexinV-EG-FP/PI双染法和亚倍体峰法应用流式细胞仪检测早期和中晚期凋亡率.结果 Ⅱ组G2/M期及S期细胞比例明显低于Ⅰ组,而Go/G1期细胞比例明显升高;Ⅱ组S期分数及细胞增殖指数显著低于Ⅰ组(P＜0.05),差异有统计学意义.Ⅱ组细胞凋亡率明显高于Ⅰ组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 长期大蒜素干预下SD大鼠血清对食管癌EC109细胞的增殖活性具有明显的抑制作用并能促进食管癌EC109细胞的凋亡.
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大蒜素干预下大鼠血清对食管癌 EC109细胞凋亡及Survivin 表达的影响
目的：研究大蒜素干预下SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响。方法Ⅰ组：以普通灭活SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞；Ⅱ组：以大蒜素干预SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞；采用AnnexinⅤ－EGFP／PI双染法和亚倍体峰法应用流式细胞仪检测2组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率；Survivin蛋白的表达应用Westernblot方法检测。结果Ⅱ组细胞凋亡率明显高于Ⅰ组，差异有统计学意义（ P ＜＜0．05）；Ⅱ组细胞中Survivin 蛋白的表达水平明显低于Ⅰ组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论长期大蒜素干预下SD大鼠血清能促进食管癌EC109细胞的凋亡并抑制Survivin蛋白的表达。
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抗人DR5抗体mDRA-6诱导EC109细胞自噬和凋亡
目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb) mDRA-6对EC109细胞自噬和凋亡诱导作用.方法:M TT法检测mDRA-6细胞毒性;MDC染色和Hoechst 33258染色,观察mDRA-6诱导细胞自噬、凋亡形态学变化;流式细胞术定量分析mDRA-6诱导细胞自噬率和凋亡率.结果:mDRA-6具有细胞毒性,0.024～25 mg/L mDRA-6作用细胞呈时间剂量依赖性,各组间差异具有统计学意义(P＜0.01),10 h的IC50值为0.78 mg/L;经mDRA-6处理EC109细胞出现核固缩、染色质边缘化和形成凋亡小体等;同时细胞浆中出现自噬体;流式细胞术测定结果显示,2.0 mg/L mDRA-6作用细胞10 h,细胞自噬率和凋亡率分别为19.44％和54.88％.结论:mDRA-6可引起EC109细胞自噬和凋亡;mDRA-6通过诱导EC109细胞自噬和凋亡抑制细胞生长.
关键词： 抗DR5单克隆抗体(mDRA6) EC109细胞 自噬 凋亡 -
Notch1通路活化抑制EC109细胞的增殖及机制探讨
背景与目的:Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)早期蛋白E6和E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖.人食管鳞状细胞癌细胞系EC109细胞为HPV18阳性细胞.本研究将Notch1胞内段(intracellular domain of Notch,ICN)转入EC109细胞,导致EC109细胞中Notch通路的组成性活化,从而探讨Notch通路活化与EC109细胞增殖的关系及机制.方法:用脂质体转染法将ICN转入体外培养的EC109细胞,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR检测HPV18E6/E7基因的表达:用Western印迹法检测周期蛋白激酶抑制因子p53的表达.结果:ICN转染入EC109细胞后,EC109细胞增殖受抑;细胞周期阻滞在G_2/M期,转目的基因组G_2/M期细胞所占比例[(42.57±1.57)%]与未转染组[(1.88±0.66)%]及转空质粒组[(1.994±1.02)%]相比差异均有显著性(P<0.01).E6/E7基因表达降低:p53表达升高,转ICN组(2.154±0.23)与未转染组(0.45±0.07)及转空质粒组(0.464±0.02)相比差异均有显著性(P<0.01).结论:Notch1通路活化可以抑制HPV18 E6/E7基因的表达,导致p53通路的活化,使HPV18阳性EC109细胞增殖周期阻滞于G_2/M期,抑制EC109细胞的生长.
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桥接整合因子1去甲基化诱导细胞周期阻滞抑制食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖
目的:分析桥接整合因子1 (bridging integrator-1,Bin1去甲基化对Bin1基因表达和食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测去甲基化药物5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)处理后EC109细胞Bin1启动子区域的甲基化状态,用qPCR、Westem blotting和MTT法分别检测单独5-Aza-dc和5-Aza-dc加转染Bin1基因干扰片段(Bin1 siRNA)处理对EC109细胞Bin1 mRNA及其蛋白表达和细胞增殖能力的影响,流式细胞术和Western blotting检测5-Aza-dc处理后EC109细胞周期和细胞周期相关蛋白(CyclinDl与CDK4)表达的变化.结果:去甲基化药物5-Aza-dc处理后,EC109细胞Bin1基因启动子区域发生去甲基化.5-Aza-dc处理的Bin1去甲基化EC109细胞Bin1 mRNA和蛋白表达明显上调(均P＜0.05),细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),细胞阻滞在G0/G1期,表现为S期细胞比例显著减少,细胞周期相关蛋白CyclinD、CDK4表达均明显下调(均P＜0.05).Bin1去甲基化EC109细胞转染Bin1 siRNA后,Bin1 mRNA和蛋白表达明显下调,细胞增殖能力增强(均P＜0.05).结论:Bin1基因启动子区域在EC109细胞中呈完全甲基化状态,5-Aza-dc去甲基化可使食管鳞癌细胞EC109细胞Bin1表达升高,通过降低细胞周期相关蛋白表达诱导细胞周期阻滞抑制EC109细胞增殖.证实表观遗传学变化可能与食管癌细胞恶性增殖有关,可为食管癌治疗提供新的思路.
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沉默ABCE1基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响
目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响.方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞.RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell 法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力.结果:ABCEl-EC109细胞中ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-EC109细胞明显降低[(0.47 ±0.04) vs (0.67 ±0.05),(0.63 ±0.09) vs (0.86 ±0.11)；均P＜0.05].与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢[(2.20 ±0.10) vs (2.91 ±0.13),P＜0.05],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多[(76.5±3.1)％vs(56.1±2.7)％,P＜0.05)]；细胞的凋亡率明显升高[(15.46 ±3.12)％vs(0.54±0.24)％,P＜0.01],迁移、侵袭能力均显著下降[迁移:(8.12 ±0.23)vs(1.91 ±0.11) μm,P＜0.05;侵袭:(42.56 ±4.68) vs(68.78 ±6.98)个,P＜0.01].结论:电转法沉默ABCE1基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移.
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靶向GRP78的miRNA表达载体对人食管癌EC109细胞增殖的抑制作用
目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响.方法:设计合成4对针对GRP78的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,构建靶向GRP78的miRNA重组质粒:pcDNATM6.2-miR78-1、pcDNATM6.2-miR78-2、pcDNATM6.2-miR78-3、pcDNATM6.2-miR78-4,并通过脂质体法转染至HEK293细胞；杀稻瘟菌素筛选2周形成稳定转染细胞系；荧光显微镜检测转染效率.将筛选出的佳干扰质粒转染至EC109细胞,采用RT-PCR法检测GRP78 mRNA的表达,CCK8法检测其对EC109细胞增殖的影响.结果:测序结果表明成功构建4种靶向GRP78的miRNA重组质粒,经转染和筛选,所有转染后HEK293细胞均有GFP的表达；与未转染组及阴性对照组(pcDNATM6.2-Ctrl)相比,4种干扰质粒组HEK293细胞中GRP78 mRNA的表达均下降(P＜0.05)；干扰效率以转染pcDNATM6.2-miR78-1为高.pcDNATM 6.2-miR78-1转染EC109细胞,与未转染组、pcDNATM6.2-Ctrl组相比,EC109细胞中GRP78 mRNA的表达明显下降[(0.38±0.02)vs(1.03±0.04)、(1.00±0.03),均P＜0.05].CCK8法检测结果显示,转染pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒12、24、48、72 h后,EC109细胞的增殖被显著抑制[(0.028±0.001) vs (0.086±0.010),(0.035 ±0.003) vs (0.155 ±0.011),(0.112±0.009) vs (0.389 ±0.008)、(0.169 ±0.013) vs (0.433 ±0.009)；均P＜0.05].结论:4对靶向GRP78的miRNA表达载体构建成功,其中pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒沉默效果佳,能有效抑制EC109细胞的增殖.
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通幽汤及其拆方对食管鳞癌细胞的抑制作用及其机理研究
目的:从细胞凋亡信号通路角度揭示通幽汤对食管鳞癌细胞抑制作用的机理,确定从功效分类的有效药物群.方法:体外培养食管鳞癌EC109细胞,通幽汤全方及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞存活率,免疫印迹法观察Caspase-3凋亡信号通路蛋白表达变化情况.结果:全方组IC50=798μg/mL,活血行气拆方组IC50=1413μg/mL,滋阴养血拆方组IC50=1709μg/mL,3组方均可促进p53、cyto-C、Caspase-3、Bax凋亡蛋白表达,作用强弱依次为全方＞活血行气拆方＞滋阴养血拆方.结论:通幽汤抑制食管鳞癌细胞增殖与促Caspase-3凋亡信号通路有关,其药效在于活血行气、滋阴养血类药物的协同作用.
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2,6-二氰基-3-吡啶基-5-雄甾烯基苯胺对食管癌EC109细胞周期及凋亡的影响
目的:观察小分子甾族多取代苯胺化合物2,6-二氰基-3-吡啶基-5-雄甾烯基苯胺(简称4d)对食管癌EC109细胞增殖、周期、凋亡的影响.方法:MTT法检测0.40～100.00 μmol/L的4d作用于正常的食管上皮细胞Her-1a或食管癌细胞EC109 48 h或72 h后,对正常细胞及癌细胞的增殖抑制作用,筛选出4d对食管癌细胞佳作用时间及浓度;4d作用24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;4d作用6h后,使用JC-1染料染色,采用高通量筛选系统检测细胞线粒体膜电位;4d作用24 h后,采用Western blot法检测Bel-2家族中Bcl-2、Mcl-1、Bax蛋白表达的变化.结果:4.0 μmol/L 4d能引起EC109细胞凋亡率升高,S期阻滞,线粒体功能障碍,Mcl-1表达下降(P＜0.05).结论:4d能抑制EC109细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起S期阻滞;其机制可能与Bel-2凋亡家族介导的线粒体功能障碍有关.
关键词： 甾族多取代苯胺化合物 EC109细胞 Bcl-2家族 细胞凋亡 -
冬凌草活性成分 KY3对食管癌 EC109细胞增殖的抑制作用
目的：探讨冬凌草活性成分KY3对食管癌细胞EC109增殖的抑制作用及其机制。方法：MTT法测定0、10、20、30、40、60、80、100μmol／L KY3对EC109细胞增殖的影响；流式细胞术检测0、10、20、30μmol／L KY3对EC109细胞凋亡和细胞周期分布的影响，免疫荧光法观察KY3对EC109细胞中微管结构的影响，Hoechst 33258染色观察KY3作用后EC109细胞核的形态。结果：KY3能够抑制EC109细胞的体外增殖；KY3处理后EC109细胞周期阻滞在G2／M期并发生凋亡（P＜0．05）；KY3作用于EC109细胞后，微管遭到破坏，随着KY3剂量的增加，α-微管蛋白逐渐发生降解并出现细胞核固缩、浓染等典型的凋亡形态。结论：冬凌草活性成分KY3在体外对EC109细胞具有增殖抑制作用，其机制可能与破坏细胞微管结构、G2／M期细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡有关。
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AZIN1慢病毒的制备及 EC109稳定感染细胞株的建立
目的：制备野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立稳定感染的食管癌EC109细胞株。方法：用RT-PCR法从人食管鳞状细胞癌组织中扩增出AZIN1基因的cDNA序列，选取测序结果中目标位点的A峰与G峰均高且与NCBI公布的基因编码序列一致的PCR产物，克隆至慢病毒表达载体pLenti6／V5-D-TOPO，构建野生型和编辑型AZIN1的重组慢病毒表达载体，经酶切和测序鉴定后，经293 FT细胞包装，制备相应的慢病毒，然后感染EC109细胞株，行RT-PCR、测序和Western blot鉴定稳定感染的EC109细胞株。结果：双酶切重组慢病毒表达载体后产生了1347 bp和6915 bp的片段，经测序证实1347 bp片段为正确的AZIN1基因编码序列；RT-PCR、测序和Western blot结果证实成功建立了稳定感染的EC109细胞株。结论：成功制备了野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立了稳定感染的EC109细胞株。
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番石榴黄酮提取液对HeLa细胞及Ec109细胞生长的影响
目的 研究番石榴黄酮提取液对HeLa细胞和Ec109细胞生长的抑制作用.方法 以番石榴叶和果实的粗黄酮提取液为受试液,采用体外细胞培养法,MTT法检测其对HeLa及Ec109细胞的生长抑制率.结果 番石榴叶或果实的粗水溶性黄酮液和粗醇溶性黄酮液,均能较强抑制两种癌细胞生长.5.000 mg/L的番石榴叶粗水溶性黄酮抑制HeLa细胞生长作用大,抑制率达70.84%;0.100 mg/L的叶粗醇溶性黄酮抑制Ec109细胞生长作用大,抑制率达69.95%.结论 番石榴粗黄酮液在体外可显著抑制HeLa细胞和Ec109细胞的生长.
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PI3K/Akt信号通路抑制剂对食管癌细胞EC109中FR和hnRNP-E1表达的影响
目的 研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响.方法 不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,免疫印迹法(Westorn blot)检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、FR和hnRNP-E1的表达情况.结果 MTT法检测结果显示,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关趋势,P-Akt和FR蛋白表达明显下降,hnRNP-E1蛋白表达无显著变化.结论 阻断PI3K/Akt信号通路可以改变人食管癌细胞EC109中FR的表达,并明显抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化有关.
关键词： PI3K/Akt信号通路 LY294002 EC109细胞 叶酸受体 -
吗啡对人食管癌细胞Ec109生长及p53、caspase-3基因表达的影响
目的 研究吗啡对人食管癌Ec109细胞生长及其可能的作用机制.方法 取对数生长期食管癌Ec109细胞,随机分为实验组和对照组,实验组按照吗啡不同作用浓度分为3个亚组:M1组(0.1 μmol/L)、M2组(10 μmol/L)、M3组(1000 μmol/L);对照组加入等容量的RPMI-1640培养基.各组分别作用24 h、48 h和72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;作用48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR测定p53和caspase-3基因的表达.结果 与对照组比较,实验组M1组、M2组、M3组细胞增殖抑制率均显著升高(P＜0.01),且随吗啡浓度增加和时间延长,各实验组细胞增殖抑制率增加,呈时间和浓度依赖性(P＜0.01);各实验组细胞凋亡率和G1期细胞比例均明显升高(P＜0.05),且随吗啡作用浓度增加而升高明显,呈浓度依赖性(P＜0.05),各实验组细胞p53 mRNA和caspase-3 mRNA的表达量均显著升高(P＜0.05),且随吗啡作用浓度的增加而升高,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 吗啡可抑制食管癌Ec109细胞生长并促进其凋亡,其作用机制可能与促进p53和caspase-3基因表达有关.
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热疗通过提高活性caspase-3的表达促进食管癌EC109细胞凋亡
目的:探讨不同温度热疗诱导食管癌EC109细胞的生长抑制、细胞凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达变化的关系.方法:采用PCR仪精确控制温度,对食管癌EC109细胞行37℃(对照),43℃,45℃,47℃热疗处理,四甲基偶氮唑蓝(Tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞生长抑制率,碘化丙啶(Propidium iodide,PI)/磷脂结合蛋白V(Annexin Ⅴ)双染流式细胞仪测定细胞凋亡率,蛋白印迹(Western bolt)法检测caspase-3蛋白表达.结果:食管癌细胞在37℃,43℃,45℃处理下,细胞生长抑制率随温度升高而增多,并有显著性差异,43℃细胞凋亡率达到高,三者差异显著.45℃和47℃生长抑制及凋亡率均无明显差异.总-easpase-3(pro-caspase-3)表达随温度升高而增多,而活性csapase-3(actived -caspase-3)在43℃表达多.结论:热疗通过提高活性caspase-3表达诱导食管癌EC109细胞凋亡,在43℃凋亡率达到高.
关键词： 热疗 食管癌 EC109细胞 凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-3 -
肿瘤转移抑制基因-1在食管鳞癌组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义
目的 探讨肿瘤转移抑制基因-1 (TMSG-1)在食管鳞癌(ESCC)组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义.方法 采用SP免疫组织化学染色法检测136例ESCC及37例正常食管黏膜组织中TMSG-1蛋白的表达情况,分析TMSG-1与ESCC患者临床病理指标的关系;培养人食管癌EC109细胞并用常用化疗药物顺铂(CDDP)干预,同时设对照组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,半定量RT-PCR法检测细胞TMSG-1的表达情况.结果 TMSG-1在ESCC和正常食管黏膜的阳性率分别为52.2％(71/136)、94.6％(35/37),差异具有统计学意义(P＜0.05).TMSG-1的异常表达与ESCC组织学分级、患者的TNM分期、淋巴结转移情况相关.顺铂干预组EC109细胞的增殖抑制率较对照组显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR结果显示,干预组EC109细胞TMSG-1的mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01).结论 TMSG-1的异常表达与ESCC的发展及转移相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助诊断并指导临床治疗.
