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MAPKs在Bcl-2家族调控细胞凋亡中的作用
Bcl-2家族是细胞凋亡重要的调控因子之一,在细胞凋亡通路中发挥着重要的调节作用.MAPKs信号传导通路参与的细胞内激酶级联反应是细胞外界信号传递到细胞核内、调节基因表达的重要通路,是细胞质和细胞核信号之间的枢纽.研究表明,MAPKs信号传导通路与Bcl-2家族有着密切的关系.本文就MAPKs如何作用于Bcl-2家族来调节细胞凋亡进行综述.
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漆姑草醇提物对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:研究漆姑草醇提物(HSJ)对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其诱导凋亡的分子机制.方法:采用不同浓度的HSJ作用HL-60细胞后,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态变化;Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:HSJ作用后HL-60细胞出现浓染致密的颗粒状荧光及明显的核形态变化;与阴性对照组相比,凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达水平增高,Bcl-2/Bax蛋白的比值降低,差异具有统计学意义(Pp＜0.05).结论:HSJ能诱导HL-60细胞凋亡,其作用可能与降低Bcl-2/Bax蛋白的比值,增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平有关.
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下调Bcl-2家族蛋白促进MTB感染的小鼠巨噬细胞系凋亡
目的 探讨Mcl-1shRNA靶向下调Mcl-1的表达后,Bcl-2家族蛋白对不同毒力结核杆菌感染的小鼠Raw264.7巨噬细胞凋亡的调控作用.方法 用XJ-MTB、H37Rv、H37Ra和卡介苗(BCG)感染小鼠Raw264.7巨噬细胞,并用Mcl-1 shRNA作用于感染的巨噬细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2家族蛋白Mcl-1和Bax的表达;实时荧光定量PCR检测Mcl-1、Bcl-2、Bax、caspase-3与细胞色素C mRNA的表达.结果 1)不同毒力的MTB感染可诱导小鼠Raw264.7巨噬细胞的凋亡,靶向下调Mcl-1的表达可显著提高XJ-MTB和H37Rv感染的宿主巨噬细胞的凋亡率.2)XJ-MTB和H37Rv感染可显著上调Bcl-2家族抗凋亡成员Mcl-1与Bcl-2的表达,应用Mcl-1 shRNA沉默Mcl-1基因后Mcl-1与Bcl-2水平显著下降,同时增高Bax的表达.3)不同毒力的MTB感染小鼠Raw264.7巨噬细胞后caspase-3和细胞色素C表达升高,靶向下调Mcl-1可以进一步上调感染组caspase-3和细胞色素C的表达.结论 MTB感染后小鼠Raw264.7巨噬细胞中Bcl-2家族蛋白与基因的表达水平与菌株毒力相关,应用Mcl-1shRNA下调Mcl-1的表达可以促进宿主巨噬细胞的凋亡.
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穴位埋线对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响
目的 观察穴位埋线疗法对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA及BaxmRNA表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制.方法 采用改良Pulsinelli's 4血管阻断法建立VD大鼠模型,随机数表法分为VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,并设置假手术组作为对照.两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗.Moms水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力后,取含海马的脑组织,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,原位杂交法检测其Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达,观察并比较各组大鼠海马神经细胞凋亡、蛋白表达的变化.结果 VD模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡细胞、Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA的表达增高,与假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).VD模型组表现出明显的学习记忆障碍,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.01);与VD模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力显著提高(P＜0.01),CA1区凋亡细胞明显减少(P＜0.01),可见一定数量的Bcl-2 mRNA阳性细胞表达,而Bax mRNA阳性细胞表达较少.结论 穴位埋线可通过上调VD大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA的表达、下调Bax mRNA的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力.
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Bcl-xL可能介导组织蛋白酶D相关的K562细胞凋亡
组织蛋白酶(cathepsin)D在氨基葡萄糖硫酸盐(glucosamine sulfate,GS)诱导的慢性髓系白血病K562细胞凋亡过程中为激活线粒体途径的可能的中介分子.为了探讨Bcl-xL在氨基葡萄糖硫酸盐诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡中的可能作用,在倒置显微镜下动态观察细胞生长变化,采用瑞氏-姬姆萨染色观察细胞加药前后的形态学改变,间接免疫荧光法观察GS诱导K562细胞凋亡过程中cathepsin D和细胞色素(cytochrome)C的转位情况,Western blot检测K562细胞凋亡过程中Bcl-xL、Bax、Bid蛋白的表达变化.结果表明:5 mmol/L氨基葡萄糖硫酸盐作用于K562细胞72小时后,细胞增殖受到明显抑制,胞浆出现空泡化;荧光显微镜显示cathepsinD和cytochrome C的荧光信号由颗粒状趋向弥散;Bcl-xL蛋白在GS加药组中表达减低,甚至消失,但在抑胃酶肽(pepstat1n)A预处理后的加药组中表达没有明显改变,Bax和Bid蛋白表达在凋亡前后没有明显变化.结论:Bcl-xL蛋白在GS诱导白血病K562细胞凋亡过程中可能介导cathepsin D与线粒体途径之间的联系.
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Bcl-2家族对骨骼肌细胞运动适应性的调控机制研究进展
运动性骨骼肌细胞自噬、凋亡能将氧化应激产生的活性氧(ROS)、受损细胞器、错误折叠蛋白质以及损伤严重的细胞组织等转运到溶酶体中消化降解,以维持肌细胞正常能量代谢、控制炎性损伤,进而提高骨骼肌细胞运动适应性.B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)家族是控制细胞凋亡的主要调节蛋白,也可定位在内质网上靶向调控细胞自噬.近些年,多项研究显示Bcl-2家族协同胞内Ca2+信号、氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化通路、P53基因以及泛素蛋白Atg12等串流在自噬和凋亡之间.本文在总结Bcl-2家族调控骨骼肌运动适应性基础上,重点论述它们对运动性骨骼肌自噬、凋亡的定位和串流调控机制,以期为运动性骨骼肌相关代谢疾病、运动损伤等提供新思路.
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五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌HO-8910细胞凋亡调控基因表达与胱天蛋白酶凋亡途径的影响
目的 探讨五没食子酰基葡萄糖(PGG)诱导卵巢癌H0-8910细胞凋亡的作用及诱导胱天蛋白酶凋亡途径的机制.方法 PGG 10,20,40和80μmol·L-1处理H0-8910细胞48,72和96 h后,MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33258染色观察HO-8910细胞核形态改变,AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率；Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶酶原及活性形式；RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、Bcl-XL、凋亡抑制因子1(CIAP-I)、CIAP-2、存活蛋白、神经元凋亡抑制蛋白(NIAP)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和细胞周期蛋白DI mRNA表达.结果 PGG 10～80 μmol·L-1分别作用48,72和96 h,随浓度的增加,细胞存活率明显降低,r分别为0.93,0.95和0.86(P＜0.05).PGG 40 μmol·L-1使HO-8910细胞的细胞核染色质固缩,出现凋亡形态学改变,早期凋亡率从正常对照组的(0.6±0.1)％分别增加到(3.4±1.1)％,(9.8±3.7)％和(19±4.5)％,对晚期凋亡率影响不明显.PGG 20～80 μmol·L-1使HO-8910细胞内胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶7和胱天蛋白酶9及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切水平增加,PGG20～80 μmol·L,均抑制死亡受体FAS的蛋白表达水平并使胱天蛋白酶8总剪切水平降低.PGG 20～80 μmol·L-1抑制HO-8910细胞中细胞周期蛋白D1,Bcl-2,Bcl-XL和NIAP mRNA的表达,上调CIAP-1 mRNA 的表达,对基因Bax,CIAP-2和XIAP mRNA表达影响不明显；PGG 20 μmol·L-1抑制存活蛋白基因mRNA的表达,但是增加处理浓度却上调存活蛋白基因mRNA的表达.结论 PGG可能通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL的表达从而诱导HO-8910细胞内胱天蛋白酶9依赖的内源性凋亡途径,并诱导细胞凋亡.
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早幼粒白血病在银屑病病人外周血淋巴细胞中的表达及其与p53和bcl-2家族的相关性
目的 研究早幼粒白血病(promyelocytic leukaemia,PML)、p53、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated X protein,bax)在银屑病外周血淋巴细胞中的表达,并评估上述因子之间的相关性.方法 分离25例银屑病病人和20例健康对照的外周血淋巴细胞,通过qRT-PCR和流式细胞学分别检测PML、p53、bcl-2和bax在外周学淋巴细胞中mRNA和蛋白的表达水平.采用Pearson相关性分析评估PML与上述因子之间的相关性.结果 与健康对照相比,银屑病病人外周血淋巴细胞中PML和p53的mRNA及蛋白表达增加,bcl-2的mRNA及蛋白表达下降,bax的mRNA表达下降但蛋白表达增加.PML蛋白表达与p53、bcl-2以及bax蛋白表达呈相关性.结论 PML可能参与了银屑病发病过程.
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Bcl-2家族研究进展
细胞凋亡(apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡[1].细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,由死亡信号诱发的受调节的细胞死亡过程,是细胞生理性死亡的普遍形式.凋亡过程中DNA发生片段化,细胞皱缩分解成凋亡小体,被邻近细胞或巨噬细胞吞噬,不发生炎症.凋亡是多基因严格控制的过程.这些基因在种属之间非常保守,如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等[2].
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幽门螺杆菌诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡机制的研究进展
胃上皮细胞不断发生凋亡和增殖,两者协同作用,从而维持了胃上皮的完整性.目前,已发现多种凋亡诱发因素.在幽门螺杆菌(HP)诱发的胃炎中,虽然上皮细胞凋亡和增殖均增加,但由于细胞凋亡占优势,破坏了胃上皮细胞的完整性而导致相关疾病的发生,其凋亡的发生机制复杂并且相互影响.由幽门螺杆菌引起的胃黏膜上皮细胞凋亡包括内源性和外源性通路,存在于这两种通路中的具有代表性的因子包括Toll样受体4、Bcl-2家族、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体/受体和Fas/FasL等.
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线粒体/细胞色素C介导的凋亡通路的研究进展
线粒体凋亡途径在细胞凋亡信号转导途径中是近年来研究的热门.细胞内外各种刺激信号引起Bcl-2同源结构域3(Bcl-2 homology domain3,BH3)-only蛋白激活,通过Bcl-2家族(B cell lymphoma 2)调控线粒体,使线粒体外膜渗透而导致细胞色素C及(second mitochondri-derived activator of caspase,Smac)流入胞质与凋亡活化因子-1(apoptosis activated factor-1,Apaf-1)及胱天蛋白酶-9(caspase-9)结合形成复合体.caspase-9的激活将引起其下游胱天蛋白酶的级联反应,导致该细胞凋亡.这一过程中有一系列反馈调节如Smac对凋亡抑制蛋白(IAP)的抑制等.
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Bcl-2家族与2型糖尿病胰岛β细胞凋亡
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主有序的死亡.Bcl-2家族是细胞凋亡的关键调节分子,由Bcl-2亚家族、Bax亚家族和BH3亚家族组成.β细胞的功能障碍和凋亡是2型糖尿病发生的重要因素.高血糖、游离脂肪酸、胰淀素等可诱导2型糖尿病β细胞凋亡.Bcl-2家族成员接受诱导凋亡信号后,共同构成一个异常复杂的相互作用网络,调节胰岛β细胞凋亡.
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ERK/MAP激酶抑制剂U0126增强索拉菲尼对原代胃癌细胞的抑制效应
目的:研究ERK/MAP激酶抑制剂U0126是否增强索拉菲尼对原代胃癌细胞的抑制效应,并探索其可能机制.方法:选取病理确诊胃癌患者外科手术标本培养原代胃癌细胞.使用索拉菲尼和U0126分别或同时处理原代细胞.MTT试验检测处理后细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Q-PCR和Western Blotting分别检测转录水平和翻译水平增殖和凋亡相关分子的表达情况.结果:使用索拉菲尼和U0126同时处理的原代胃癌细胞,其增殖明显受到抑制,凋亡增加,并均强于单独处理组.同时处理组中p-ERK和p-Raf表达水平降低,Bim、Bax和Bad水平升高,水平变化均强于单独处理组,P＜0.01.结论:U0126能够增强索拉菲尼抑制胃癌细胞增殖和促进细胞凋亡的效应,其机制可能是二者在抑制ERK/MAPK通路及诱导Bcl-2家族中促凋亡分子表达上有协同效应.
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大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义
目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤（ASCI）中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组，每组32只，模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型，对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3 h、1、3、7 d时（每个时间点8只）应用改良Tarlov评分法评价其神经功能；然后处死动物，取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色，观察形态学改变和Bak基因表达的特点；并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A（Motic.med 6.0）软件，结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪，模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍，对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组（P＜0.05）。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死，模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达，模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组（P＜0.05），模型组内Bak基因表达3 h点出现，1 d增加，3 d达高峰，7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现，1d增加，3d达高峰，7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达，从而诱导神经细胞凋亡，可能为其病情进展的重要机制之一。
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细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制
目的 观察雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤情况,研究细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制.方法 大鼠分别单次ip给予雷公藤甲素1、2 mg/kg,给药后48 h心脏采血,检测血浆尿素氮(BUN)与肌酐(Scr)水平;肾脏HE染色,光镜下观察肾组织形态学改变;应用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡情况;利用免疫组织化学染色法结合计算机图像分析技术检测肾组织内凋亡相关蛋白的表达情况,并利用RT-PCR技术测定肾组织内凋亡相关蛋白调控基因的表达.结果 雷公藤甲素2个剂量组均可见大量肾小管上皮细胞凋亡,且高剂量的作用显著大于低剂量,细胞凋亡与肾功能改变相关;肾组织中Bax、Bid、Bad、Fas以及FasL蛋白表达明显增多,且呈剂量依赖性,而Bcl-2的表达未见明显改变.结论 一次性ip大剂量雷公藤甲素会在短时间(48 h)内造成严重的肾损伤,肾小管上皮细胞凋亡是雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤的重要组织学基础之一,且Bcl-2家族以及Fas/FasL在雷公藤甲素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的过程中起重要作用.
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Bcl-2家族的研究进展
Bcl-2家族是细胞凋亡过程中关键的凋亡调节因子，包括抑制和促进凋亡两类蛋白。Bcl-2家族蛋白成员间的相互作用对线粒体介导的细胞凋亡信号通路具有调控作用。Bcl-2家族成员的表达异常与肿瘤的发生、发展以及耐药性密切相关。现就Bcl-2家族的研究进展作一综述。
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尤瑞克林对局灶性脑缺血大鼠Bcl-2家族蛋白表达的影响
目的 通过观察尤瑞克林对局灶性脑缺血大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨尤瑞克林保护缺血性脑组织的可能作用机制,为尤瑞克林治疗缺血性脑血管病在临床上的应用提供理论依据.方法 选用健康SD大鼠130只,雌雄各半,随机分为假手术组、局灶性脑缺血组及同一时间尤瑞克林治疗组(3、6、12、24、48、96 h);每组10只.以线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,制备局灶性脑缺血模型,术后30 min尤瑞克林组舌下静脉注射尤瑞克林8.75×10-3、PNA单位·kg-1.行神经功能缺失评分,免疫组化SABC法对凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白进行定量分析,电镜观察大脑皮层顶叶缺血半暗带区神经细胞超微结构变化.结果 尤瑞克林组与单纯缺血对照组同一时间比较:在6、12、24、48、96 h五个时间段Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)、同时在6个时间段Bax蛋白表达均降低 (P<0.05),透射电镜示:尤瑞克林组与模型组同时间段对照比较:核膜较光滑无内陷,核切迹不明显,核染色质可见少量成块.结论 尤瑞克林对脑缺血保护作用机制可能与调节NO,从而促进血管新生,提高Bcl-2蛋白表达,同时抑制Bax蛋白表达对脑缺血损伤起保护作用的分子机制之一.
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Bcl-2家族在线粒体细胞凋亡途径中的作用
细胞凋亡是细胞的程序性死亡,而在此过程中线粒体途径是主要的内在途径.在此途径中Bcl-2家族起着相当重要的作用.在Bcl-2家族中主要分为促凋亡因子和抗凋亡因子,本文就Bcl-2家族的特点及其在线粒体细胞凋亡途径中的作用作以综述.
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β-蜕皮甾酮对匹罗卡品致痫小鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响
目的 观察β-蜕皮甾酮( 20-hydroxyecdysone)对小鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响.方法 将30只CD-1小鼠随机分成正常组、造模组、β-蜕皮甾酮治疗组.用锂-匹罗卡品腹腔注射法诱导小鼠癫痫持续状态,造模成功后72 h,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元数目和形态的变化,免疫组化法和Western blot法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达.结果 模型组小鼠CA1区部分细胞肿胀,锥体细胞排列紊乱,细胞形态不规则,药物治疗组较模型组细胞数目增多,细胞排列有所改善.免疫组化和Western blot结果可见细胞凋亡因子Bax表达模型组高于正常对照组,药物治疗组低于模型组;抑制细胞凋亡因子Bcl-2表达模型组高于正常对照组,药物治疗组高于模型组.结论 β-蜕皮甾酮(20-HE)可能通过降低Bax,提高Bcl-2蛋白的表达,减轻癫痫发生后对大脑的损害.
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缺氧诱导因子-1在大鼠缺血性脑损伤中的双重作用
缺氧诱导因子-1(HIF-1)是低氧生理及病理过程中起作用的重要转录调控因子,由HIF-1α和HIF-1β两个亚单位组成.HIF-1调控的基因在能量代谢、红细胞生成、血管生成、血管扩张,细胞存活与凋亡中起一定作用.在大鼠缺血性脑损伤中,由于缺血时间和程度的不同,HIF-1对神经细胞具有保护和诱导凋亡的双重作用.它可以通过诱导靶基因如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)、葡萄糖转移蛋白-1(GLU-1)及葡萄糖合成酶的生成对缺血后脑细胞产生保护作用.然而,在严重缺氧条件下,HIF可以通过与肿瘤抑制蛋白p53结合、诱导bcl-2家族中的凋亡前基因BNIP3和NIX的表达以及促进诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的生成而诱导细胞凋亡.特异性激活促进存活的基因或者抑制HIF-1的表达都可能成为临床治疗的策略.
