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大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义
目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤（ASCI）中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组，每组32只，模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型，对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3 h、1、3、7 d时（每个时间点8只）应用改良Tarlov评分法评价其神经功能；然后处死动物，取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色，观察形态学改变和Bak基因表达的特点；并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A（Motic.med 6.0）软件，结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪，模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍，对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组（P＜0.05）。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死，模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达，模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组（P＜0.05），模型组内Bak基因表达3 h点出现，1 d增加，3 d达高峰，7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现，1d增加，3d达高峰，7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达，从而诱导神经细胞凋亡，可能为其病情进展的重要机制之一。
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bak基因干扰在铝致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用
目的 以铝致神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为模型,研究用RNA干扰的方法阻抑bak基因的表达,找到其优的序列、适的转染浓度和转染时间,以减少铝引起的神经细胞凋亡.方法 将三对bak基因小干扰RNA(siRNA)序列用不同浓度铝染毒细胞,分别测定不同的siRNA序列、不同的转染浓度及不同的转染时间对细胞活力的影响.用荧光染色法计数转染效率,用荧光定量PCR法检测干扰效率,用免疫组织化学染色法测定阻抑Bak蛋白表达效果.后,用选定的bak siRNA1作用于染铝后的神经瘤细胞,并检测其对细胞的凋亡率及坏死率的影响.结果 siRNA1序列为有效的序列,适转染浓度为10 nmol/L,适作用时间为转染后24 h.siRNA的转染效率＞90%,大干扰效率为57.76%,并表现了对Bak蛋白表达的明显的阻抑效应.bak siRNA1作用于染铝后的神经瘤细胞,可以明显降低细胞的凋亡率,但对细胞的坏死率的影响并不明显.结论 凋亡是铝致SH-SY5Y细胞死亡的重要途径,针对bak基因,用化学法合成siRNA并将其导入神经细胞,可以有效降低bak基因和Bak蛋白的表达,提高细胞活力和降低细胞的凋亡率,为预防及治疗铝诱导的神经细胞凋亡及神经退行性变的发生发展提供理论依据.
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PTD4-凋亡素融合蛋白对 Hela细胞 bak 基因表达的影响
目的：研究PTD4-凋亡素（ apoptin）融合蛋白对Hela细胞bak基因表达的影响。方法原核表达系统表达 PTD4-apoptin融合蛋白，使用CCK8试剂盒检测融合蛋白对Hela细胞的抑制作用；PTD 4-apoptin融合蛋白作用Hela细胞24 h后，提取细胞总RNA和总蛋白，采用RT-PCR和Western印迹检测bak基因在RNA水平和蛋白水平的表达。结果 PTD4-apoptin融合蛋白诱导Hela细胞 bak mRNA和蛋白水平表达量较对照组均显著提高。结论 PTD4-apoptin蛋白可诱导Hela细胞凋亡，与bak基因参与凋亡调控相关。
关键词： PTD4-apoptin Bak基因 细胞凋亡 -
Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响
目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系.方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因.细胞凋亡的处理条件:细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10 mmol·L-1叠氮钠或1μmol·L-1十字孢碱(STS)或20 p.mol·L-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡.应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用.结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联(P<0.01);MEF细胞在Bak基因缺失(Bak-/-)时,应用化学诱导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)(P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入PBx-/-/Bak-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Pax组(P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡.结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外.
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转BAK基因协同阿霉素杀伤膀胱癌耐药细胞
目的：研究转bak基因与阿霉素(ADM)联合杀伤膀胱癌耐药细胞的效果，并探讨其机制。方法：利用脂质体将基因bak导入膀胱癌耐药细胞，通过原位杂交法检测bak mRNA的表达，同时加入ADM，利用MTT法算出细胞生存率，进而推算半数抑制浓度(IC50)和抗药指数。用荧光分光光度计检测细胞内ADM的聚集量。结果：转基因后，细胞内bak mRNA阳性表达、细胞生存率较单用ADM明显降低(P＜0.05)，细胞内ADM聚集量无明显增加(P＞0.05)。结论：转bak基因可以协同ADM更有效地杀伤膀胱癌耐药细胞，但并非通过帮助ADM进入细胞起作用。
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上皮性卵巢肿瘤组织中Bak的表达及临床意义
为研究上皮性卵巢肿瘤中BAK的表达及其临床意义,采用免疫组织化学SABC法检测10例卵巢组织、15例良性上皮性卵巢肿瘤、18例交界性上皮性卵巢肿瘤、34例恶性上皮性卵巢肿瘤组织中Bak的表达情况.结果显示,Bak在正常卵巢肿瘤组织中表达为阴性,而在卵巢良性、交界性、恶性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为13.33%、44.44%、55.88%.Bak在卵巢良性、交界性、恶性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率依次升高,差别均有显著性(P<0.05).
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Bak基因研究进展
Bak基因是从EBV传染的人类B细胞文库中克隆获得的一种基因,它可以调节细胞凋亡,是Bcl-2家族的一员,编码区含有Bcl-2高度同源的BH1、BH2及BH3结构域,该区是Bak与Bcl-2、Bcl-xl结合形成二聚体调节细胞凋亡的主要结构基础.
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可诱导型Bak基因过度表达对多柔比星诱导HCC-9204细胞凋亡的增敏作用
目的：研究Bak基因过度表达在HCC-9204细胞凋亡途径中的作用以及对多柔比星和长春瑞滨的可能的增敏作用.方法：采用MT-Ⅱ可调控性表达载体系统，通过外加ZnSO4(100μmol/L)诱导Bak基因表达，并获得稳定转染子.以形态学标准并结合TUNEL或流式细胞仪检测细胞凋亡.克隆形成实验反映克隆细胞存活率，MTT法检测细胞活力.结果：Bak基因过度表达的细胞出现显著的细胞死亡，TUNEL证实为一种凋亡性细胞死亡.流式细胞仪的结果显示Bak能够显著地诱导细胞在G1期聚积并在阿霉素诱导后24h 19.26％的细胞发生凋亡.Bak基因过度表达只能显著降低阿霉素处理组的克隆存活率，而对长春花碱组没有显著效果.MTT实验的结果类似，提示Bak基因能够选择性对阿霉素诱导的细胞死亡具有增敏作用，而对长春花碱没有这种作用.结论：Bak基因的过度表达使HCC-9204细胞的细胞周期在G1延长，导致细胞凋亡并选择性对化疗药物具有增敏作用.
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Bak基因研究进展
Bak基因是从EBV转染的人类B细胞文库中克隆获得的一类蛋白质,它可以调节细胞凋亡,是Bcl-2家族的一员,编码区含有与Bcl-2高度高同源的BH1、BH2及BH3结构域,该区是Bak与Bcl-2、Bcl-xl结合形成二聚体调节细胞凋亡的主要结构基础.
