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类泛素蛋白FAT10在肝癌中的表达及生物学作用
目的 探讨类泛素蛋白FAT10在肝癌细胞中的异常表达和功能活化及其分子机制.方法 将38例肝癌大鼠随机分为空白组、pcDNA3.1-FAT10组、FAT10 siRNA组.采用RT-PCR法检测肝癌及癌旁组织中FAT10 mRNA的表达水平,电穿孔法分别将FAT10 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FAT10转染人肝癌SMMC-7721后,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,RT-PCR检测PI3K/Akt通路的变化.结果 FAT10 mRNA在大鼠肝癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),沉默FAT10后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率上升,PI3K/Akt信号通路表达下调;促进FAT10表达后,对细胞周期无明显影响,细胞凋亡率显著下降,PI3K/Akt通路表达上调.结论 FAT10可通过上调PI3K/Akt通路表达,减少细胞凋亡,增强肝癌细胞的侵袭能力,FAT10可能成为预防和治疗肝癌的靶点.
关键词： 肝癌 FAT10 电转法 PI3K/Akt信号通路 凋亡 -
电转法介导沉默ABCE1基因对人胆囊癌细胞基因表达及增殖能力的抑制作用
目的:研究电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ABCE1)基因表达后对人胆囊癌GBC-SD细胞基因表达及增殖能力的抑制作用.方法:构建靶向ABCE1基因的载siRNA质粒(ABCE1-siRNA)以及阴性对照质粒(NC-siRNA),分别设置ABCE1-siRNA组、NC-siRNA组及空载组,于体外电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,形成ABCE1-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-SD、Ctrl-GBC-SD细胞.分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blotting)检测电转后细胞中ABCE1基因mRNA与蛋白的表达水平,流式细胞仪检测GBC-SD细胞周期及凋亡,CCK-8法测定GBC-SD细胞的增殖能力.结果:成功构建靶向ABCE1基因的载siRNA质粒.与对照组相比,电转后ABCE1-GBC-SD细胞中ABCE1基因mRNA(0.45±0.06)和蛋白表达水平(0.65±0.10)显著降低(P<0.05);ABCE1-GBC-SD组细胞的生长速度减慢(P<0.05),细胞周期被阻滞于G0/G1期,S期的细胞数减少;与空载组相比,ABCE1-GBC-SD组细胞凋亡率(16.80±3.58)显著升高(P<0.01).结论:体外电转沉默ABCE1基因的表达后能够抑制胆囊癌细胞的基因表达及增殖能力.
关键词： 胆囊癌 ATP结合盒转运子E1 电转法 细胞增殖 -
类泛素蛋白FAT 10在肺鳞癌中的表达及生物学作用
目的:探讨类泛素蛋白FAT10的异常表达在肺鳞癌进展中的作用及机制.方法:采用RT-PCR和Westerm blotting法检测40例肺鳞癌及癌旁组织中FAT10 mRNA和蛋白表达水平.通过电穿孔法分别将FAT10 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FAT10转染人肺鳞癌NCI-H226细胞,转染48 h后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化,RT-PCR和Westerm blotting检测Hsp90/Akt信号通路的变化.结果:FAT10基因和蛋白在人肺鳞癌组织中的表达量分别是(0.89±0.11)、(1.56±0.09),高于癌旁组织(0.42±0.06)、(0.67±0.04),差异有统计学意义(P<0.05);干扰NCI-H226细胞中FAT10表达后,NCI-H226细胞增殖(0.527±0.011)被抑制,对细胞周期分布无明显影响,细胞凋亡率(6.13±0.37)％增加,细胞的侵袭能力降低,Hsp90/Akt信号通路表达(0.25±0.04)下调;增强NCI-H226细胞中FAT10表达后,增殖能力(0.948±0.016)明显增强,对细胞周期分布无明显影响,细胞凋亡率(2.47±0.25)％降低,细胞的侵袭能力降低,Hsp90/Akt信号通路表达(0.84±0.06)上调.结论:FAT10可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进肺鳞癌细胞增殖,减少细胞凋亡,增强肺鳞癌细胞的侵袭能力,FAT10有可能成为预防和治疗作用的靶点.
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沉默ABCE1基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响
目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响.方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞.RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell 法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力.结果:ABCEl-EC109细胞中ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-EC109细胞明显降低[(0.47 ±0.04) vs (0.67 ±0.05),(0.63 ±0.09) vs (0.86 ±0.11)；均P＜0.05].与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢[(2.20 ±0.10) vs (2.91 ±0.13),P＜0.05],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多[(76.5±3.1)％vs(56.1±2.7)％,P＜0.05)]；细胞的凋亡率明显升高[(15.46 ±3.12)％vs(0.54±0.24)％,P＜0.01],迁移、侵袭能力均显著下降[迁移:(8.12 ±0.23)vs(1.91 ±0.11) μm,P＜0.05;侵袭:(42.56 ±4.68) vs(68.78 ±6.98)个,P＜0.01].结论:电转法沉默ABCE1基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移.
