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转移相关基因ABCE1编码蛋白的表达及鉴定
目的 构建谷胱甘肽S―转移酶(GST)标签的ATP结合盒转运子E1(ABCE1)基因的原核表达载体pGEX―4T―1―ABCE1,通过转化技术,诱导GST―ABCE1重组蛋白表达.方法 通过基因克隆技术构建融合ABCE1基因的原核表达载体,经酶切和测序等方法进行检测.通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导GST―ABCE1重组融合蛋白表达.经酶切,Western blot和质谱测序等方法对该重组蛋白进行鉴定.结果 ABCE1基因片段成功插入pGEX―4T―1原核表达载体中,双酶切和测序后,经GenBank blast比对验证,证实ABCE1基因插入载体部位正确,碱基序列正确.凝血酶酶切检测重组蛋白GST―ABCE1得到72000大小的特异条带,该条带可以被ABCE1抗体识别,质谱检测得到ABCE1蛋白的特异性序列,该序列评分138分(P<0.05).结论 pGEX―4T―1―ABCE1原核表达载体质粒构建成功,并成功诱导GST―ABCE1重组蛋白表达,为继续研究ABCE1在肺癌中的作用机制奠定基础.
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电转法介导沉默ABCE1基因对人胆囊癌细胞基因表达及增殖能力的抑制作用
目的:研究电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ABCE1)基因表达后对人胆囊癌GBC-SD细胞基因表达及增殖能力的抑制作用.方法:构建靶向ABCE1基因的载siRNA质粒(ABCE1-siRNA)以及阴性对照质粒(NC-siRNA),分别设置ABCE1-siRNA组、NC-siRNA组及空载组,于体外电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,形成ABCE1-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-SD、Ctrl-GBC-SD细胞.分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blotting)检测电转后细胞中ABCE1基因mRNA与蛋白的表达水平,流式细胞仪检测GBC-SD细胞周期及凋亡,CCK-8法测定GBC-SD细胞的增殖能力.结果:成功构建靶向ABCE1基因的载siRNA质粒.与对照组相比,电转后ABCE1-GBC-SD细胞中ABCE1基因mRNA(0.45±0.06)和蛋白表达水平(0.65±0.10)显著降低(P<0.05);ABCE1-GBC-SD组细胞的生长速度减慢(P<0.05),细胞周期被阻滞于G0/G1期,S期的细胞数减少;与空载组相比,ABCE1-GBC-SD组细胞凋亡率(16.80±3.58)显著升高(P<0.01).结论:体外电转沉默ABCE1基因的表达后能够抑制胆囊癌细胞的基因表达及增殖能力.
关键词： 胆囊癌 ATP结合盒转运子E1 电转法 细胞增殖 -
ATP结合盒转运子E1研究概况及展望
ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)于多细胞真核生物细胞胞浆内编码一种名为核糖核酸酶L(Ribonuclease L,RNase L)抑制因子的68KD蛋白.
关键词： ATP结合盒转运子E1 核糖核酸酶L 凋亡 转移 -
新转移相关基因ATP结合盒转运子E1在非小细胞肺癌中的表达及其意义
观察ATP结合盒转运子E1(ABCE1)的mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织及转移淋巴结中的表达情况,探讨其在肺癌发生、发展中的意义及其与各种临床病理参数的关系.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应、Western blot和免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 肺癌组织和转移淋巴结中ABCE1mRNA和蛋白的表达量均高于癌旁肺组织(P＜0.05),且mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=3.992,P=0.001).ABCE1蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学分级、有无淋巴结转移及pTNM分期无关(P＞0.05),与病理类型有关(P -0.036),在肺腺癌中的表达高于鳞癌；ABCE1 mRNA的表达与肺癌组织学分级有关(P-0.026).结论 ABCE1的表达可能与非小细胞肺癌的侵袭和转移相关,在肺癌的发生发展过程中起到了重要作用,并可能成为潜在的肿瘤标记物及预后指标.
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肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
目的 明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域.方法 通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验-pGEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用.结果 GST-ABCE 1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×103,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合.结论 肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中.
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ABCE1在肺腺癌组织细胞中的表达及临床意义
目的 研究ATP结合,盒转运子E1(ABCE1)在肺腺癌组织细胞中的表达,并探讨其临床意义.方法 用RT-PCR及Western Blot方法检测18例肺腺癌7例正常肺组织及5例转移淋巴结组织标本中ABCE1的mRNA和蛋白的表达.结果 三种组织中均存在ABCE1的表达;肺腺癌组织ABCE1蛋白及mRNA的表达量高于正常肺组织(P＜0.05,P＜0.05);转移淋巴结组织中ABCE1蛋白及mRNA的表达量高于肺腺癌组织(P＜0.05,P＜0.05);18例肺腺癌中ABCE1蛋白及mRNA的表达量在Ⅲ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05,P＜0.05);N1组高于N0组(P＜0.05,P＜0.05).结论 ABCE1基因可能参与了肺腺癌的形成和演变,其表达水平在一定程度上可以反映肺腺癌的转归,有望成为新的肿瘤分子标志物,用于肿瘤的早期诊断、病情检测和预后评估.
关键词： ATP结合盒转运子E1 肺腺癌 RT PCR Western blot -
沉默ABCE1基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响
目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响.方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞.RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell 法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力.结果:ABCEl-EC109细胞中ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-EC109细胞明显降低[(0.47 ±0.04) vs (0.67 ±0.05),(0.63 ±0.09) vs (0.86 ±0.11)；均P＜0.05].与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢[(2.20 ±0.10) vs (2.91 ±0.13),P＜0.05],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多[(76.5±3.1)％vs(56.1±2.7)％,P＜0.05)]；细胞的凋亡率明显升高[(15.46 ±3.12)％vs(0.54±0.24)％,P＜0.01],迁移、侵袭能力均显著下降[迁移:(8.12 ±0.23)vs(1.91 ±0.11) μm,P＜0.05;侵袭:(42.56 ±4.68) vs(68.78 ±6.98)个,P＜0.01].结论:电转法沉默ABCE1基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移.
