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pGEX―4T―1原核表达载体文献资料
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转移相关基因ABCE1编码蛋白的表达及鉴定
目的 构建谷胱甘肽S―转移酶(GST)标签的ATP结合盒转运子E1(ABCE1)基因的原核表达载体pGEX―4T―1―ABCE1,通过转化技术,诱导GST―ABCE1重组蛋白表达.方法 通过基因克隆技术构建融合ABCE1基因的原核表达载体,经酶切和测序等方法进行检测.通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导GST―ABCE1重组融合蛋白表达.经酶切,Western blot和质谱测序等方法对该重组蛋白进行鉴定.结果 ABCE1基因片段成功插入pGEX―4T―1原核表达载体中,双酶切和测序后,经GenBank blast比对验证,证实ABCE1基因插入载体部位正确,碱基序列正确.凝血酶酶切检测重组蛋白GST―ABCE1得到72000大小的特异条带,该条带可以被ABCE1抗体识别,质谱检测得到ABCE1蛋白的特异性序列,该序列评分138分(P<0.05).结论 pGEX―4T―1―ABCE1原核表达载体质粒构建成功,并成功诱导GST―ABCE1重组蛋白表达,为继续研究ABCE1在肺癌中的作用机制奠定基础.
