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益肾解毒方对小鼠肺腺癌骨转移瘤RNase L蛋白表达的调控作用
目的:研究益肾解毒方对小鼠溶骨性骨转移瘤细胞核糖核酸酶L(ribonuclease L,RNase L)蛋白及凋亡终末蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的调控作用.方法:将已经获得国家专利的肺腺癌溶骨性骨转移细胞株,给予裸鼠左心室注射,制备溶骨性骨转移模型,随机分为5组,益肾解毒方高、中、低剂量(24,12,3 g·kg-1)组,帕米磷酸二钠组及模型组,以MicroSPECT/CT显像及病理组织学方法观察骨转移发生情况,定时定量给药并于5周后取材,通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹法(Western blot)以及反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等方法研究RNase L,Caspase-3及益肾解毒方的干预作用.结果:与模型组比较,帕米磷酸二钠组、益肾解毒方高、中、低剂量组骨转移瘤细胞RNase L蛋白,mRNA表达降低(P＜0.01),益肾解毒方中、低剂量组及帕米磷酸二钠组骨转移灶中Caspase-3蛋白,mRNA表达升高(P＜0.01).讨论:肺腺癌骨转移灶中RNaseL高表达,而细胞凋亡过程中主要的终末剪切酶Caspase-3表达降低,其内在机制可能与肺腺癌骨转移细胞的凋亡逃避机制相关,益肾解毒方能够降低RNase L表达,增强Caspase-3表达,一定程度上抑制了肿瘤细胞的凋亡逃避,这可能是益肾解毒方抗肿瘤的内在机制.
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ATP结合盒蛋白E1在真核生物中的作用
ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)蛋白超家族是真核生物进化过程中为保守的一类蛋白.ABCE1是ABC超家族中E亚家族的唯一成员,除可抑制哺乳动物核糖核酸酶L外,还参与真核生物蛋白合成的翻译起始、终止及核糖体循环,并有可能成为新的抗肿瘤靶点.本文对ABCE1的基本生物学特性及其生物学作用作一介绍.
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ABCE1基因通过RNase L途径抑制人大细胞肺癌H460细胞凋亡
目的：研究ABCE1基因表达对人大细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养H460细胞，分为A组(转染ABCE1-siRNA-1组)、B组(转染ABCE1-siRNA-2组)、C组(转染空质粒组)以及D组(空白对照组)。将构建好的ABCE1的siRNA(小干扰RNA)载体转染入培养的细胞中，荧光显微镜下观察转染效率，Western Blot法检测ABCE1蛋白以及RNase L蛋白的表达，RT-PCR法检测ABCE1 mRNA的表达，MTT法分析细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果将构建好的载体成功转入了H460细胞，转染后A、B组的细胞活性降低，ABCE1的表达受到阻断(P＜0.01)，RNase L蛋白含量明显增加(P＜0.01)，细胞的增殖能力明显降低并逐渐凋亡(P＜0.01)。结论 ABCE1基因可促使人大细胞肺癌H460细胞增殖并抑制细胞凋亡，其机制是阻断了2-5A/RNase L细胞通路。
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ATP结合盒转运子E1研究概况及展望
ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)于多细胞真核生物细胞胞浆内编码一种名为核糖核酸酶L(Ribonuclease L,RNase L)抑制因子的68KD蛋白.
关键词： ATP结合盒转运子E1 核糖核酸酶L 凋亡 转移 -
RNase L遗传改变与肿瘤相关性的研究进展
RNase L是先天免疫系统中的一个重要作用因子.能够使RNA水解从而抑制细胞蛋白质的合成.近年来,RNase L已被报道在多种肿瘤中存在表达差异,并与这些肿瘤的发生发展密切相关.因此,对于RNase L与肿瘤相关性研究可能为肿瘤的治疗提供新的靶点.本文主要对RNase L的结构与功能以及在遗传病方面的研究进展加以综述.
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核糖核酸酶L的功能研究进展
核糖核酸酶L(ribonuclease L, RNase L)属于2-5腺苷酸(2′-5′oligoadenylate, 2-5A)系统,以往研究表明干扰素(interferon, IFN)抗病毒作用以及前列腺癌等多种疾病的发生都与RNase L有关,近期研究表明此酶有诱导凋亡的功能,这一功能是其控制病毒感染以及抵抗肿瘤作用的基础.关于RNase L功能的研究在国外已受到关注,但国内报道尚不多.本文就RNase L的结构及功能作一综述.
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三磷酸腺苷结合盒转运子E1对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡能力的影响
目的 观察三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运子E1基因(ABCEl)在胶质瘤及正常脑组织中的表达及其对人脑胶质瘤细胞U251的增殖和凋亡的影响.方法 选取45例胶质瘤和10例正常脑组织(脑外伤患者内减压切除的脑组织)作为研究对象,应用免疫组织化学技术检测ABCE1的表达水平.另选取7例胶质瘤组织和4例正常脑组织作为研究对象,应用Western blot技术检测胶质瘤组织和正常脑组织之间ABCE1表达量的差异.此外,应用小干扰RNA (siRNA)技术转染脑胶质瘤U251细胞,Western blot检测ABCE1 siRNA对ABCE1蛋白的干扰效果和其靶蛋白核糖核酸酶L(RNase L)的表达,同时应用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验和凋亡实验检测ABCE1 siRNA对U251细胞增殖和凋亡的影响.结果 免疫组织化学染色结果显示ABCE1在正常组、Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级中表达差异有统计学意义(P＜0.05),且ABCE1的表达量与肿瘤的恶性程度呈正相关(r=0.626,P＜0.05).Western blot检测表明ABCE1随着肿瘤恶性程度的增高表达量也随之增高,3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05).ABCE1的siRNA转染U251细胞后明显抑制细胞增殖,在48、72、96 h吸光度值分别降低了0.394、0.542、0.968;同时,ABCE1 siRNA组凋亡率为(12.730±0.580)％,与阴性对照组的(4.800±0.118)％和空白组的(3.830±0.086)％比较,其凋亡率均明显增高(P＜0.05);当ABCE1下调后RNase L的表达量增加,干扰组与空白、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCE1在胶质瘤和正常脑组织中均表达,其在胶质瘤中的表达水平与其恶性程度呈正相关.ABCE1在胶质瘤细胞U251的增殖和凋亡方面扮演重要角色,同时通过特异性抑制2-5A/RNase L通路,干扰胶质瘤细胞的生物特点.
关键词： 胶质瘤 三磷酸腺苷结合盒转运子E1 核糖核酸酶L
