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叶酸受体抗体与出生缺陷
叶酸受体(folate receptor,FB)是介导叶酸进入细胞内的主要载体,可与叶酸及其类似物特异性结合.FR在恶性肿瘤中高度表达,这种特性使FR被应用于肿瘤靶向给药系统,因而受到人们的广泛关注.然而,近年来发现,人体存在着FB自身抗体,并且这种抗体可能与神经管缺陷(neural tube defect,NTD)[1]、唇腭裂[2]等出生缺陷有关,还与脑叶酸缺乏症[3]、Bett综合征[4]、自闭症[5]等一些神经功能障碍相关.FR对于神经管正常发育及胚胎生长是必不可少的[6].本文主要对叶酸受体抗体与出生缺陷相关性研究进行综述.
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人胎盘叶酸受体蛋白的提取、纯化及鉴定
目的 建立人胎盘叶酸受体蛋白的提取及纯化方法,并对其进行定性定量检测. 方法 采集医院分娩的正常人的胎盘样品.将胎盘剪碎,组织匀浆,酸化及中和,过柱提纯,组分鉴定,除杂并用分子筛进一步纯化.利用Bradford检测蛋白浓度,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法进行蛋白分子量检测,用Western Blot对提取蛋白进行定性鉴定. 结果 用于本实验的胎盘湿重370 g.在经过亲和层析柱抽提后的8个留样组分中,组分2～5含有目的蛋白的粗提物.经过分子筛等方法除杂后,Bradford蛋白检测显示本次共提取蛋白总量345 μg.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法结果证实此蛋白分子量大约为35 ～40 KDa.Western Blot方法显示此蛋白与叶酸受体抗体特异结合. 结论 使用本研究方法能够从人胎盘中成功提取并纯化人源的叶酸受体蛋白,每100 g胎盘可提取叶酸受体蛋白93 μg.本研究为以后的叶酸受体抗体检测奠定了基础.
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神经管畸形与还原叶酸载体基因多态性及可疑危险因素的流行病学研究
母亲妊娠前后增补叶酸可以有效降低胎儿神经管畸形(neural tube defects,NTDs)的初发和再发.然而,目前对叶酸预防NTDs效果的作用机制尚不清楚.叶酸代谢过程中有几个关键的酶,如5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、蛋氨酸合酶还原酶(M T R R)、胱硫醚β合酶(CBS)等,其基因缺陷均可导致高同型半胱氨酸(Hcy)血症.大量研究证实,Hcy与NTDs发生有关,MTHFR是NTDs发生的遗传易感基因.因此,从研究影响细胞对叶酸吸收、转运、代谢的遗传变异着手来寻找候选基因,可以了解叶酸预防作用的机制.机体在利用叶酸过程中,除上述与叶酸代谢有关的酶外,尚有叶酸转运过程中涉及到的受体及载体,如叶酸受体(folate receptor,FR)和还原叶酸载体(reduced folate carrier,RFC),它们在叶酸吸收转运进入细胞过程中发挥着关键作用.本研究的目的是探索RFC1A80G多态性及其它可疑危险因素对NTDs的影响,为NTDs病因研究提供流行病学依据.
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叶酸受体及其在介导药物靶向肿瘤细胞治疗中的应用
肿瘤细胞表面过度表达一系列受体,能与特异性的配体结合并诱导细胞内化.以这些受体为作用靶点,使药物与特异性配体结合即可将药物主动靶向肿瘤细胞.叶酸受体在多种肿瘤细胞特别是髓细胞白血病细胞中都有过度表达,它可通过介导细胞内化将叶酸摄取入细胞胞浆,利用叶酸受体进行肿瘤,特别是白血病的靶向性治疗颇有应用前景.本文就叶酸受体生物学性质、染色体定位及与配体的相互作用,叶酸受体在正常组织、肿瘤组织,特别是白血病细胞中的分布特点,以及叶酸受体介导主动靶向肿瘤细胞,特别是白血病细胞的研究进展进行了概述.
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超声引导下叶酸偶联金纳米棒在兔VX2肝癌的摄取状况研究
目的 观察实验动物对叶酸偶联二氧化硅包覆的金纳米棒(GNRs@SiO2-FA)的摄取状况,检测GNRs@SiO2-FA对肝癌细胞的靶向性.方法 超声引导下穿刺接种法建立兔VX2肝癌模型27只,超声检查观察肿瘤生长情况.2周后将实验动物随机分成三组,即空白对照组(注入生理盐水)、门静脉注射GNRs@SiO2-FA组、瘤内注射GNRs@SiO2-FA组,术后24、48、72 h每组各处死3只实验兔,取其肿瘤组织和各主要脏器观察GNRs@SiO2-FA摄取情况.结果 成功建立VX2兔肝癌模型,实验动物摄入GNRs@SiO2-FA后,在24 h内GNRs@SiO2-FA即可以特异度的与肿瘤细胞结合进入肿瘤细胞,并聚集在肿瘤细胞质内,瘤内注射组与门静脉注射组无明显差异.结论 GNRs@SiO2-FA可以在实验动物体内高度靶向性作用于肝癌细胞.
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叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂的制备及体外寻靶
目的 制备叶酸受体靶向的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,鉴定其基本性质,观察其体外靶向性能.方法 以氯仿将偶联叶酸的磷脂[DSPE-PEG(2000)]按照一定比例溶解在成膜材料中,用旋转蒸发仪去除有机溶剂成膜,加入磷酸盐缓冲液重新水合后,在悬液中逐滴加入适量液态氟碳,均质乳化后得到叶酸受体靶向的纳米粒造影剂.在人卵巢癌SKOV3细胞中验证该造影剂的靶向性能(靶向造影剂组),并与不带叶酸的普通造影剂组和游离叶酸干预组相比较.结果 叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂外观与普通造影剂无明显差别.体外靶向实验发现此纳米粒造影剂聚集且牢固地黏附于SKOV3细胞,而普通造影剂组和游离叶酸干预组则未见明显特异性结合.结论 成功制备了偶联叶酸的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,该造影剂对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强的亲和力,有望成为卵巢癌靶向显影与治疗的理想分子探针.
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叶酸偶联高分子抗肿瘤药物载体的研究及应用
靶向治疗对肿瘤细胞的杀伤力强,不良反应少,在癌症治疗中发挥着重要作用.由于叶酸受体是高选择性的肿瘤标志物,其在许多肿瘤细胞表面均过度表达,通过叶酸受体介导的内吞作用将抗肿瘤药物靶向传递至肿瘤组织或细胞,提高了抗癌药物的治疗指数,目前叶酸受体靶向递药技术已受到广泛关注.而其中利用高分子为载体,偶联靶向配体叶酸和抗肿瘤药物形成的高分子偶联药物,能显著延长药物的半衰期,增加药物的稳定性和溶解性,降低药物的毒副作用,使叶酸高分子偶联药物具有良好的应用前景.本文就目前各类叶酸受体介导的高分子抗肿瘤药物进行综述.
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叶酸受体介导的肿瘤靶向纳米递药系统
叶酸受体在上皮源性的恶性肿瘤细胞膜表面高度表达.叶酸靶向纳米递药系统具有叶酸.叶酸受体主动靶向和纳米递药系统被动靶向的双重优势,可实现化疗药物对肿瘤组织的靶向递送,有效提高药物疗效,减少毒副作用.本文就近年来研究较多的叶酸_脂质体、叶酸.树枝状聚合物、叶酸一聚合物胶束、叶酸.纳米球等叶酸受体介导的肿瘤靶向递药系统进行综述.
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叶酸受体介导的靶向给药研究进展
叶酸受体可以与叶酸及其类似物特异性结合,通过介导细胞内化将其摄入细胞胞浆.利用叶酸受体在肿瘤和关节炎细胞的过度表达,使药物与叶酸结合,以叶酸受体为作用靶点,即可将药物主动靶向肿瘤和关节炎细胞,从而提高药物在肿瘤、关节炎的组织分布,达到靶向诊断、治疗的目的.本文就叶酸受体及其组织分布,叶酸受体介导的内吞作用,叶酸受体介导的肿瘤和关节炎的靶向诊断、治疗的研究进展进行了综述.
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叶酸受体靶向土大黄苷前药与HSA相互作用研究
目的 从分子水平上研究叶酸受体靶向土大黄苷前药(FRHA)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的结合作用.方法 模拟生理条件,采用荧光光谱和紫外-可见光谱研究FRHA与HSA结合反应的光谱学特征,探讨药物对蛋白质内源性荧光的淬灭机制,并结合三维、同步荧光光谱和圆二色谱分析FRHA对HSA微环境及构象的影响.结果 FRHA-HSA复合物的形成将导致HSA发生荧光淬灭,298、302、306和310 K时FRHA与HSA相互作用的结合常数分别为1.4322×105、1.1793×105、0.9334×105和0.7896×105 L/mol.由实验计算出热力学参数焓变ΔH为-38.772 kJ/mol,熵变ΔS为-31.39 J/(mol·K).结论 FRHA-HSA复合物的形成是自发进行的,范德华力和氢键作用力是使该复合物稳定的主要作用力,并且复合物的形成使HSA的微环境和构象发生改变,进而导致HSA发生荧光淬灭,淬灭机制为静态淬灭.
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叶酸复合物在肿瘤靶向治疗中的应用
叶酸受体是一种糖蛋白受体,目前已知它在一系列肿瘤部位过度表达,如卵巢、子宫颈、子宫内膜、肾、乳腺、脑、肺、骨髓、间皮等,特别是在肿瘤晚期或者已经产生耐药性的部位,而在正常组织中很少或几乎不表达.因此,用一般方法难以克服的肿瘤有可能极易被叶酸导向药物所攻克.经过十多年的研究,叶酸复合物的技术已被公认为具有巨大的潜在治疗价值,将叶酸复合物用于肿瘤靶向治疗正成为当今研究的热点之一.本文介绍了叶酸与细胞毒药物、脂质体、基因等形成的复合物的研究进展和概况.
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叶酸受体介导的抗肿瘤药物研究进展
叶酸受体在大多数人体肿瘤细胞表面过度表达,而在正常细胞中的存在很少,甚至检测不到,这就使叶酸受体介导的抗肿瘤药物可以靶向性地作用于叶酸受体呈阳性的肿瘤细胞,减少传统抗癌药物对正常细胞的毒副作用,提高药物的选择性.本文对叶酸受体介导的抗肿瘤药物的作用机制进行综述,介绍近几年研究者设计并合成的叶酸-药物缀合物及其活性测试的结果.
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叶酸受体介导的肿瘤靶向治疗研究进展
叶酸是一种小分子量的维生素,其受体是一种糖蛋白,在肿瘤细胞膜表面高度表达;而在绝大多数正常组织中,几乎不表达.利用叶酸对叶酸受体的高度亲和性,可用于将药物与叶酸偶联,将药物靶向至肿瘤.对此,本文进行了综述.
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叶酸受体介导的抗肿瘤靶向前药研究进展
叶酸受体(folate receptor,FR)在大部分人体肿瘤细胞表面过度表达,而在正常细胞表面则很少表达,甚至不表达.这就使得利用FR介导的抗肿瘤药物靶向作用于FR呈阳性的肿瘤细胞成为可能,从而减少传统抗癌药物对正常细胞的毒副作用.另外,前药在克服药物用药障碍、增强化学及代谢稳定性、增加口服或者局部给药的吸收度、增强血脑屏障渗透性、延长作用时间、提高生物利用度,以及减轻不良反应等应用中,已成为一种有效策略而被广为接受.本文主要对FR介导的抗肿瘤靶向前药的作用机制进行综述,并介绍近几年研究者设计并合成的叶酸修饰的靶向前药.
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叶酸-葡聚糖-5-氟尿嘧啶靶向药物的合成及细胞毒性研究
目的 制备叶酸-葡聚糖-5-氟尿嘧啶靶向药物(FA-DEX-5-Fu)并考察其对叶酸受体(FR)高表达的肿瘤细胞的毒性作用.方法 以葡聚糖(DEX)为大分子载体与抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)合成5-Fu-DEX,再与靶向配体叶酸(FA)偶联,制备FA-DEX-5-Fu.采用UV、IR、ESI-MS进行结构确证；利用UV测定复合物中FA及5-Fu的含量；采用MTT检测游离5-Fu、5-Fu-DEX、FA-DEX-5-Fu对高表达FR的人宫颈癌Hela细胞及低表达FR的人肺癌A549细胞的细胞毒性作用.结果 UV、IR、ESI-MS分析表明,5-Fu和FA成功连接到DEX上.通过测定FA-DEX-5-Fu中5-Fu与FA的含量,计算出在复合物中5-Fu与FA的摩尔比为2.7:1.MTT实验结果表明,FA-DEX-5-Fu对Hela细胞的增殖抑制作用明显高于A549细胞；相同浓度的FA-DEX-5-Fu对Hela细胞的增殖抑制作用明显强于5-Fu及5-Fu-DEX.结论 本实验成功合成了FA-DEX-5Fu,且该复合物对FR高表达的肿瘤细胞有明显的靶向作用.
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叶酸受体靶向β-榄香烯固体脂质纳米粒的制备及其大鼠体内分布
目的 研究叶酸复合物修饰β-榄香烯固体脂质纳米粒(SLN)制剂在大鼠体内的药动学与组织分布情况.方法 脂质中加入聚乙二醇单甲醚胆固醇琥珀酸酯(CHS-PEG)和N-硬脂酰基-N'-蝶酰谷氨酰基-聚乙二醇二胺(FA-PEG-S),采用超声-挤压过滤法制备叶酸受体靶向β-榄香烯SLN制剂(FA-PEG-SLN)并加以表征.大鼠尾静脉给药,HPLC测定该制剂的药动学特征及组织分布情况,与普通β-榄香烯SLN(SLN-1)及榄香烯注射乳剂的相比较.结果 静脉给药后,FA-PEG-SLN在血浆中的消除半衰期为44.0 min,显著长于SLN-1和乳剂的15.6和15.4 min.与SLN-1相比,FA-PEG-SLN 5 min时在肝肾中的药物浓度较高,在脾中稍低.30和60 min时,FA-PEG-SLN组在除肺外的各组织中的β-榄香烯浓度皆显著高于SLN-1组和乳剂组.结论 FA-PEG-SLN能够在血浆中较长时间循环,在主要器官中的浓度较高且消除速度较慢,有进一步研究的价值.
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叶酸靶向的给药系统
目的综述叶酸靶向给药系统研究进展,评价这种技术应用的得与失.方法检索近几年国外研究叶酸靶向的相关文献,并进行分析、归纳.结果叶酸受体(FR)是肿瘤选择性药物输送的特异性靶点.与其他肿瘤标记物相比,FR的独特优势在于其天然配体是维生素叶酸.结论将叶酸与小分子,大分子药物或其他输送工具偶联,使治疗药物到FB阳性的肿瘤细胞的输送大为增强,在临床前和临床实验中显示出广阔的前景.
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人叶酸受体自身抗体IgG酶联免疫吸附试验检测方法的建立及评价
目的：建立血浆叶酸受体自身抗体免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）的酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）检测方法，并对其进行评价。方法：从正常人的胎盘样品中提取叶酸受体蛋白并将其纯化，以纯化的人源叶酸受体蛋白为包被蛋白，以单克隆抗体为检测二抗，建立血浆叶酸受体自身抗体IgG的间接ELISA检测方法，评价其灵敏度、精密度及稳定性。随机选取24例血浆标本，同时以商品化的牛源叶酸结合蛋白与本方法中提取的人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白，采用ELISA方法分别检测血浆中叶酸受体抗体IgG的水平，比较两种方法的检测结果。结果：标准曲线可检测的IgG浓度范围为6．25×10-4～8．00×10-2（标准品采用健康人混合血浆，IgG浓度定为1），低检测限为3．13×10-4，批内差异为2．74％～8．07％，批间差异为4．16％～8．23％。同一样本不同稀释倍数下IgG的检测结果均在可接受范围内，结果较稳定。血浆标本的牛源包被蛋白与人源包被蛋白检测方法对比结果显示两种方法高度相关，相关系数为0．954（P＜0．001）；人源包被蛋白检测结果比牛源包被蛋白高14％。结论：成功建立以人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白、针对血浆叶酸受体自身抗体IgG水平的ELISA检测方法，该方法检测灵敏，重复性好，可用于大样本量的人群检测。
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叶酸受体介导靶向治疗肿瘤
叶酸受体广泛分布在正常组织及肿瘤组织中,不同点在于多数肿瘤细胞叶酸受体的数量和活性远远超过正常细胞,而且叶酸受体在正常细胞呈极性分布,恶变后失去极性,使血液循环中的药物可接触到该受体,借以将药物靶向导入癌细胞.如今,叶酸受体已成为肿瘤靶向的理想配体.
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叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA在裸鼠体内靶向治疗作用的初步研究
目的 研究叶酸受体为靶向的脂质体包裹MYCN基因小干扰性RNA在神经母细胞瘤裸鼠骨髓、骨转移模型中的靶向性及治疗作用.方法 16只成功建立神经母细胞瘤骨髓、骨转移模型的裸鼠,将其随机分为靶向性研究组(4只)和疗效性研究组(12只).靶向性研究组裸鼠静脉给予CY3荧光标记叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA,荧光显微镜检测CY3在体内瘤组织及重要器官的荧光强度.疗效性研究组12只裸鼠随机分MYCN siRNA组和无关siRNA组,静脉分别给予叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA与叶酸脂质体包裹的无关siRNA,采用荧光定量PCR检测肿瘤组织MYCN mRNA表达,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡数.结果 CY3荧光标记的叶酸脂质体MYCN siRNA给药8 h后,荧光主要分布在肿瘤组织内,MYCN siRNA组瘤组织中MYCN mRNA的表达量明显较无关siRNA组降低(P ＜ 0.05),MYCN siRNA组凋亡细胞数量高于无关siRNA组(P ＜ 0.05).结论 ①叶酸脂质体MYCN siRNA经静脉给药后主要靶向瘤组织,叶酸脂质体是肿瘤基因治疗的有效载体;②叶酸脂质体MYCN siRNA在体内显著下调肿瘤MYCN mRNA的表达,促进肿瘤细胞凋亡,有望成为神经母细胞瘤治疗的新药物.
