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HPV18E1-E4基因组定点突变与宫颈癌发生及病变程度的相关性研究
目的 从基因组突变角度探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与宫颈癌发生及病变程度的相关性,为宫颈癌的筛查和早期诊断提供新思路. 方法 选择正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织、宫颈癌前病变组织以及宫颈癌组织,采用PCR法检测HPV18及其载量,测序分析E1-E4基因突变情况. 结果 宫颈癌组HPV18阳性率为95.1％,病毒载量为(280.14±54.89)pg/ml,宫颈癌前病变组和慢性宫颈炎组HPV18阳性率分别为92.0％和51.9％,病毒载量分别为(246.26+78.31)pg/ml和(253.51±58.63) pg/ml,与正常宫颈组HPV18阳性率4.5％和病毒载量(13.48±32.65)pg/ml比较差异均有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组、宫颈癌前病变组及慢性宫颈炎组病毒载量差异无统计学意义(P＞0.05).宫颈癌组HPV18无突变和17/18突变率分别为54.3％和24.1％,与慢性宫颈炎组30.4％和12.2％比较差异有统计学意义(P＜0.05).慢性宫颈炎组54突变率为23.2％,与宫颈癌前病变组13.8％和宫颈癌组12.1％比较差异有统计学意义(P＜0.05);34突变率为28.0％,与宫颈癌组4.3％比较差异有统计学意义(P＜0.05).慢性宫颈炎、宫颈癌前病变以及宫颈癌组63/67突变率差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 宫颈病变程度与HPV18载量无明显相关性,而与HPV18 E1-E4基因突变相关.发生17/18突变的HPV18毒力基本保持不变,而34突变和54突变会导致病毒毒力下降,使宫颈病变进程减缓.
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探讨LEEP刀治疗宫颈上皮内瘤病变的临床疗效及术后HPV16/18的随访价值
目的 临床分析LEEP刀治疗宫颈上皮内瘤病变的临床效果,同时分析HPV16及HPV18在患者术后的随访价值.方法 方便选取该院2015年6月—2016年6月实施治疗的80例宫颈上皮内瘤病变患者,依照患者临床手术治疗方式将其分成两组,其中对照组40例患者实施宫颈冷刀锥切术(CKC术)治疗,观察组40例患者实施宫颈环形电切刀(LEEP刀)治疗,对两组患者的临床手术治疗效果观察,术后随访两组患者6个月,定期检测及记录HPV16、HPV18变化及患者复发率.结果 手术后,CINⅠ患者的HPV16、HPV18阳性率显著低于CINⅡ及CINⅢ患者,对比差异有统计学意义(P<0.05),其中CINⅠ患者术后为0.0%、CINⅡ患者术后为36.0%以及CINⅢ患者术后为47.8%.结论 在宫颈上皮内瘤病变患者治疗中,CKC术和LEEP术临床痊愈率差异不大,但是LEEP术治疗患者的手术时间、术中出血量以及术后愈合时间显著偏短,同时HPV16、HPV18检测对于患者术后病变评估以及复发率预测,具有重要作用,具有一定随访价值.
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宫颈癌与HPV16，18的关系研究
目的：结合临床和流行病学探讨HPV16，18与宫颈癌的关系。方法将178例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变（CIN）标本采用HE染色及免疫组化SP法，标记宫颈上皮病变中的HPV16，18，并取同期10例正常宫颈组织作对照。结果138例宫颈癌标本的HPV16，18平均阳性率为70.3%，其中<55岁年龄组宫颈癌102例， HPV阳性率为90.2%，≥55岁年龄组36例，阳性率为13.9%，组间阳性率比较有显著差异（P<0.01）。HPV16（+）组共52例，其中宫颈鳞癌47例，腺癌5例；HPV18（+）45例，宫颈鳞癌11例，腺癌34例，组间阳性率比较有显著差异（P<0.01）。结论 HPV的感染与宫颈癌相关，HPV16型感染多见于宫颈鳞癌，而18型多见于宫颈腺癌。
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宫颈鳞癌和上皮内瘤变组织中TRF1、TRF2及 HPV16、HPV18的检测及其意义
目的 研究端粒结合蛋白TRF1、TRF2在宫颈鳞癌发生发展中的作用并分析HPV16、HPV18感染与TRF1、TRF2蛋白表达的关系. 方法 随机选择南华大学附属第一医院病理科2005年9月至2006年10月期间的组织石蜡块标本共86例,采用原位杂交方法检测HPV16、HPV18在15例正常宫颈上皮、36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和35例宫颈鳞癌组织中的感染情况;采用免疫组化方法检测所有组织标本中TRF1、TRF2蛋白的表达. 结果 (1)HPV16、HPV18阳性感染率CIN组[63.9%(23/36)]和宫颈鳞癌组[97.1%(34/35)]显著高于正常组[20.0%(3/15)](x~2=30.639,P<0.01).(2)TRF1阳性表达率宫颈鳞癌组[40.0%(14/35)]显著低于CIN组[63.9%(23/36)]和正常组[86.7%(13/15)](x~2=10.237,P<0.01);CIN Ⅲ组[42.9%(6/14)]显著低于CIN I组[90.0(9/10)](x~2:5.531,P<0.01).TRF2阳性表达率宫颈鳞癌组[80.0%(28/35)]显著高于CIN组[52.8%(19/36)]和正常组[33.3%(5/15)](x~2=11.096,P<0.01).(3)HPV16、HPV18感染与TRF1蛋白的表达强度负相关(Rs=0.302,P<0.05),与TRF2蛋白的表达强度正相关(Rs=0.452,P<0.01). 结论 TRF1、TRF2在宫颈鳞癌的发展中起重要作用.TRF1表达的下调和TRF2表达的上调与HPV16、HPV18感染致宫颈鳞癌密切相关.
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人乳头瘤病毒16、18感染与宫颈病变组织γ干扰素及白细胞介素-10表达的关系分析
目的 研究分析人乳头瘤病毒(HPV) 16、18感染与宫颈病变组织γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素-10(IL-10)表达的关系,为临床诊疗提供参考.方法 选择2015年1月-2015年7月在佛山市妇幼保健院妇科进行诊治的126例HPV感染者作为研究对象.根据患者HPV的DNA检测分型结果,将其分成HPV16感染组42例,HPV 18感染组42例,以及非高危型HPV感染(NHRT-HPV)组42例,比较各组宫颈病变组织的IFN-γ、IL-10表达,Toll样受体4(TLR4)信号通路相关指标,以及线粒体腺苷酸转运体(ANT)、程序性死亡分子配体2(PD-L2)及凋亡抑制基因(Survivin)的表达,并分析HPV感染与上述指标的相关性.结果 各组IFN-γ及IL-10的mRNA及蛋白水平比较,差异存在统计学意义(P＜0.05).其中HPV16组和HPV18组IFN-γ的mRNA及蛋白水平明显低于NHRT-HPV组,IL-10则明显高于NHRT-HPV组(P＜0.05).各组TLR4、依赖髓样分化因子(MyD88)及核因子kB (NF-kB)的mRNA及蛋白水平比较,差异存在统计学意义(P＜0.05).HPV16组和HPV18组TLR4、MyD88及NF-kB的mRNA及蛋白水平均明显高于NHRT-HPV组(P＜0.05).各组ANT、PD-L2及Survivin的mRNA及蛋白水平比较,差异存在统计学意义(P＜0.05).HPV16组和HPV18组ANT的mRNA及蛋白水平明显低于NHRT-HPV组,PD-L2及Survivin的mRNA及蛋白水平明显高于NHRT-HPV组(P＜0.05).HPV感染与IL-10、TLR4、MyD88、NF-kB、PD-L2及Survivin呈正相关,与IFN-γ、ANT呈负相关.结论 HPV感染与免疫功能指标,TLR4信号通路相关指标以及细胞增殖相关基因之间存在紧密联系,其中HPV16、18感染与IL-10、TLR4、MyD88、NF-kB、PD-L2及Survivin呈正相关,与IFN-γ、ANT呈负相关.
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HPV E2蛋白及其在宫颈癌演变中的作用机制
宫颈癌及其癌前病变的发生是多种因素协同作用的结果,高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌演变的始动因素,而HPV与宿主染色体的整合则是推动宫颈癌变进展的重要事件.病毒基因组的整合破坏了E2基因完整性,E2蛋白断裂使宫颈细胞更易于永生化,促进癌变发展.下面就E2基因的功能及病毒基因组整合后癌变发生的机制进行阐述.E2蛋白是一种序列特异性DNA结合蛋白,可调节DNA复制、转录,在HPV感染及感染后病毒生活周期的正常维持中具有关键作用.宫颈癌的演变与高危型别HPV感染不可分割,以HPV16、HPV18两型感染常见.HPV16 E2蛋白编码基因序列位于基因组第2 755～3 852位;HPV18 E2蛋白编码基因序列位于基因组第2 817～3 914位.
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HPV16、18E6基因在喉癌组织中的表达
目的检测HPV16、18E6基因在喉癌中的表达,探讨其在喉癌发病过程中的作用.方法应用RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳方法检测30例声带息肉组织及48例喉癌组织.结果 30例声带息肉组织中6.67%(2/30)有HPV16、18E6基因表达,48例喉癌组织中87.5%(42/48)扩增HPV16E6基因, 79.17%(38/48)有HPV18E6基因表达.HPV16、18E6基因与喉癌的临床分型、病理分化程度、临床分期无明显关系(P>0.05),与淋巴结转移有关(P< 0.05).结论 HPV16、18E6基因与喉癌的发生密切相关,是喉癌恶性转化的关键,预示着喉癌有较强的增殖能力及转移能力.
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Notch1通路活化抑制EC109细胞的增殖及机制探讨
背景与目的:Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)早期蛋白E6和E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖.人食管鳞状细胞癌细胞系EC109细胞为HPV18阳性细胞.本研究将Notch1胞内段(intracellular domain of Notch,ICN)转入EC109细胞,导致EC109细胞中Notch通路的组成性活化,从而探讨Notch通路活化与EC109细胞增殖的关系及机制.方法:用脂质体转染法将ICN转入体外培养的EC109细胞,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR检测HPV18E6/E7基因的表达:用Western印迹法检测周期蛋白激酶抑制因子p53的表达.结果:ICN转染入EC109细胞后,EC109细胞增殖受抑;细胞周期阻滞在G_2/M期,转目的基因组G_2/M期细胞所占比例[(42.57±1.57)%]与未转染组[(1.88±0.66)%]及转空质粒组[(1.994±1.02)%]相比差异均有显著性(P<0.01).E6/E7基因表达降低:p53表达升高,转ICN组(2.154±0.23)与未转染组(0.45±0.07)及转空质粒组(0.464±0.02)相比差异均有显著性(P<0.01).结论:Notch1通路活化可以抑制HPV18 E6/E7基因的表达,导致p53通路的活化,使HPV18阳性EC109细胞增殖周期阻滞于G_2/M期,抑制EC109细胞的生长.
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HPV18E77-15免疫原性的实验研究
目的 鉴定抗原肽HPV18 E77-15能否诱导HLA-A2+健康供者的外周血淋巴细胞(PBL)产生抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL),判断其是否具有免疫原性.方法 通过体外细胞培养技术分为两组,实验组:负荷抗原肽为HPV18E77-15,对照组:负荷的抗原肽为HBVc17-28,采用抗原肽负荷外周血单个核细胞(PBMC)及T2 细胞作为抗原呈递细胞,重复刺激HLA-A2 阳性健康供者的外周血淋巴细胞(PBLs),1 周1次,共3次;分别在第1 轮刺激后和第3 轮刺激后,采用RPE 标记的抗原肽特异性五聚体和FITC标记的CD8+抗体通过流式细胞仪检测抗原肽所诱导产生的抗原肽特异性CTL 的频率.结果 在流式细胞仪检测中,实验组第1轮刺激后所选淋巴细胞群中CD8+五聚体+ 双阳性的抗原肽特异性CTL 为(1.87±0.01)%,第3 轮刺激后抗原肽特异性CTL 增至(15.73±2.47)%;而对照组中未检出抗原肽特异性的CTL细胞增殖.结论 抗原肽HPV18E77-15能够诱导产生抗原肽特异性CTL增殖,具有良好的免疫原性,可能成为针对HPV18感染的治疗性多肽疫苗的候选表位.
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宫颈癌祸首HPV的独白
我是HPV,中文名叫人乳头瘤病毒,是近年的一个腕级人物,尽管还没有搞成“HPV门”,但已经“全球风雨”了.我的家族成员很多,有100多个,但实际上给宫颈造成麻烦的多半是HPV16和HPV18两个而已.我非常自豪,因为我成就了一名叫豪森的德国老伯,他居然发现我(HPV)与宫颈癌之间存在明确因果关系,并由此获得2008年度诺贝尔医学奖.
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宫颈癌祸首HPV的独白
我是HPV,中文名叫人乳头瘤病毒,是近年的一个腕级人物,尽管还没有搞成“HPV门”,但已经“全球风雨”了.我的家族成员很多,有100多个,但实际上给宫颈造成麻烦的多半是HPV16和HPV18两个而已.我非常自豪,因为我成就了一名叫豪森的德国老伯,他居然发现我(HPV)与宫颈癌之间存在明确因果关系,并由此获得2008年度诺贝尔医学奖.
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HPV18-E2与IL-12联合基因疫苗免疫效果研究
目的 研究人乳头瘤病毒18型E2基因(HPV18-E2)疫苗的免疫效果及白细胞介素-12(IL-12)对其免疫作用的影响. 方法 选6～8周龄Balb/c雌性小鼠35只,随机分为5组,即PBS组、pcDNA3.1(+)空质粒组、pcD-NA3.1(+)/E2组、pcDNA3.1(+)/IL-12组和pcDNA3.1(+)/E2+pcDNA3.1(+)/IL-12组,每组7只.小鼠肌肉注射DNA疫苗,200μg/次.隔2周免疫1次,共免疫4次.于0、2、4、6周剪尾取血,第8周摘眼球放血.ELISA测血清中的特异性IgG抗体及小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ、IL-4,MTT比色法检测淋巴细胞的增殖. 结果免疫8周pcD-NA3.1(+)/E2及pcDNA3.1(+)/E2+pcDNA3.1(+)/IL-12疫苗组抗体IgG A值显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),pcDNA3.1(+)/E2及pcDNA3.1(+)/E2+pcDNA3.1(+)/IL-12组小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ、IL-4水平明显高于其他对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),pcDNA3.1(+)/E2+pcDNA3.1(+)/IL-12组小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显增强,与pcDNA3.1(+)/E2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与其他对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 pcDNA3.1(+)/E2+pcDNA3.1(+)/IL-12核酸疫苗联合免疫小鼠能够有效的诱导细胞免疫和体液免疫应答,且免疫效应比pcDNA3.1(+)/E2基因疫苗强.
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新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中WT1基因启动子甲基化分析
目的 探讨WT1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女宫颈癌的相关性.方法 采用PCR方法检测HPV16和HPV18感染率;甲基化特异性PCR方法检测43例新疆维吾尔族妇女正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和48例宫颈癌组织的WT1基因启动子两个区域甲基化状况,并分析启动子甲基化与宫颈癌的相关性.结果 正常宫颈组、CIN和宫颈癌组中的WT1基因甲基化率分别为6.98％、36.67％和89.58％;HPV16和HPV18的感染率分别为13.95％、33.33％和68.75％,3组差异均有统计学意义(P＜0.01).WT1甲基化与HPV16和HPV18感染相关(P＜0.05).结论 WT1基因启动子甲基化与HPV16和HPV18感染相关且与维吾尔族宫颈癌发生相关.
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重组人干扰素α2b联合洁悠神对宫颈持续HPV感染患者端粒酶与HPV16/18E6蛋白表达的影响
目的 对重组人干扰素α2b(rhIFN-α2b)联合洁悠神治疗宫颈持续HPV感染的临床效果及其对端粒酶与HPV16/18 E6蛋白表达的影响进行研究.方法 随机选取2015年1月-2016年1月于常州市第一人民医院进行治疗的宫颈持续人乳头瘤病毒(HPV)感染的108例患者,按照数字随机表法分为观察组和对照组各54例,对照组使用rhIFN-α 2b治疗,观察组在对照组的基础上使用洁悠神治疗.分别对两组患者的疗效、临床指标进行统计,并检测端粒酶与HPV16/18 E6蛋白的表达水平.结果 观察组治疗有效率与对照组比较,差异有统计学意义(x2=5.240,P=0.022);观察组患者治愈时间周、阴道排液时间以及出血时间与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.485、4.765、4.365,P=0.001、0.000和0.000),观察组均短于对照组;治疗后观察组的HPVDNA负荷量低于对照组,并且转阴率与对照组比较,差异有统计学意义(x2=6.546,P=0.000);治疗后两组患者的端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均降低,差异有统计学意义(x2=4.746、4.964,均P=0.000),其中观察组患者端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均低于对照组.结论 联合使用rhIFN-α 2b和洁悠神治疗宫颈持续HPV感染具有良好的治疗效果,可有效降低端粒酶和HPV16/18 E6蛋白阳性率,并可降低患有宫颈癌的风险.
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端粒酶和人乳头病毒16/18在宫颈癌中的表达及其临床意义
目的:探讨端粒酶(hTERC)和人乳头病毒(HPV) 16/18在宫颈癌中的表达及其临床诊断意义.方法:随机选择2009年3月～2012年3月,我院妇产科收治的宫颈癌确诊病例40例作为观察组.同时,随机选择在本院门诊就诊的宫颈诊断正常40例病理标本作为对照组.分别采用聚合酶链反应(PCR)技术和重复片段扩增方法银染定性法(TRAP-PCR),对所有样本宫颈组织中hTERC和HPV16/18的感染和表达情况进行检测.利用SPSS17.0软件运用Logistic分析各组HPV16/18和hTERC的感染和表达与宫颈病变的关联性.结果:宫颈癌组hTERC阳性率为60.0％,显著高于正常宫颈组的2.5％ (P＜0.01)；HPV-16/18阳性率达到92.50％,显著高于正常宫颈组阳性率7.50％ (P＜0.01)；宫颈癌易感性与hTERC、HPV16和HPV18阳性率关联关联系数分别为3.94、4.022和4.73,均达到显著水平(P＜0.05).结论:hTERC基因表达和HPV16/18感染与宫颈癌宫颈组织病变有密切的关联性,在宫颈癌发生发展中起重要作用,两者可以作为宫颈癌早期诊断的临床指标之一.
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HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化
目的：构建HPV18E7基因重组质粒，并探索其在大肠杆菌中的佳表达条件。方法以提取的 HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增 HPV18E7基因；将HPV18E7基因与载体pET-32a（＋）连接为重组质粒pET-32a（＋）-HPV18E7；将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中，探索优化表达的条件，以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基，IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高，尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导，HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的 HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。
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HPV18致癌机制及疫苗研究
HPV18型是仅次于HPV16型的高危性HPV病毒,研究发现HPV18型感染与多种肿瘤的发生有关,而HPV18E6E7癌基因在细胞转化中起着重要作用.本文针对HPV18的致癌分子机制和与肿瘤的关系以及相关疫苗的研发进展做一综述.
