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获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞TRF1、TRF2、RAP1 mRNA表达研究
本研究检测获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞的TRF1、TRF2、RAP1基因表达水平,探讨其与获得性再生障碍性贫血发病的关系.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测40例获得性再生障碍性贫血患者和20例正常对照组外周血单个核细胞中TRF1、TRF2、RAP1的基因表达情况.结果表明,获得性再生障碍性贫血患者的TRF1和RAP1 mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P＜0.05)；TRF2 mRNA表达水平较正常对照组明显降低(P＜0.01),并且TRF2与RAP1具有相关性(r=0.522,P=0.001).结论:TRF1、TRF2、RAP1可能参与了获得性再生障碍性贫血的发病过程.
关键词： 获得性再生障碍性贫血 外周血单个核细胞 TRF1 TRF2 RAP1 -
Ni2+亲和胶的制备及其对带His6标签融合蛋白的纯化
目的:制备Ni2+亲和胶,并检测其纯化带His6标签融合蛋白的效果.方法:在强碱条件下,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后,接上多个IDA臂,将Ni2+连接在IDA臂上,即为亲和胶成品.用亲和胶分别在变性和非变性的条件下,纯化包涵体和可溶性表达的带His6标签的人TRF1 和人tankyrase的PARP结构域,并通过Western印迹鉴定纯化的靶蛋白.结果:用自制的Ni2+亲和胶可以获得SDS-PAGE单一条带的目的蛋白,并得到Western印迹的鉴定.结论:自制的Ni2+亲和胶对带His6标签融合蛋白的纯化能力与商品胶完全等同,但价格低廉.
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端粒结合蛋白TRF1和TRF2表达水平在炎症性肠炎患者中的意义
目的 探讨端粒结合蛋白TRF1和TRF2表达水平在炎症性肠炎患者中的意义.方法检测14例溃疡性结肠炎,13例克罗恩病患者体内TRF1和TRF2表达水平,并与正常人群比较.结果 B组TRF1的mRNA表达水平显著低于A组(P < 0.05),同时A组TRF1的mRNA表达水平亦显著低于C组(P < 0.05),A组与B组TRF2的mRNA表达水平差异无统计学意义(P > 0.05),C组TRF2的mRNA表达水平均高于A组和B组.结论炎症性肠炎的发生发展与患者体内端粒融合以及染色体突变互为因果.
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Fas及TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的表达
目的 通过检测Fas蛋白及端粒结合蛋白TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡过程中的表达,探讨硒抗癌的机制.方法 用含不同浓度亚硒酸钠(0.5、2.5、5.0、.8.0 μmol/L)的培养液分别培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞24、48、72、96h后,用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法和Western blot法检测TRF1、TRF2蛋白的表达.结果 亚硒酸钠能提高Fas蛋白阳性表达细胞百分比(P＜0.05).免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可以降低TRF1蛋白和提高TRF2蛋白的灰度值(P＜0.05).Western blot检测结果显示:亚硒酸钠可以提高TRF1和降低TRF2蛋白表达强度(P＜0.05).它们都具有剂量依赖性.结论 亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制可能跟上调Fas蛋白和TRF1蛋白表达,下调了TRF2蛋白表达有关.
关键词： 亚硒酸钠 SGC-7901细胞株 Fas TRF1 TRF2 -
六味痛风饮联合苯溴马隆治疗痛风性关节炎疗效及对患者外周血TRF1、TRF2的影响
目的 探讨苯溴马隆联合六味痛风饮治疗痛风性关节炎的临床疗效及对患者外周血端粒重复序列结合蛋白(TRF)1和TRF2的影响.方法 将74例痛风性关节炎患者按照随机数字表法分为对照组与研究组,对照组采用苯溴马隆治疗,研究组在此基础上加用六味痛风饮治疗.治疗4周后,对比2组患者的临床疗效、不良反应,观察治疗前后血尿酸、血清炎症因子及外周血TRF1、TRF2水平的变化.结果 治疗4周后,研究组总有效率明显高于对照组(P＜0.05);研究组的血尿酸,血清IL-6、IL-10、IL-Iβ、TNF-α以及外周血单核细胞TRF1、TRF2水平均显著低于治疗前及同期对照组(P均＜0.05),TGF-β1水平较治疗前及对照组显著升高(P均＜0.05),IL-4水平与治疗前及对照组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).治疗及随访过程中,2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05),研究组的复发率显著低于对照组(P＜0.05).结论 六味痛风饮联合苯溴马隆可有效降低痛风性关节炎患者的血尿酸水平,改善临床症状,降低复发率,通过抑制免疫细胞的活化增殖,调控TRF1和TRF2的高表达来降低机体免疫炎症反应可能是其作用机制之一,可考虑进一步推广使用.
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宫颈鳞癌和上皮内瘤变组织中TRF1、TRF2及 HPV16、HPV18的检测及其意义
目的 研究端粒结合蛋白TRF1、TRF2在宫颈鳞癌发生发展中的作用并分析HPV16、HPV18感染与TRF1、TRF2蛋白表达的关系. 方法 随机选择南华大学附属第一医院病理科2005年9月至2006年10月期间的组织石蜡块标本共86例,采用原位杂交方法检测HPV16、HPV18在15例正常宫颈上皮、36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和35例宫颈鳞癌组织中的感染情况;采用免疫组化方法检测所有组织标本中TRF1、TRF2蛋白的表达. 结果 (1)HPV16、HPV18阳性感染率CIN组[63.9%(23/36)]和宫颈鳞癌组[97.1%(34/35)]显著高于正常组[20.0%(3/15)](x~2=30.639,P<0.01).(2)TRF1阳性表达率宫颈鳞癌组[40.0%(14/35)]显著低于CIN组[63.9%(23/36)]和正常组[86.7%(13/15)](x~2=10.237,P<0.01);CIN Ⅲ组[42.9%(6/14)]显著低于CIN I组[90.0(9/10)](x~2:5.531,P<0.01).TRF2阳性表达率宫颈鳞癌组[80.0%(28/35)]显著高于CIN组[52.8%(19/36)]和正常组[33.3%(5/15)](x~2=11.096,P<0.01).(3)HPV16、HPV18感染与TRF1蛋白的表达强度负相关(Rs=0.302,P<0.05),与TRF2蛋白的表达强度正相关(Rs=0.452,P<0.01). 结论 TRF1、TRF2在宫颈鳞癌的发展中起重要作用.TRF1表达的下调和TRF2表达的上调与HPV16、HPV18感染致宫颈鳞癌密切相关.
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端粒及其调控的研究进展
端粒是真核生物染色体的天然末端,由端粒DNA和端粒蛋白质组成,具有维持染色体结构完整性和稳定性的作用,与肿瘤和衰老相关性疾病关系密切.在调节端粒长度的诸多因素中,端粒酶至关重要.许多蛋白质组分有利于端粒复制和端粒长度稳定性之间的平衡,参与保持端粒长度稳定.它们通过分别与端粒和端粒酶的特异性结合发挥作用.其中比较重要的有TRF1和TRF2两种.本文就端粒的结构、功能、调控以及检测方法作一简要综述.
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MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达
目的 探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用.方法 以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析.结果 MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P＜0.005).随着病情的进展,TRF1表达升高(P＜0.005);随着病情的改善,TRF1表达降低(P＜0.01).结论 TRF1 mRNA随着病情变化在MDS患者骨髓的表达改变,提示TRF1作为端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一.
关键词： TRF1 端粒相关蛋白 骨髓增生异常综合征 基因 实时定量RT-PCR -
人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究
目的:研究人端粒结合因子1(telomere repeat binding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达.方法:应用分子克隆技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,表达绿色荧光(GFP)融合蛋白;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性Hela细胞和端粒酶阴性WI38-2RA细胞,Western Blot验证目的蛋白分子量,荧光显微镜观察TRF1在间期细胞和染色体的定位;利用药物阻断HeLa细胞于不同周期,流式细胞仪检测细胞周期,半定量Western Blot检测TRF1在不同细胞周期中的表达.结果:TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为1.3 kb和0.9 kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为80 kD和60 kD.TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达,在染色体则表达于染色体未端,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML)共定位,在端粒阳性细胞中则没有共定位.TRF1在HeLa细胞中以M期表达量高,G1/S表达低,M期表达量是G1/S期的3.9倍(t=12.92,P<0.01).结论:TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式,在HeLa细胞中TRF1呈周期性表达.
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骨髓增生异常综合征的免疫表型和SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因表达
目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)特征性免疫表型,SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因表达程度,及其与临床病情进展的关系.方法 抽取50例MDS患者骨髓细胞,用流式细胞学技术检测免疫表型；抽取单个核细胞,用RT-PCR方法检测SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因mRNA表达程度.结果 与对照组相比,MDS患者骨髓细胞原始群CD7和CD34表达增多；粒细胞群CD34表达增多,CD13、CD33、CD11b表达下降；单核细胞表达CD117和CD34.与对照组相比,MDS患者骨髓单个核细胞SURVIVIN和TRF1基因mRNA表达增加,P15INK4B基因mRNA表达下降(P均＜0.05).从低危组到高危组,SURVIVIN和TRF1基因mRNA表达增加,P15INK4B基因mRNA表达下降(P均＜0.05).结论 MDS免疫表型有其特征性,SURVIVIN、P15INK4B和TRF1基因表达可能与其发病进展有关.
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应用酵母双杂交系统筛选与 TRF1相互作用的蛋白质
目的：应用酵母双杂交系统筛选与端粒重复序列结合蛋白1（ TRF1）相互作用的蛋白质，探讨TRF1在HeLa细胞有丝分裂期的调控机制。方法：应用酵母双杂交技术，以pGBKT7-TRF1为诱饵质粒筛选人HeLa细胞cDNA文库，并对筛选结果进行测序及同源性分析。运用免疫共沉淀、体外沉降实验验证SAM68与TRF1是否能够相互结合。结果：酵母双杂交结果共发现5个可能与TRF1存在相互作用的蛋白，包括人SAM68蛋白、Cullin1蛋白、Plk1蛋白、Hsp70蛋白以及ATF5蛋白。体内免疫共沉淀实验和体外沉降实验证实SAM68能够与TRF1在体内与体外相互结合。结论：SAM68可能是一个新的TRF1结合蛋白，TRF1有可能参与了有丝分裂期的调控。
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一个新的端粒重复序列结合蛋白1相互作用蛋白的鉴定及其相互作用的研究
目的 为了进一步探讨TRF1的生物学功能,应用蛋白质肽指纹谱技术鉴定与TRF1相互作用的新的蛋白质,并对作用蛋白进行相互结合研究.方法 运用蛋白质肽指纹谱技术,对持续稳定表达Flag-TRF1的人HeLa细胞裂解液免疫沉淀产物进行分析,并对得到的外源性片段进行质谱测定及同源性分析.结果 成功构建稳定表达Flag-TRF1的人HeLa细胞,并进行蛋白质表达验证;蛋白质质谱分析得到一个新的TRF1相互作用蛋白β-TrCP;免疫共沉淀实验及体外沉降实验证实β-TrCP能够与TRF1在体内及体外相互结合;免疫荧光实验证实β-TrCP与TRF1在细胞内存在共定位.结论 应用蛋白质肽指纹谱技术,筛选到β-TrCP是一个新的TRF1相互结合蛋白,TRF1与β-TrCP能够在体内、外相互结合,TRF1与β-TrCP在HeLa细胞内存在共定位,为进一步研究TRF1的生物学功能提供了新的线索.
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端粒重复序列结合蛋白 TRF1与激酶相关蛋白 AKIP1相互作用的研究
目的：鉴定端粒重复序列结合蛋白 TRF1与激酶相关蛋白 AKIP1的体内外相互作用及生物学功能。方法以 pGBKT7-TRF1为诱饵筛选人 HeLa 细胞 cDNA 文库，对筛选到的 AKIP1进行质粒构建，并以免疫沉淀及体外沉降进行相互结合研究。结果酵母双杂交验证了 TRF1与 AKIP1可能存在相互结合；运用体外沉降实验和体内免疫共沉淀实验证实 AKIP1能够与 TRF1在体内外相互结合。结论应用酵母双杂交系统，筛选到 AKIP1可能是一个新的 TRF1结合蛋白，TRF1与 AKIP1能够在体内外相互结合，为进一步研究 TRF1在有丝分裂期的调控机制提供了新的线索。
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实时定量PCR检测TRF1、TRF2和hRAP1基因在急性髓细胞性白血病中mRNA表达
差异有统计学意义;AML患者组TRF1和TRF2 mRNA的表达改变具有一定的相关性(r=0.57,P＜0.01).结论:成功利用患者外周血检测出端粒结合蛋白TRF1,TRF2在白血病细胞中mRNA的表达水平下降,并首次检测发现hRAP1在AML患者细胞中存在表达下降,间接说明了hRAP1的表达下降也是白血病的发病原因之一.
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端粒重复序列结合蛋白TRF1及TRF2在前列腺癌中的表达及临床意义
目的:探讨端粒重复序列结合蛋白(telomere repeat binding factor 1,TRF1)及TRF2在前列腺癌中的差异性表达及临床意义.方法:选取我院2015年1月～2016年4月住院的前列腺癌患者及前列腺增生患者各50例,采用免疫组织化学方法检测各组患者TRF1及TRF2的表达,并对其表达水平与临床指标及Gleason评分进行相关性分析.结果:前列腺癌组织中TRF1蛋白表达水平明显高于前列腺增生组织,差异具有统计学意义(x2=62.69,P＜0.01);TRF2蛋白在两组中均呈现高表达,差异未见明显统计学意义(x2=1.13,P=o.76);单因素分析发现TRF1表达水平与有无外科包膜侵犯(Spearman's r=0.43,P=0.002)、精囊浸润(Spearman's r=0.35,P=0.01)及淋巴结转移(Spearman's r=0.41,P=0.003)、TPSA水平(r=0.61,P＜0.05)、Gleason评分(r=0.47,P=0.01)具有显著相关性,而与前列腺体积大小(r=0.06,P=0.75)及年龄(r=0.14,P=0.09)无明显相关性.结论:TRF1及TRF2在前列腺癌中均呈现高表达,但TRF2的表达无特异性,TRF1的表达对预测前列腺癌预后具有一定价值.
关键词： 前列腺癌 染色体终端 TRF1 TRF2 端粒重复序列结合蛋白 -
TRF1及hPOT1mRNA在鼻咽癌组织中的表达及临床意义
目的 检测端粒重复序列结合因子1(TRF1)和端粒保护蛋白1(hPOT1)在鼻咽癌组织中的表达,探讨其在鼻咽癌发生过程中的作用及其临床意义.方法 应用荧光定量RT-PCR检测47例鼻咽癌组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中TRF1及hPOT1的mRNA表达水平.结果 ①鼻咽癌组织中TPF1 mRNA的表达明显低于正常鼻咽部黏膜组织(P =0.027),hPOT1的mRNA表达强度明显高于正常鼻咽部黏膜组织(P=0.013).②TRF1 mRNA的表达与鼻咽癌T分期相关(P =0.038),但与临床分期和有无颈部淋巴结转移无明显相关(P＞0.05).③鼻咽癌组织中hPOT1 mRNA的表达与鼻咽癌临床分期、T分期和有无颈部淋巴结转移相关(P=0.013,P=0.025,P=0.041).④鼻咽癌组织中TRF1 mPNA与hPOT1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.461).结论 鼻咽癌组织中TRF1 mRNA的表达下降可能与鼻咽癌的发生相关,hPOT1 mRNA的表达增强可能与鼻咽癌的发生和发展相关.
