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端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域的鉴定
目的:鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域.方法:通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位.结果:确定了hPOT1进核序列是定位于第355～375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列,其中R372,R373影响hPOT1的细胞核内定位.结论:鉴定出hPOT1的核定位结构域,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布.为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索.
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siRNA介导的hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞凋亡的影响
目的应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异地抑制端粒保护蛋白hPOT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞凋亡的影响.方法利用先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsRNA)的3种重组siRNA表达质粒,由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和电泳迁移率变化分析法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过流式细胞术、Hoechst荧光染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果不同hPOT1特异性序列的3种的重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平降低,细胞凋亡水平明显增加.结论 siRNA表达载体介导的RNAi能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达下调导致HeLa细胞凋亡.
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人端粒保护蛋白1(hPOT1)研究进展
随着对端粒、端粒酶研究的深入,一类被称为端粒结合蛋白的核蛋白越来越受到重视.人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres 1,hPOT1)及其基因在2001年被鉴定,它是一种单链端粒结合蛋白,有两大功能相关结构域:OB fold(oligonucleotide/oligosaccharide binding fold)和TRF1(TTAGGG repeatbinding factor 1)相互作用蛋白结构域.它与端粒DNA的结合具有高度特异性和对单链端粒DNA游离3'末端结合位点的优先性.hPOT1蛋白可能具有多种重要的功能.目前有关hPOT1蛋白的研究越来越多,现就hPOT1的生物学性质作一综述.
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食管鳞癌组织中hPOT1蛋白的表达及其意义
目的 检测食管鳞癌组织、切缘组织及痛旁组织中hPOT1蛋白的表达水平,探讨它们之间的关系及鳞癌组织中hPOT1的表达与肿瘤临床病理学参数的关系.方法 采用免疫组织化学技术检测上述组织中hPOT1蛋白的表达水平.结果 82例鳞癌组织、切缘组织中,hPOT1蛋白阳性表达率分别为78.05%(64/82)、73.17%(60/82)两者相比差异无统计学意义(P>0.05),51例癌旁组织中hPOT1蛋白阳性表达率为50.98%(26/51),与鳞癌组织相比差异有高度统计学意义(P<0.01).hPOTI蛋白的表达与患者的性别、年龄及肿瘤的大小、分化程度没有相关性(P＞0.05),与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及患者生存期密切相关,有统计学意义(P<0.05).结论 hPOT1蛋白的表达与食管鳞癌的发生、发展有密切的关系,检测hPOT1蛋白的表达对判断食管鳞癌预后有一定的指导意义.
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hPOT1基因正反义真核表达载体的构建及鉴定
目的构建人端粒保护蛋白(human protection of telomeres,hPOT1)基因的正、反义真核表达载体,以进一步研究hPOT1蛋白的功能及作用机制.方法用限制性内切酶将hPOT1 cDNA从pLPCNMyc POT1质粒上切下来,经适当改造后以正、反方向插入到质粒pcDNA3.1(-)中,构建hPOT1基因的正、反义真核表达载体;用PCR、酶切及DNA测序的方法鉴定hPOT1基因正、反义表达载体序列和方向的正确性.结果PCR、酶谱分析及DNA测序结果表明hPOT1正、反义真核表达载体序列和方向正确.结论成功地构建了hPOT1正、反义真核表达载体,为进一步研究hPOT1在端粒保护、细胞衰老和凋亡中的作用奠定了基础.
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TRF1及hPOT1mRNA在鼻咽癌组织中的表达及临床意义
目的 检测端粒重复序列结合因子1(TRF1)和端粒保护蛋白1(hPOT1)在鼻咽癌组织中的表达,探讨其在鼻咽癌发生过程中的作用及其临床意义.方法 应用荧光定量RT-PCR检测47例鼻咽癌组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中TRF1及hPOT1的mRNA表达水平.结果 ①鼻咽癌组织中TPF1 mRNA的表达明显低于正常鼻咽部黏膜组织(P =0.027),hPOT1的mRNA表达强度明显高于正常鼻咽部黏膜组织(P=0.013).②TRF1 mRNA的表达与鼻咽癌T分期相关(P =0.038),但与临床分期和有无颈部淋巴结转移无明显相关(P＞0.05).③鼻咽癌组织中hPOT1 mRNA的表达与鼻咽癌临床分期、T分期和有无颈部淋巴结转移相关(P=0.013,P=0.025,P=0.041).④鼻咽癌组织中TRF1 mPNA与hPOT1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.461).结论 鼻咽癌组织中TRF1 mRNA的表达下降可能与鼻咽癌的发生相关,hPOT1 mRNA的表达增强可能与鼻咽癌的发生和发展相关.
