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获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞TRF1、TRF2、RAP1 mRNA表达研究
本研究检测获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞的TRF1、TRF2、RAP1基因表达水平,探讨其与获得性再生障碍性贫血发病的关系.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测40例获得性再生障碍性贫血患者和20例正常对照组外周血单个核细胞中TRF1、TRF2、RAP1的基因表达情况.结果表明,获得性再生障碍性贫血患者的TRF1和RAP1 mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P＜0.05)；TRF2 mRNA表达水平较正常对照组明显降低(P＜0.01),并且TRF2与RAP1具有相关性(r=0.522,P=0.001).结论:TRF1、TRF2、RAP1可能参与了获得性再生障碍性贫血的发病过程.
关键词： 获得性再生障碍性贫血 外周血单个核细胞 TRF1 TRF2 RAP1 -
端粒结合蛋白TRF1和TRF2表达水平在炎症性肠炎患者中的意义
目的 探讨端粒结合蛋白TRF1和TRF2表达水平在炎症性肠炎患者中的意义.方法检测14例溃疡性结肠炎,13例克罗恩病患者体内TRF1和TRF2表达水平,并与正常人群比较.结果 B组TRF1的mRNA表达水平显著低于A组(P < 0.05),同时A组TRF1的mRNA表达水平亦显著低于C组(P < 0.05),A组与B组TRF2的mRNA表达水平差异无统计学意义(P > 0.05),C组TRF2的mRNA表达水平均高于A组和B组.结论炎症性肠炎的发生发展与患者体内端粒融合以及染色体突变互为因果.
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Fas及TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的表达
目的 通过检测Fas蛋白及端粒结合蛋白TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡过程中的表达,探讨硒抗癌的机制.方法 用含不同浓度亚硒酸钠(0.5、2.5、5.0、.8.0 μmol/L)的培养液分别培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞24、48、72、96h后,用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法和Western blot法检测TRF1、TRF2蛋白的表达.结果 亚硒酸钠能提高Fas蛋白阳性表达细胞百分比(P＜0.05).免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可以降低TRF1蛋白和提高TRF2蛋白的灰度值(P＜0.05).Western blot检测结果显示:亚硒酸钠可以提高TRF1和降低TRF2蛋白表达强度(P＜0.05).它们都具有剂量依赖性.结论 亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制可能跟上调Fas蛋白和TRF1蛋白表达,下调了TRF2蛋白表达有关.
关键词： 亚硒酸钠 SGC-7901细胞株 Fas TRF1 TRF2 -
六味痛风饮联合苯溴马隆治疗痛风性关节炎疗效及对患者外周血TRF1、TRF2的影响
目的 探讨苯溴马隆联合六味痛风饮治疗痛风性关节炎的临床疗效及对患者外周血端粒重复序列结合蛋白(TRF)1和TRF2的影响.方法 将74例痛风性关节炎患者按照随机数字表法分为对照组与研究组,对照组采用苯溴马隆治疗,研究组在此基础上加用六味痛风饮治疗.治疗4周后,对比2组患者的临床疗效、不良反应,观察治疗前后血尿酸、血清炎症因子及外周血TRF1、TRF2水平的变化.结果 治疗4周后,研究组总有效率明显高于对照组(P＜0.05);研究组的血尿酸,血清IL-6、IL-10、IL-Iβ、TNF-α以及外周血单核细胞TRF1、TRF2水平均显著低于治疗前及同期对照组(P均＜0.05),TGF-β1水平较治疗前及对照组显著升高(P均＜0.05),IL-4水平与治疗前及对照组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).治疗及随访过程中,2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05),研究组的复发率显著低于对照组(P＜0.05).结论 六味痛风饮联合苯溴马隆可有效降低痛风性关节炎患者的血尿酸水平,改善临床症状,降低复发率,通过抑制免疫细胞的活化增殖,调控TRF1和TRF2的高表达来降低机体免疫炎症反应可能是其作用机制之一,可考虑进一步推广使用.
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宫颈鳞癌和上皮内瘤变组织中TRF1、TRF2及 HPV16、HPV18的检测及其意义
目的 研究端粒结合蛋白TRF1、TRF2在宫颈鳞癌发生发展中的作用并分析HPV16、HPV18感染与TRF1、TRF2蛋白表达的关系. 方法 随机选择南华大学附属第一医院病理科2005年9月至2006年10月期间的组织石蜡块标本共86例,采用原位杂交方法检测HPV16、HPV18在15例正常宫颈上皮、36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和35例宫颈鳞癌组织中的感染情况;采用免疫组化方法检测所有组织标本中TRF1、TRF2蛋白的表达. 结果 (1)HPV16、HPV18阳性感染率CIN组[63.9%(23/36)]和宫颈鳞癌组[97.1%(34/35)]显著高于正常组[20.0%(3/15)](x~2=30.639,P<0.01).(2)TRF1阳性表达率宫颈鳞癌组[40.0%(14/35)]显著低于CIN组[63.9%(23/36)]和正常组[86.7%(13/15)](x~2=10.237,P<0.01);CIN Ⅲ组[42.9%(6/14)]显著低于CIN I组[90.0(9/10)](x~2:5.531,P<0.01).TRF2阳性表达率宫颈鳞癌组[80.0%(28/35)]显著高于CIN组[52.8%(19/36)]和正常组[33.3%(5/15)](x~2=11.096,P<0.01).(3)HPV16、HPV18感染与TRF1蛋白的表达强度负相关(Rs=0.302,P<0.05),与TRF2蛋白的表达强度正相关(Rs=0.452,P<0.01). 结论 TRF1、TRF2在宫颈鳞癌的发展中起重要作用.TRF1表达的下调和TRF2表达的上调与HPV16、HPV18感染致宫颈鳞癌密切相关.
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端粒及其调控的研究进展
端粒是真核生物染色体的天然末端,由端粒DNA和端粒蛋白质组成,具有维持染色体结构完整性和稳定性的作用,与肿瘤和衰老相关性疾病关系密切.在调节端粒长度的诸多因素中,端粒酶至关重要.许多蛋白质组分有利于端粒复制和端粒长度稳定性之间的平衡,参与保持端粒长度稳定.它们通过分别与端粒和端粒酶的特异性结合发挥作用.其中比较重要的有TRF1和TRF2两种.本文就端粒的结构、功能、调控以及检测方法作一简要综述.
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双基因干扰对MCF-7细胞基因表达抑制及细胞凋亡影响的研究
背景与目的:肿瘤细胞具有端粒酶高表达及端粒稳定性强两大特点.人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的催化亚单位,端粒重复序列结合因子2(TRF2)对维持端粒长度及端粒稳定性非常重要.本实验研究针对hTERT和TRF2的特异性RNAi腺病毒表达载体单独和联合转染乳腺癌MCF-7细胞后,对两基因的抑制效率以及对细胞凋亡的影响,探索针对端粒的多基因干扰对乳腺癌基因治疗的可行性.方法:构建RNA干扰腺病毒载体rAd-hTERT和rhd-TRF2,单独和联合转染MCF-7细胞后实时荧光定量PCR检测hTERT和TRF2基因表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果:①转染后48 h,与PBS组相比,rAd-hTERT对hTERT基因mRNA的抑制率约86%,对TRF2基因表达无明显抑制(P>0.05);rAd-TRF2对TRF2基因mRNA的抑制率约80%,对hTERT基因表达无明显抑制(P>0.05):rAd-hTERT/rAd-TRF2联合干扰组对hTERT基因表达抑制率约88%,TRF2基因表达抑制率约85%,联合干扰与单基因干扰相比,对hTERT和TRF2基因的表达抑制差异无显著性(P>0.05).②干扰组转染后1～6 d均能促进细胞凋亡.单基因干扰组转染后3～5 d凋亡明显,第5天达凋亡高峰:凋亡率rAd-hTERT组为46.2%,rAd-TRF2组为43.5%.联合组转染后第1天凋亡率为46.2%,第2天为68.5%,第3～6天均维持在较高水平,第6天达77.6%.转染后1～6 d,联合干扰细胞凋亡率与单基因干扰细胞凋亡率相比,差异均有显著性(P<0.05).结论:①rAd-hTERT和rAd-TRF2转染MCF-7细胞48 h后可分别显著抑制hTERT和TRF2基因mRNA表达,但rAd-hTERT和rAd-TRF2在抑制hTERT和TRF2基因mRNA表达上无相互协同或相互抑制作用.②rAd-hTERT和rAd-TRF2均能有效促进MCF-7细胞凋亡,且两者联合干扰效果具有累加效应.因此利用联合干扰技术靶向抑制端粒酶活性和端粒稳定性相关的多基因的表达能更高效地促进乳腺癌细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖与生长.
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实时定量PCR检测TRF1、TRF2和hRAP1基因在急性髓细胞性白血病中mRNA表达
差异有统计学意义;AML患者组TRF1和TRF2 mRNA的表达改变具有一定的相关性(r=0.57,P＜0.01).结论:成功利用患者外周血检测出端粒结合蛋白TRF1,TRF2在白血病细胞中mRNA的表达水平下降,并首次检测发现hRAP1在AML患者细胞中存在表达下降,间接说明了hRAP1的表达下降也是白血病的发病原因之一.
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端粒重复序列结合蛋白TRF1及TRF2在前列腺癌中的表达及临床意义
目的:探讨端粒重复序列结合蛋白(telomere repeat binding factor 1,TRF1)及TRF2在前列腺癌中的差异性表达及临床意义.方法:选取我院2015年1月～2016年4月住院的前列腺癌患者及前列腺增生患者各50例,采用免疫组织化学方法检测各组患者TRF1及TRF2的表达,并对其表达水平与临床指标及Gleason评分进行相关性分析.结果:前列腺癌组织中TRF1蛋白表达水平明显高于前列腺增生组织,差异具有统计学意义(x2=62.69,P＜0.01);TRF2蛋白在两组中均呈现高表达,差异未见明显统计学意义(x2=1.13,P=o.76);单因素分析发现TRF1表达水平与有无外科包膜侵犯(Spearman's r=0.43,P=0.002)、精囊浸润(Spearman's r=0.35,P=0.01)及淋巴结转移(Spearman's r=0.41,P=0.003)、TPSA水平(r=0.61,P＜0.05)、Gleason评分(r=0.47,P=0.01)具有显著相关性,而与前列腺体积大小(r=0.06,P=0.75)及年龄(r=0.14,P=0.09)无明显相关性.结论:TRF1及TRF2在前列腺癌中均呈现高表达,但TRF2的表达无特异性,TRF1的表达对预测前列腺癌预后具有一定价值.
关键词： 前列腺癌 染色体终端 TRF1 TRF2 端粒重复序列结合蛋白 -
人TRF2基因有效siRNA序列的筛选
目的 设计合成干扰端粒重复序列结合因子2(telomeric repeatbinding factor 2,TRF2)基因表达的不同小型干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制TRF2基因表达的siRNA.方法 根据人TRF2mRNA的序列,设计合成3对不同的针对TRF2的siRNA、应用脂质体LipofectamineTM2000转染试剂将三对siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,实时荧光定量RT-PCR技术检测TRF2 mRNA表达水平、Western印迹法检测TRF2蛋白表达以确定干扰效果.结果 设计合成的3对TRF2 siRNA中有2对siRNA可有效抑制TRF2基因表达.结论 成功设计合成了针对TRF2基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断TRF2表达的siRNA,为进一步应用RNAi技术抗TRF2基因进行肿瘤基因治疗研究奠定实验基础.
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应用实时荧光定量PCR筛选TRF2 siRNA佳靶序列
有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一.[目的]筛选有效的TRF2 siRNA,为应用RNAi技术抗TRF2研究提供实验基础.[方法]采用化学合成法合成3段针对TRF2的siRNA、应用脂质体LipofectamineTM2000转染试剂将3段siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞、实时荧光定量RT-PCR技术检测TRF2 mRNA表达水平以确定干扰效果.[结果]3段TRF2 siRNA中有2段siRNA可有效降低TRF2 mRNA表达.[结论]利用化学合成法合成siRNA,应用实时荧光定量PCR技术检测目的基因干扰效果可用于快速、高效筛选特异性基因表达抑制的siRNA.
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端粒重复序列结合因子2在新生鼠缺氧缺血脑损伤中的表达及作用
目的 研究端粒重复序列结合因子2(Telomere repeat binding factor 2,TRF2)在新生大鼠缺氧缺血脑损伤(Hypoxic ischemic brain damage,HIBD)中的表达情况,探讨TRF2在调控神经元凋亡中的作用.方法 构建新生大鼠HIBD模型,于建模后2h、12h、24h和72h收集脑组织标本,采用免疫组化检测四个时间点HIBD新生大鼠脑组织中TRF2、p-Chk2、Chk2和Bax的表达,然后利用Western blot技术检测HIBD新生大鼠右侧脑组织中TRF2和Bax蛋白的表达.结果 在新生大鼠缺氧缺血2h后,TRF2、p-Chk2和Bax的表达开始升高,并于24h时达到表达高峰,而Chk2的表达没有明显变化.Western blot证实缺氧缺血大鼠脑组织中TRF2和Bax蛋白在缺氧缺血后2h开始升高,于24h达到表达高峰.结论 新生大鼠HIBD使TRF2表达显著升高,可能通过激活Chk2和Bax蛋白诱导神经元凋亡.
