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Fas及TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的表达
目的 通过检测Fas蛋白及端粒结合蛋白TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡过程中的表达,探讨硒抗癌的机制.方法 用含不同浓度亚硒酸钠(0.5、2.5、5.0、.8.0 μmol/L)的培养液分别培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞24、48、72、96h后,用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法和Western blot法检测TRF1、TRF2蛋白的表达.结果 亚硒酸钠能提高Fas蛋白阳性表达细胞百分比(P＜0.05).免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可以降低TRF1蛋白和提高TRF2蛋白的灰度值(P＜0.05).Western blot检测结果显示:亚硒酸钠可以提高TRF1和降低TRF2蛋白表达强度(P＜0.05).它们都具有剂量依赖性.结论 亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制可能跟上调Fas蛋白和TRF1蛋白表达,下调了TRF2蛋白表达有关.
关键词： 亚硒酸钠 SGC-7901细胞株 Fas TRF1 TRF2 -
亚硒酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及hTERT表达的影响
目的 探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株生长、凋亡和hTERT表达的作用及相关机制.方法 用含不同浓度亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24、48、72、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901细胞形态的影响;MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞细胞的凋亡的影响;链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)免疫细胞化学法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERT蛋白表达的影响.结果 (1)MTT法结果显示:用亚硒酸钠培养SGC-7901细胞株24,48,72,96h后,随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h后当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L时,与对照组比较其吸光度值均明显降低(P＜0.01),48、96h后各浓度亚硒酸钠组与正常对照组比其吸光度值均明显降低(P＜0.01).随浓度的增加,亚硒酸钠时SGC-7901细胞生长抑制率逐渐增加.(2)流式细胞仪检测结果显示:亚硒酸钠可促进SGC-7901细胞发生细胞凋亡.5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组比正常对照组凋亡率明显升高(P＜0.01).(3)免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可降低SGC-7901细胞中hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5、8μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P＜0.01),48h时0.5、5.O、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P＜0.01),72h时2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P＜0.01),96h时实验组与对照组比较MOD均明显降低(P＜0.01).结论 亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关.
关键词： 亚硒酸钠 SGC-7901细胞株 细胞凋亡 端粒酶逆转录酶 -
黄独乙素对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响及其机制
目的：研究黄独乙素对人胃癌细胞 SGC-7901增殖的影响及相关的作用机制。方法用RPMI-1640培养液对SGC-7901细胞进行传代培养，用不同浓度（0~160μg/mL）黄独乙素分别对SGC-7901细胞进行处理，应用CCK-8法检测细胞的增殖率；光学显微镜观察细胞形态学改变；Western blot检测细胞周期蛋白CyclinD1表达的变化。结果黄独乙素以计量依赖方法抑制胃癌细胞生长，抑制率高达57.26％；细胞形态发生明显改变；CyclinD1蛋白水平表达显著下调。结论黄独乙素能显著抑制SGC-7901细胞的增殖，其机制可能与下调细胞周期蛋白CyclinD1的表达有关。
关键词： 黄独乙素 胃肿瘤 SGC-7901细胞株 增殖 CyclinD1蛋白 -
血管扩张刺激磷蛋白磷酸化157位点突变的慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建含血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化位点157突变成丙氨酸的慢病毒载体(L-S157A)并转染SGC-7901细胞.方法:针对VASP157位点的引物,利用重叠PCR的方法定点突变该位点从丝氨酸至丙氨酸,重组入慢病毒载体,包装病毒后感染SGC7901细胞,并利用测序和western blot方法对突变进行验证.结果:VASP磷酸化157位点突变成丙氨酸,并且转导入293T和SGC-7901细胞,L-S157A明显下调SGC-7901细胞中p-VASP S 157的表达.结论:成功地构建了针对VASP蛋白丝氨酸157位点的突变的表达载体,并获得了稳定表达该突变体的SGC-7901细胞株.为进一步研究VASP及其磷酸化在胃癌中的功能奠定了基础.
关键词： 血管扩张刺激磷蛋白 SGC-7901细胞株 慢病毒 -
蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的实验研究
目的测定蝙蝠葛酚性碱对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响.方法通过MTT法和台盼兰法,观察蝙蝠葛酚性碱在不同浓度,不同时间条件下,对胃癌细胞SGC-7901增殖作用的影响.结果 蝙蝠葛酚性碱能明显抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖关系,随浓度增大和作用时间延长其抑制率呈上升趋势.结论 蝙蝠葛酚性碱对胃癌可能具有一定治疗作用.
关键词： 蝙蝠葛酚性碱 胃癌 SGC-7901细胞株 细胞增殖 -
人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及其活体荧光成像检测
目的:建立可动态实时监测的人胃癌裸鼠原位移植瘤模型.方法:将稳定表达荧光素酶的人胃癌细胞SGC-7901fLuc+注入裸鼠后肢根部皮下形成皮下移植瘤.待皮下移植瘤瘤块长至直径0.5 cm时,剥取肿瘤组织,应用叠合法将瘤块原位移植于裸鼠胃小弯处,形成原位移植瘤模型.利用小动物活体荧光成像系统,每4日监测移植瘤的进展情况.荷瘤3周后,解剖荧光成像阳性小鼠,利用H-E染色、光镜下观察移植瘤的形态.结果:应用小动物活体荧光成像系统,可在荷瘤裸鼠胃部检测到逐渐增强的荧光信号.荷瘤裸鼠胃部存在肿瘤包块贴附于胃壁,包块直径为0.5 ～1.0 cm,包块周围与相邻组织器官边界清晰,未见粘连,检查腹腔未见转移,未见腹水形成.应用叠合法构建人胃癌裸鼠原位移植瘤模型成功率为95％(19/20).对荷瘤胃组织H-E染色后,可见异常肿瘤细胞,肿瘤包膜完整,符合胃癌组织学特征.结论:成功建立了操作简便、成瘤率高的可动态监测的人胃癌裸鼠原位移植瘤模型,为研究胃癌发生机制、研发抗癌药物提供了理想的实验工具.
关键词： 胃原位移植瘤模型 活体荧光成像技术 SGC-7901细胞株 -
半夏总生物碱对人胃癌细胞增殖的抑制作用
目的：观察半夏总生物碱（ total alkaloids from Pinellia Ternate，TATP）对人胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制的影响，探讨其可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法及集落形成率实验，检测不同浓度的TATP对SGC-7901细胞株的生长抑制作用；应用单细胞凝胶电泳技术检测TATP导致SGC-7901细胞的DNA损伤情况。结果人胃癌细胞SGC-7901经TATP处理后，其体外增殖能力明显下降，且与药物的剂量、干预时间呈正相关，与对照组比较，差异均有统计学意义（ P＜0畅05或＜0．01）。单细胞凝胶电泳（ single cell gel electrophoresis ， SCGE）中，TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．01），且呈现一定的浓度依赖性。结论一定剂量的TATP能明显抑制SGC-7901细胞的增殖，其作用机制可能与细胞DNA的损伤有关。
关键词： 半夏总生物碱 SGC-7901细胞株 增殖抑制 单细胞凝胶电泳 DNA损伤 -
蜂胶黄酮pinobanksin-3-acetate对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及机制
[目的]探讨蜂胶黄酮pinobanksin-3-acetate对体外培养的胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及部分基因表达的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTr)显色法检测不同浓度PB3A作用不同时间对SGC-7901细胞生长所产生的影响,计算生长抑制率和IC50值;倒置显微镜观察PB3A干预后细胞的形态变化;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测PB3A(40、80μg/ml)干预24h后SGC-7901细胞FOS、GEM、RGS2、GADD45G及HSPA6的蛋白表达水平,利用Spearman进行候选基因相关性分析.[结果]PB3A可明显抑制SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈时间和剂量依赖性.随PB3A剂量的增多,SGC-7901细胞的凋亡率渐增,细胞的早期凋亡率从25.6％提高到50.2％.通过40μg/ml和80μg/ml PB3A干预胃癌SGC-7901细胞24h后与对照组相比,高浓度组GADD45G、HSPA6、GEM、RGSR及FOS蛋白表达有极显著性差异(P＜0.01),而低浓度组GADD45G、GEM和HSPA6蛋白表达有显著性差异(P＜0.05).[结论]PB3A在体外可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导凋亡的作用,并呈剂量依赖性变化趋势.机制可能与其诱导GEM、RGSR、FOS及HSPA6蛋白的上调表达有关,以上基因可能相互协同导致肿瘤细胞增殖信号通路的抑制并促进胃癌细胞的凋亡.
关键词： PB3A 胃肿瘤 SGC-7901细胞株 细胞凋亡 -
MTT法研究化疗药对人胃癌细胞株(SGC-7901)的抑制作用
[目的]研究化疗药物顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)、吉西他滨(GEM)、奈达铂(NDP)、奥沙利铂(L-OHP)、氟尿嘧啶(5-Fu)、丝裂霉素(MMC)对人胃癌细胞株(SGC-7901)抑制率及化疗药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响.[方法]采用MTT测定法观察DDP、VCR、GEM、NDP、L-OHP、5-Fu和MMC不同浓度及作用时间对SGC-7901细胞株的抑制作用.化疗药物浓度参照其在人体血浆峰值浓度(plasma peak concentration,PPC)的0.001～1倍范围.作用时间选择24h、48h、72h. [结果]SGC-7901细胞侏对不同化疗药物的敏感性存在差异.对DDP、L-OHP、MMC、NDP、5-Fu敏感,大抑制率分别为99.5%、100%、100%、100%和97.5%:对GEM次之,大抑制率为67.6%;对VCR不敏感.DDP、L-OHP、NDP和MMC的药物浓度与抑制率密切相关,GEM、5-Fu和MMC的药物作用时间与抑制率密切相关.[结论]不同化疗药物对人胃癌细胞株(SGC-7901)的抑制作用及量效、时效关系,为临床胃癌化疗方案的制定提供实验依据.
关键词： MTT法 胃肿瘤 SGC-7901细胞株 化疗药物 -
人胃癌细胞株增殖迁移和克隆成瘤的比较
我们选取4株常见的人胃癌细胞,通过体内外实验,比较其增殖、迁移和克隆成瘤能力.一、材料与方法1.材料和细胞培养:AGS、BGC-823、SGC-7901细胞株购自上海市细胞生物研究所,MKN-28细胞株由上海内分泌代谢病研究所赠送,Boyden迁移槽购自Costar公司,BALB/C裸小鼠购自扬州大学比较医学中心.细胞用含10%小牛血清的DMEM传代培养,取对数生长期细胞进行实验.
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地西他滨联合化疗药物对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用
目的:研究地西他滨单独或联合5-氟尿嘧啶/紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞株的抑制作用.方法:应用MTS方法检测地西他滨单独或联合5-氟尿嘧啶/紫杉醇作用于胃癌SGC-7901细胞株后,在不同浓度梯度和不同时间在490 nm波长处的吸光度(A)值,并计算细胞增殖抑制率.同时,采用流式细胞仪检测中间浓度组各药物单独或联合应用在48 h对细胞凋亡的影响.MTS检测时间分别选择细胞增殖12、24、36、48、60及72 h,流式细胞仪检测时间选择48 h.结果:地西他滨对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用均随着时间和浓度的递增而逐渐升高;地西他滨联合5-氟尿嘧啶或紫杉醇组对胃癌细胞的抑制率均较单药组升高(P ＜ 0.05).在诱导细胞凋亡方面,地西他滨联合用药组48 h的细胞凋亡率均高于单独用药组(P ＜ 0.05).结论:地西他滨能增强5-氟尿嘧啶和紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,能促进5-氟尿嘧啶和紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞的凋亡.
