首页 > 文献资料
-
灵巴菌质油对A549细胞成瘤能力及伪足形成的影响
目的:探讨灵巴菌质油对人肺癌细胞A549成瘤能力及伪足形成的效应.方法:灵巴菌质油25,50,100 mg·L-1分别作用A549细胞20d和24 h,通过软琼脂克隆形成法和PI单染法观察灵巴菌质油对A549细胞的成瘤能力和生长周期的影响;灵巴菌质油100 mg·L-1作用A549细胞24 h,通过免疫荧光染色法观察细胞骨架的影响.结果:灵巴菌质油能够抑制细胞克隆的形成,低、中、高剂量组作用A549细胞20 d后的平均细胞克隆形成数与空白对照组比较均有极显著差异(P＜0.01),抑制率与药物浓度呈正相关,并将细胞的生长阻滞在G2期,中、高剂量组G2期细胞比例分别为21.92％和29.94％,与空白对照组12.44％相比均有显著性差异(P＜0.05);但灵巴菌质油能改变A549细胞中微丝结构的分布,使其产生伪足.结论:灵巴菌质油具有降低A549细胞克隆形成能力及损伤其细胞骨架的作用,但它亦可能导致瘤细胞的迁移.
-
SiRNA干扰β-catenin对K562细胞在体内成瘤能力作用的研究
本研究旨在探讨β-联蛋白(β-catenin)对K562 细胞体内成瘤能力的影响.采用β-catenin序列特异的siRNA下调K562细胞中靶基因β-catenin的表达,将处理后的K562细胞植入BALB/c裸鼠皮下,现察其在裸鼠皮下成瘤率及成瘤曲线.同时用未处理的K562细胞及非特异序列siRNA处理的K562细胞作为对照.结果表明,未处理组(n=9)、对照组(无关序列干抚)(n=8)和试验组(β-catenin特异性干抚)(n=9)成瘤率分别为100%、87.5%和0%,试验组成瘤率与前两组比较有显著的统计学差异(p<0.001).未处理组瘤块体积增长略快于对照组,但2组的瘤块体积增长速度无统计学差异;在试验组未见成瘤.结论:特异性干扰下调β-catenin的表达,影响K562细胞体内成瘤.
-
胰腺癌干细胞研究进展
胰腺癌是一种恶性程度极高,预后极差的肿瘤,手术切除率低且术后容易复发和转移,并且对放、化疗不敏感.目前,人们在肿瘤的研究中提出了肿瘤干细胞理论.该理论认为,肿瘤内部存在一小部分具有干细胞特性的细胞,即肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),它具备无限增殖、多向分化、自我更新和极强的成瘤能力,形成肿瘤并维持肿瘤的生长,且对常规的放化疗更不敏感,还可能是肿瘤转移、复发的根源.
-
肿瘤干细胞与肿瘤侵袭性的研究进展
有研究认为,肿瘤可被视为一种干细胞疾病,是由具有成瘤能力的肿瘤细胞增殖发育而成的异常组织.目前,白血病[1]、乳腺癌[2]、胰腺癌[3]、脑肿瘤[4]及其他一些实体瘤的肿瘤干细胞相继被发现,肿瘤复发转移的研究不断深入,为揭示肿瘤发病机制和制定有效的治疗策略提供了新的线索.
-
结肠癌干细胞蛋白表达及生物学特性：培养与筛选分析
背景：近年来国内外学者相继分离出 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，但大多为有关大肠癌细胞系中肿瘤干细胞的分离研究，关于结肠癌干细胞功能的报道相对较少。目的：从结肠癌组织对结肠癌干细胞进行筛选和分离培养，探讨结肠癌干细胞蛋白表达情况以及生物学特性。方法：获得结肠癌组织标本，进行原代细胞分离。分离 EpCAMhighCD44+细胞，利用流式细胞仪进行检测、分选，并利用无血清培养基对细胞进行培养和传代，观察细胞球形成情况。对小鼠进行细胞皮下回植，观察其日常表现以及肿瘤生长情况。待肿瘤生长到直径1 cm以上之后，获得肿瘤组织进行免疫组化检验，观察EpCAMhighCD44+肿瘤细胞流式细胞仪分选情况和不同时间 EpCAMhighCD44+肿瘤细胞在无血清培养基中的生长情况，以及小鼠成瘤情况和移植瘤免疫组化检查中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20表达情况。结果与结论：经检测在获得的结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，在结肠癌原代细胞中EpCAMhighCD44+细胞的比例为1.7%-38%。在无血清培养基中对EpCAMhighCD44+肿瘤细胞进行24 h的培养之后进行观察，可以发现产生一定体积较小松散的悬浮细胞球，但数量较少；培养21 d之后进行观察，可以发现形成形态一致的细胞球，且形态致密。经裸鼠皮下回植和观察，可以发现形成移植瘤。对移植瘤进行苏木精-伊红染色和观察，可以发现呈现出典型的结肠癌细胞形态特征。对移植瘤进行免疫祖化检查，所有移植瘤均能表选中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20。经检测发现，经10PPC、1PPC、0.1PPC 5-氟尿嘧啶干预，EpCAMhighCD44+Colo205细胞的增殖均得到促进，且随着药物作用时间的延长促进作用逐渐增强。提示结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，其具有一定的增殖、更新、分化以及致瘤能力和耐化疗能力。
-
肿瘤细胞成瘤模型的建立与制片的体会
裸鼠体内成瘤实验是检验肿瘤细胞系成瘤能力的金标准,通过培养肿瘤细胞株建立裸鼠荷瘤模型是研究肿瘤生长、转移生物学特性及其分子调控机制,以及寻找治疗新药、新方法的重要手段.目前用于建立模型的肿瘤细胞株种类较多,如大肠癌、胃癌、宫颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、鼻咽癌,但对不同成瘤模型的建立、成瘤特点、取材、固定及制片应注意的细节等报道较少.
-
Hes1在结肠癌组织中的表达及对SW620细胞成瘤能力的影响
背景与目的：研究发现Hes1可促进多种肿瘤的发生、发展和侵袭转移，且Hes1过表达可能会导致结肠癌的发生。本研究探讨Hes1在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌SW620细胞株成瘤能力的影响。方法：免疫组化和定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction， qRT-PCR)检测Hes1在结肠癌组织中的表达并分析其表达与结肠癌分化程度的关系；建立Hes1过表达的结肠癌SW620细胞株，qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测Hes1在mRNA水平和蛋白水平的表达，并在裸鼠体内检测Hes1对SW620细胞皮下成瘤能力的影响。结果：Hes1在正常结肠组织中少许表达，表达多位于结肠腺管的底部。然而Hes1在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常结肠组织，且Hes1的表达水平与细胞分化程度呈负相关(P<0.05)；在结肠癌SW620细胞株中稳定转染Hes1后，Hes1被成功过表达，约380倍(P<0.05)；用1×105个Hes1过表达的SW620细胞及对照细胞株分别注射至裸鼠皮下，结果Hes1过表达的SW620细胞成瘤能力增强，瘤体较对照组大，生长速度较对照组快。结论：Hes1在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常结肠组织，并且随结肠癌组织分化程度降低而表达量上调；Hes1在体内促进结肠癌SW620细胞的成瘤能力。
-
肺腺癌中FPR1的表达及其对细胞迁移、成瘤能力的影响
目的 探讨甲酰肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)在肺腺癌组织中的表达以及对肺腺癌细胞迁移、成瘤能力的影响.方法 采用免疫组化法检测肺腺癌组织及癌旁组织中FPR1的表达,分析患者临床资料的相关性.采用人肺腺癌细胞A549为分析对象,检测FPR1激动剂甲酰甲硫氨酰(N-formyl methionyl leucyl phenylalanine,fMLP)以及拮抗剂Boc2对细胞迁移的影响;构建裸鼠皮下成瘤模型,绘制肿瘤生长曲线;2周后处死全部裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤平均质量;应用酶联免疫吸附反应(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组裸鼠血清中血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)的表达水平;应用Western blot检测各组细胞中FPR1、ERK蛋白活性以及各组裸鼠肿瘤中FPR1蛋白的表达变化.结果 50例肺腺癌癌组织中FPR1阳性率为68％(34/50),与肺腺癌TNM分期显著相关;与患者年龄、性别、吸烟史无相关性.与对照组相比,fMLP能显著促进癌细胞的迁移能力、促进FPR1和p-ERK1/2蛋白表达(P均＜0.01),而Boc2则抑制了该作用(P均＜0.01).与模型组相比,fMLP能促进肿瘤的生长及肿瘤中FPR1、血清中VEGF-C的水平(P均＜0.01),而Boc2则对该效果起抑制作用(P均＜0.05).结论 fMLP能通过上调FPR1表达促进人肺腺癌细胞的迁移和成瘤能力,可能与ERK信号通路的激活有关及VEGF-C的分泌调控相关;且FPR1的阳性与肺腺癌TNM分期呈显著相关性,提示FPR1表达可能与肺腺癌的发生、发展密切相关.
-
PDCD4对甲状腺癌SW579细胞在裸鼠体内成瘤能力的影响
目的:通过观察PDCD4对甲状腺癌SW579细胞凋亡与细胞特异性周期阻滞及caspase活化的影响,阐明PDCD4诱导的细胞凋亡效应及抑制成瘤能力.方法:应用AnnexinV/PI和API等标记,流式细胞仪对甲状腺癌SW579细胞凋亡及周期特异性的检测,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况,分别注射到36只裸鼠的左侧腋窝皮下,将36只裸鼠随机分成3组,1:生理盐水组(n=,12);2:空载体组(n=12);3:PDCD4组(n=12);2和3中分别瘤下注射50ul空载体和PDCD4重组表达载体,用游标卡尺测量肿瘤的大小,取出肿瘤,照相并称重.结果:3组的Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达值显著高于1、2组,相比差异均具有统计学意义(P＜0.05);3组的成瘤能力显著低于1、2组,相比差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:PDCD4可诱导的甲状腺癌细胞凋亡,且此过程中发生了caspase活化,参与细胞凋亡,抑制裸鼠体内成瘤能力.
关键词： PDCD4 甲状腺癌SW579细胞 细胞凋亡 成瘤能力 -
肺腺癌A549细胞CD133~+CD44~+表型在裸鼠体内成瘤能力的研究
目的 探讨肿瘤标志物CD133和CD44的表达与人肺腺癌A549细胞株在裸鼠体内形成肿瘤能力的关系.方法 使用单细胞克隆的方法 ,筛选出能够持续增殖分裂的肿瘤细胞,应用免疫荧光方法 和流式细胞仪检测CD133和CD44在具有增殖分裂能力的A549细胞和普通A549肿瘤细胞的表达情况;按表达结果 对A549细胞进行分组,应用单克隆方法 对各组细胞进行培养,并按不间密度注射于裸鼠皮下,观察各个组别的成瘤能力.结果 (1)在倒置显微镜下观察肿瘤细胞生长情况,发现多数细胞死亡,1周后仅有4.11%的细胞能够增殖分裂形成克隆.(2)具有增殖分裂能力肿瘤细胞的免疫荧光结果 :CD133阳性率为19.0%,CD44阳性率为57.0%;普通A549肿瘤细胞免疫荧光结果 :CD133阳性率为2.5%,CD44阳性率为34.0%;具有分裂增殖能力的肿瘤细胞CD133和CD44阳性表达率显著高于普通A549肿瘤细胞(P<0.01).(3)裸鼠体内成瘤能力实验提示:CD133~+CD44~+(A组)细胞成瘤能力显著高于CD133~-CD44~-(B组)、CD133~-CD44~+(C组)和CD133~+CD44~-(D组)细胞(P<0.05);裸鼠瘤块病理检查证实均为腺癌,各脏器检查未发现转移:在接种CD133~+CD44~+(A组)细胞的瘤块组织中发现除了有CD133~+CD44~+细胞外,还有CD133~-CD44~-细胞.结论 肺腺癌A549细胞株中CD133~+CD44~+细胞在裸鼠体内的成瘤能力显著高于其他细胞.
-
人胃癌细胞株增殖迁移和克隆成瘤的比较
我们选取4株常见的人胃癌细胞,通过体内外实验,比较其增殖、迁移和克隆成瘤能力.一、材料与方法1.材料和细胞培养:AGS、BGC-823、SGC-7901细胞株购自上海市细胞生物研究所,MKN-28细胞株由上海内分泌代谢病研究所赠送,Boyden迁移槽购自Costar公司,BALB/C裸小鼠购自扬州大学比较医学中心.细胞用含10%小牛血清的DMEM传代培养,取对数生长期细胞进行实验.
-
细胞周期蛋白E小干扰RNA靶向调控乳腺癌移植瘤生长的研究
细胞周期蛋白(Cyclin)E是调控细胞从G1期进入S期的一个重要蛋白,它与乳腺恶性肿瘤的生长、增殖、内分泌治疗的敏感性以及病情预后都有密切联系.已有相关文章报道在体外Cyclin E能够高效地抑制乳腺癌细胞中Cyclin E的表达,从而抑制乳腺癌细胞的生长与增殖.我们通过建立不同模式的乳腺癌移植瘤模型来观察Cyclin E在体内对于成瘤能力的不同影响,展示针对Cyclin E的RNA干扰(RNAi)技术用于基因靶向治疗的潜在价值.
-
实体肿瘤干细胞的研究进展
新研究认为肿瘤是一种干细胞疾病,是由具有成瘤能力的肿瘤细胞增殖发育而成的异常组织.肿瘤细胞中仅有极少数的细胞具有成瘤潜能.它们数量虽少,但具有干细胞特征,可无限增殖,并可以不对称分裂成具有及不具有成瘤能力的肿瘤细胞,故称之为肿瘤干细胞.它们在肿瘤的形成和生长过程中起到了决定性作用.而其他肿瘤细胞没有或仅有有限的增殖能力,经短暂的分化即死亡[1].这个研究结果对肿瘤形成的生物学研究及肿瘤的诊断治疗产生了深远的影响.
-
人原代胶质瘤起始细胞的生物学行为初步研究
目的 研究人原代胶质瘤起始细胞(GICs)的表型、自我更新能力、成瘤能力和耐药性等生物行为学特性.方法 运用常规培养法和条件培养法对来自手术切除的同一胶质母细胞瘤组织分别进行培养,同时获得贴壁生长的人原代胶质瘤细胞(AGCs)和GICs;通过免疫荧光染色法测定其神经胶质酸性蛋白(GFAP)、CD133和巢蛋白的表达,通过单克隆形成实验和梯度密度成瘤实验检测其成球和成瘤能力,利用细胞计数药盒-8检测两种细胞在嘧啶亚硝脲(ACNU)和长春新碱(VCR)作用下的增殖曲线.结果 GICs呈神经球样生长且表达CD133和巢蛋白;47.8%±5.6%的GICs 能够自我更新,而可表达GFAP的AGCs中仅有4.3%±1.6%能形成单克隆;ACNU对GICs的IC50=1×10-3.1 mol/L,对AGCs 的IC50=1×10-3.9 mol/L,两者相比较,相差显著(P<0.05);VCR对GICs的IC50=1×10-4.3 mol/L,对AGCs的IC50=1×10-5.5 mol/L,两者相比较,亦相差显著(P<0.05).结论 利用条件培养法可以获得具有明显干性的GICs,与分化的AGCs相比具有更强的自我更新能力和成瘤能力,且GICs对ACNU和VCR较AGCs更为耐药.
-
沉默CIAPIN1基因对K562细胞增殖能力的影响
目的：探讨靶向干扰 CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（ CML）细胞系K562细胞增殖能力的影响。方法：针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞系。 Real－time PCR及Western blotting技术鉴定干扰效率；CIAP－IN1基因沉默之后，改良MTT法检测细胞活力的变化；甲基纤维素集落形成实验观察细胞集落形成大小和数量的变化；流式细胞术检测细胞周期的改变；将K562细胞接种到裸鼠体内皮下，观察细胞在裸鼠体内成瘤能力的变化。结果：CIAPIN1基因表达下调后，K562细胞的活力下降；集落形成数量减少和集落减小；G1期细胞数量增加；小鼠体内成瘤能力明显降低。结论：下调CIAPIN1基因表达能够抑制K562细胞在体外及体内的增殖能力。
-
PDCD4对甲状腺癌SW579细胞调亡及成瘤能力的影响
目的 研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制.方法 将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入tPA刺激细胞进行收集.对照组未加PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激和tPA刺激.应用AnnexinV/PI和API等标记,Cyclins/DNA双标流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞的凋亡及周期特异性,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况.结果 处于静止期的外周血对PDCD4凋亡诱导不敏感,而G1期PDCD4诱导甲状腺癌SW579细胞出现了明显的细胞凋亡.PDCD4诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生.观察组的Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达值分别为(1.12±0.56)、(1.10±0.29),显著高于对照组的(0.82±0.31)、(0.72±0.26),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PDCD4诱导的细胞凋亡与甲状腺癌SW579细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了Caspase活化,参与细胞凋亡及可能抑制细胞成瘤能力.
关键词： 程序性细胞死亡因子4 甲状腺癌SW579细胞 细胞凋亡 细胞周期 成瘤能力 -
Maspin在妇产科疾病中的研究进展
Maspin(mammary-serpin)基因是1994年Zon等使用消减杂交(sub-tractive hybridization)的方法在对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现的,并且发现用该基因转染乳腺癌细胞系MDA2MB2435后,可降低癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力,降低其穿透基底膜及转移的能力.
-
IL-8对卵巢癌细胞生长特性的影响及相关机制的研究
目的 研究内源性IL-8对卵巢癌细胞体外增殖能力、细胞周期、细胞凋亡、成瘤能力的影响及相关机制.方法 应用MTT法、流式细胞技术、体外软琼脂集落形成实验、RT-PCR及Western blot技术等对IL-8不同表达状态的卵巢癌A2780细胞和SKOV-3细胞的增殖及成瘤能力进行检测.结果 与对照组细胞相比,内源性表达IL-8的各组卵巢癌A2780/ssIL-8细胞的增殖能力及其Cyclin D1、Cyclin B1基因和蛋白的表达水平均增高(P＜0.05),体外软琼脂集落形成数增多(P＜0.05)；而在不同程度上抑制内源性IL-8表达的SKOV-3/asIL-8细胞的体外增殖能力及其Cyclin D1和Cyclin B1基因和蛋白的表达水平均降低(P＜0.05),细胞的Caspase-3活性增高,体外软琼脂集落形成数减少(P＜0.05)；进一步采用特异性信号通路阻断剂阻断内源性高表达IL-8的A2780/ssIL-8细胞,其结果显示体外增殖能力及Cyclin D1和Cyclin B1基因和蛋白的表达水平均降低(P＜0.05).结论 IL-8可增强卵巢癌细胞的增殖和成瘤能力,而抑制IL-8表达或特异性阻断IL-8的信号转导通路则可使卵巢癌细胞的增殖及成瘤能力得以抑制.
-
microRNA-100对人胰腺癌细胞增殖及皮下成瘤能力的影响
目的：研究microRNA-100（ miR-100）对人胰腺癌细胞MIA PaCa-2和CFPAC-1增殖及皮下成瘤能力的影响。方法：用miR-100慢病毒过表达载体感染MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞，构建高表达miR-100细胞株；用平板克隆、CCK-8方法检测miR-100对人胰腺癌细胞体外增殖能力，裸鼠皮下成瘤实验检测miR-100对人胰腺癌细胞成瘤能力。结果：慢病毒感染后，miR-100表达在MIA PaCa-2细胞中提高（941±171）倍，在CFPAC-1细胞中提高（154±23）倍，差异有统计学意义（ P﹤0.05）；平板克隆形成实验提示MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞实验组平板克隆数少于对照组病毒，差异有统计学意义（ P﹤0.05）；CCK-8细胞增殖实验提示MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞实验组增殖能力弱于对照组，差异有统计学意义（ P﹤0.05）；裸鼠皮下成瘤实验显示，miR-100抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论：miR-100能从体内外抑制人胰腺癌细胞增殖及皮下成瘤能力。
-
shRNA沉默Survivin基因对人骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响
目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制.方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染.细胞以1:5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,Survivin-shRNA组为Survivin-shRNA转染的细胞,GFP组和CON组为阴性对照组.每3天用卡尺测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线.颈椎脱臼法处死裸鼠,取骨肉瘤标本称重.Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达.结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质.骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长.肿瘤的重量结果显示,Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤重量的增加.Western blot结果显示,SUV、VEGF的表达在Survivin-shRNA组中明显低于对照组,而CAS-3表达相反.结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖及成瘤能力,其机制可能是通过调节SUV、VEGF、CAS-3的表达及抑制肿瘤新生血管形成等来实现的.
