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一组端粒相关蛋白分子的克隆
目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.结果: AH109、Y187酵母菌基因表型稳定,无His渗漏表达.成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用.从cDNA文库中筛选到Ade+、Leu+、Trp+和His+阳性克隆28个,β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade+、His+和LacZ+阳性克隆12个,其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用,予以弃除.7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列,cDNA序列同源性比较终获得6个已收录人cDNA序列,他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.结论:获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制,为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础.
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端粒复合体与冠心病的研究进展
端粒复合体由端粒DNA、端粒相关蛋白、端粒酶共同构成,是维持染色体DNA稳定的重要结构.多种心血管危险因素和不良生活方式均可造成端粒缩短加快,而健康的生活方式及他汀类药物则可减缓端粒缩短.在细胞、动物等研究基础上,多项端粒复合体与冠心病相关的临床研究,阐明了端粒复合体功能失调在冠心病的发生、发展、预后中起到的重要作用.冠心病患者外周血白细胞端粒长度明显缩短,端粒长度短是心血管事件再发的一个独立的危险因素,具有预测心血管事件预后的价值.目前,针对端粒长度缩短与冠心病相关的机制、端粒相关蛋白与冠心病的相关性以及白细胞亚群的研究等方面尚有研究空间.
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MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达
目的 探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用.方法 以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析.结果 MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P＜0.005).随着病情的进展,TRF1表达升高(P＜0.005);随着病情的改善,TRF1表达降低(P＜0.01).结论 TRF1 mRNA随着病情变化在MDS患者骨髓的表达改变,提示TRF1作为端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一.
关键词： TRF1 端粒相关蛋白 骨髓增生异常综合征 基因 实时定量RT-PCR -
端粒相关蛋白TIN2
TIN2(TRF1相互作用核蛋白2)是一重要的端粒相关蛋白.人TIN2蛋白包括N端,TRF1交互作用区(TRF1-Int)和C端3个结构域.它在TRF1复合物、TRF2复合物和Shelterin的功能中扮演关键角色,协同其它端粒蛋白维持端粒长度、结构和功能.TIN2与个体发育、细胞分化和肿瘤发生密切相关.
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人端粒相关蛋白
端粒是染色体末端的特殊结构,由端粒DNA与端粒蛋白构成,维持染色体的稳定.端粒相关蛋白直接影响端粒的功能,调节端粒DNA的长度,与细胞的衰老和癌变密切相关.端粒蛋白包括端粒双链DNA结合蛋白、端粒单链DNA结合蛋白、其它端粒相关蛋白.端粒结合蛋白直接保护端粒DNA,端粒相关蛋白通过与端粒结合蛋白的相互作用间接影响端粒的功能.本文对这些端粒相关蛋白的细胞生物学功能的研究进展进行概述.
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端粒结构及其相关蛋白对端粒长度调控的研究进展
哺乳类动物染色体末端由一段特殊的TTAGGG重复序列及其相关蛋白组成,并形成T环和D环结构,称作端粒.端粒3′伸出端由于富含碱基G,可形成稳定的G-四联体结构.端粒自身的这些结构及其相关蛋白TRF1、TRF2、TIN2、端锚聚合酶等对端粒长度起着重要的调控作用.
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人端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体的构建及初步鉴定
端粒是真核细胞染色体末端的一个特殊结构,由一段具有特定重复序列的DNA和端粒结合蛋白组成,是维持染色体结构稳定的重要因素.正常细胞随着细胞分裂活动的进行,端粒DNA逐渐缩短,当缩短到一定程度时,染色体结构被破坏,细胞进入衰老期并以死亡而告终.但肿瘤细胞似乎丧失了这种能力,表现出永生化而无限制增殖的特性.尽管端粒研究为肿瘤、衰老难题提供了一个重要的研究方向,但有关端粒蛋白组分的结构及其调控机制仍不十分清楚.因此,寻找新的、关键性的端粒、端粒酶调控分子是非常重要的[1].本课题拟以已发现的端粒相关蛋白中较为重要的人端粒酶催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase, hTRT)为诱饵,构建hTRT诱饵融合蛋白表达载体,为从cDNA文库中筛选与hTRT作用的端粒相
