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铁离子对二氢青蒿素神经毒性的作用
青蒿素(artemisinin)是从菊科植物艾属黄花蒿中提取的一种化合物,已被广泛用于各型疟疾的治疗[1].青蒿素类药物结构中含有内过氧桥,可与铁离子反应产生氧自由基(reactive oxygen species,ROS),进而导致疟原虫的死亡[2].二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素在体内的主要代谢物,其水溶性和抗疟疾疗效均比青蒿素要高,是一种有效的口服抗疟疾药物.近年来研究发现,青蒿素类药物具有一定的毒性,可导致大鼠胚胎发育畸形;也可通过血脑屏障进入中枢,导致大鼠发生运动障碍和脑干损伤[3-5].
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利用基因芯片分析二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制
目的:通过基因芯片对二氢青蒿素处理的K562细胞基因表达情况的检测,探讨二氢青蒿素抑制K562增殖的作用机制.方法:配制1×10-5,4×10-5,16 ×10-5,64×10-5,256×10-5 mol·L-1二氢青蒿素处理K562细胞24 h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞周期,提取总RNA,逆转录成cDNA与基因芯片杂交,扫描仪检测杂交结果.结果:倒置光显微镜下细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降.荧光显微镜下染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体.流式细胞仪G2期细胞的比例增加.扫描杂交结果显示有13条基因表达有差异,其中chk1表达上调,PCNA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE1,cdk4,cdk2,E2F1,DNA-PK,DNA-Topo Ⅰ,mcl-1,jNK,VEGF表达下调.结论:二氢青蒿素可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关.
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青蒿素和二氢青蒿素的抗炎作用及机制
目的:研究并比较青蒿素和二氢青蒿素的抗炎作用及其分子机制.方法:用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α,IL-6,NO等炎症介质,评价药物对巨噬细胞释放以上炎症介质的抑制作用.以ELISA法检测TNF-α,IL-6的含量,以Griess法检测NO的含量,同时以MTF法评价细胞毒性.Western blot法检测iNOS,COX-2及内参蛋白β-actin水平.比色法检测COX-2酶活性.结果:二氢青蒿素在12.5～100μnol·L-1可明显抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放TNF-α,IL-6及NO,并呈现良好的剂量依赖关系.青蒿素仅对IL-6具有一定程度的抑制作用.结论:二氢青蒿素通过下调iNOS蛋白表达,抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和炎症介质NO发挥抗炎活性,青蒿素可能通过代谢为二氢青蒿素发挥抗炎作用.
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多因子正交试验对中药青蒿丛生芽诱导条件的筛选
中药青蒿,即黄花蒿Artemisia annua L.又名臭蒿、臭青蒿,为菊科蒿属一年生草本植物.从青蒿中提取的青蒿素及其衍生物是继喹啉类和吖啶类之后的一类新的抗疟药物[1],如今临床上还用蒿甲醚、青蒿琥酯预防和治疗血吸虫病,据近几年报道,二氢青蒿素、蒿甲醚用于治疗与艾滋病相关的弓形虫病已取得了很好的临床效果[2].近也发现青蒿类药物具有抗肿瘤的作用,免疫调节作用,抗心律失常以及预防和治疗矽肺的作用等[3].
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青蒿琥酯的药代动力学以及相关药理作用研究进展
青蒿琥酯(artesunate,AS),是一种青蒿素的衍生物,作为全新结构抗疟药,具有高效、速效、低毒、不易产生耐受等特点,当前全球用于轻微到严重的疟疾感染的基础治疗.越来越多的研究报告显示AS与其活性代谢产物二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)除抗疟以外具有多种生物活性,吸引研究者对其新药理作用的进一步研究以期老药新用.然而对于AS的药物动力学特征的全面了解,将有利于AS的新药理作用的深度开发以及临床应用.因此,该文综述了AS的吸收、分布、代谢、排泄的体内过程,以及目前临床应用AS经静脉给药、肌肉注射、口服以及直肠给药等不同给药途径后AS和活性代谢物DHA的药代动力学特征;比较了AS在健康志愿者、疟疾患者、特殊人群(儿童、妇女)等不同人群中的AS和DHA的体内过程和药代动力学参数.同时,也综述了AS和活性代谢物DHA在抗肿瘤、抗炎、抗脓毒症、抗血管生成、抗纤维化以及免疫调节等方面的药理作用新进展,旨在为进一步合理开发利用AS及其代谢产物提供一定的理论依据.
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二氢青蒿素对胰腺癌生长的抑制作用
目的 探讨二氢青蒿素在体外、体内对胰腺癌的生长抑制作用.方法 通过MTT法检测二氢青蒿素对胰腺癌细胞株生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测BxPC-3细胞中增殖、凋亡相关蛋白的表达.监测给药后胰腺癌裸鼠移植瘤体积的变化,并通过对肿瘤组织标本Ki-67染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况.结果 MTT结果显示,二氢青蒿素可抑制体外培养的胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1的增殖,诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性.二氢青蒿素亦可通过抑制增殖和诱导凋亡而抑制胰腺癌的体内生长.Western blot检测BxPC-3细胞中蛋白的表达水平,结果显示二氢青蒿素上调增殖相关蛋白p21WAF1、下调PCNA的表达;上调凋亡相关蛋白Bax、下调Bcl-2的表达,且可增加caspase-9的活化水平.结论 二氢青蒿素在体内外对胰腺癌均有抗肿瘤作用,是胰腺癌治疗的潜在药物.
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二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞放射增敏作用的研究
目的 探讨二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用.方法 用MTT法检测其对HeLa细胞生长的抑制效应;克隆形成法检测放射敏感性;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 二氢青蒿素对HeLa细胞有明显的抑制作用,其效应呈时间和剂量依赖性.20 μmol/L二氢青蒿素对HeLa细胞的放射增敏比(SER)为1.47.二氢青蒿素能够去除x线导致的HeLa细胞G2期阻滞,与单纯6 Gy照射组相比,药物+照射组G2期阻滞由73.58%降至48.31%.二氢青蒿素能增强X线诱导的细胞凋亡,与单纯2、4、6 Gy照射组相比,药物+照射组凋亡率分别由29.46%、48.04%、70.21%升至45.79%、66.36%、79.58%.结论 二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞具有放射增敏作用,机制可能与二氢青蒿素去除照射引起的G2期阻滞有关.
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二氢青蒿素抑制K562细胞血管内皮生长因子的表达
目的通过观察二氢青蒿素抑制K562细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨青蒿素类药物在抑制血液肿瘤血管新生方面的作用.方法运用MTT法、免疫组化分析和Western blotting分析等探讨了二氢青蒿素对K562细胞增殖以及VEGF表达方面的影响,并进一步对药物预处理后肿瘤细胞的条件培养基在促内皮细胞增殖以及促鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的作用进行评定.结果二氢青蒿素能有效抑制K562细胞的增殖,并显著下调K562细胞VEGF蛋白和mRNA的表达.同时,药物预处理细胞的条件培养基,其促内皮细胞增殖和促CAM血管新生的能力都有所下降,并呈药物浓度依赖性.结论二氢青蒿素能显著下调K562细胞VEGF的表达,并能抑制由其诱导的血管新生作用.
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二氢青蒿素下调粒系白血病细胞转铁蛋白受体表达
通过建立常铁HL60和K562细胞以及富铁K562细胞体外模型,研究二氢青蒿素对粒系白血病细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)的调控作用.采用流式细胞术检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR密度的调控作用,Western blotting和RT-PCR法检测二氢青蒿素对粒系白血病细胞TfR表达的调控作用,原子吸收分光光度法检测二氢青蒿素对常铁和富铁K562细胞铁含量的影响,以及MTT法和台盼蓝拒染法分析二氢青蒿素对粒系白血病细胞增殖的作用.结果显示,二氢青蒿素能显著降低常铁HL60和K562细胞TfR的密度和下调TfR蛋白的表达,且呈浓度和时间依赖性,并能有效地抑制细胞增殖,IC50值分别为1.74和11.33 μmol*L-1.二氢青蒿素对富铁K562细胞的TfR蛋白和mRNA表达能进一步增强下调作用,与常铁培养组比较,10 μmol*L-1二氢青蒿素对富铁K562细胞TfR蛋白和TfR mRNA表达量分别下调了28.1%(P<0.01)和26.2%(P<0.05),并能显著下降富铁K562细胞铁的含量(P<0.05),更有效地抑制富铁K562细胞增殖.由此可见,二氢青蒿素能下调粒系白血病细胞TfR密度以及TfR蛋白和mRNA的表达,有效抑制常铁HL60和K562细胞的增殖,对富铁K562细胞增殖的抑制作用能进一步增强.
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二氢青蒿素对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用
目的:研究二氢青蒿素(青蒿素生物合成中的可能前体)对肿瘤细胞增殖的影响和机制.方法:采用体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株,利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF-7细胞增殖的影响,用流式细胞检定法(FCM)测定细胞周期的变化,用亚G1期含量测定法和DAPI荧光染色法观察细胞凋亡.结果:二氢青蒿素能显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为0.26μmol*L-1;二氢青蒿素作用后细胞周期发生明显变化,细胞被阻滞在G0+G1期,S期细胞显著减少.二氢青蒿素作用细胞24h后可轻微诱导MCF-7细胞凋亡.结论:二氢青蒿素能强烈抑制MCF-7细胞增殖,将细胞阻滞于G0+G1期.
关键词： 二氢青蒿素 人乳腺癌细胞MCF-7 细胞周期 -
二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡
目的 探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用.方法 采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western 印迹分析凋亡相关蛋白的表达.结果 二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性.结论 二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用.
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二氢青蒿素抗肿瘤作用及其机制研究进展
二氢青篙素是青蒿素的重要衍生物,具有显著的抗疟作用.对多种肿瘤动物模型具有一定的肿瘤抑制作用,提示其具有抗肿瘤作用.二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖包括诱导肿瘤细胞周期阻滞和促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成以及抗肿瘤细胞侵袭和转移等有关.细胞内亚铁或亚铁血红素可能是二氢青蒿素抗肿瘤作用的直接靶点.由于二氢青蒿素具有广谱抗肿瘤作用、对正常细胞毒性小及对多药耐药细胞有效等优点,因此有可能被开发为新的抗肿瘤药物.
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青蒿素类药物在肺部疾病的研究现状及展望
青蒿素类衍生物包括二氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚和青蒿琥酯等,它们具有诸多治疗呼吸系统疾病的药理活性,包括治疗卡氏肺孢子虫肺炎、支气管哮喘、对肺组织损伤的保护作用.青蒿素类药物在治疗肺动脉高压以及肺纤维化方面具有潜在的药用价值.本文就近年来对青蒿素类药物治疗肺部疾病的研究现状及展望予以综述.
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二氢青蒿素对膀胱癌T24细胞株的抑制作用及其机制研究
目的 探讨二氢青蒿素体外抗膀胱癌T24细胞株活性及相关机制.方法 采用体外培养的T24细胞株为研究对象,流式细胞仪检测二氢青蒿素作用后T24细胞凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达变化.结果 二氢青蒿素能够诱导T24肿瘤细胞凋亡(P < 0.01),且呈剂量-效应关系;二氢青蒿素还可引发T24肿瘤细胞Caspase-3活性水平升高(P < 0.05或P < 0.01),促凋亡蛋白Caspase-3、Bax高表达(P < 0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P < 0.01),且均呈现时间-效应关系.p53表达水平无显著改变(P ＞ 0.05).结论 二氢青蒿素具有明确的抑制膀胱癌T24细胞株的效应,其机制可能是激活非依赖于p53的Bcl-2家族介导的细胞色素C途径,进而引发T24细胞凋亡.
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青蒿琥酯对体外人癌细胞HeLa、SACC-83细胞增殖的影响
青蒿琥酯是青蒿素的衍生物，为二氢青蒿素的12-α-琥珀酸酯钠。青蒿琥及其衍生物具有抗疟疾、抗焦虫、抗血吸虫及抗肿瘤等药理活性以及临床的疗效。其抗疟机制被认为是该药化学结构含有过氧桥，在代谢过程中产生自由基的构效特点，使红细胞O2和H2O2活性氧浓度升高［1］。鉴于该化学结构中含有过氧桥，在组织有可能释放氧的机制。我们研究了青蒿琥酯对体外培养的人癌细胞系HeLa、SACC-83细胞增殖的影响。1 材料1.1 药物及试剂：青蒿琥酯，广西桂林制药二厂提供，白色粉剂，用前溶于2 mL 5%NaHCO3溶液中，经过滤除菌，用RPMI-1640培养液稀释。MISO，放射增敏剂，中科院生物物理研究所沈洵教授惠赠，用前溶于RPMI-1640，过滤除菌后，终浓度为1×10-3 mol/L。MTT, Gibco 公司产品，临用前现配制。DMSO(二甲基亚砜)，Gibco公司产品。1.2 仪器：德国贺利氏CO2培养箱，日本Olympus倒置显微镜，芬兰Labsystem MS MK3 ELISA检测仪。1.3 细胞系及培养条件：人肝癌细胞系BEL-7402，北京市肿瘤医院研究所提供。人乳癌细胞系BCH，人胃癌细胞系MGC-803，北京市肿瘤医院研究所提供。人涎腺样囊性癌细胞系SACC-83，北京医科大学口腔医学院提供。人舌鳞癌细胞系TC-83，天津医科大学肿瘤医院提供。人宫颈癌细胞系HeLa，本生物技术室提供。2 实验方法2.1 细胞敏感筛选实验：各细胞系传代至指数增殖期，经扩增培养，胰酶-EDTA消化后，计数后配成5×104 cfu/mL。接种于96孔板，培养液为15% FCS RPMI-1640， 5% CO2，37 ℃下培养，试验组分别加入青蒿琥酯(终浓度为6.25，12.5，25，50，100 μg/mL)，对照组细胞加入RPMI-1640，继续培养48 h，在终止前4 h，换成无血清PRIM-1640液，加入MTT 2 mg/mL，培养4 h，移液，加入DMSO，振荡，Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测各细胞系的吸光度(A)。2.2 细胞增殖MTT分析实验：指数增殖期细胞接种，细胞数2×105 cfu/mL，5% CO2，37 ℃，孵育4 h，待贴壁，HeLa细胞系青蒿琥酯12.5～100 μg/mL浓度范围，SACC-83细胞系青蒿琥酯25～100 μg/mL浓度范围，不同浓度药物分别与培养20，44，68 h的细胞接触，于不同时期(20，44，68 h)按Mosman法［2］，采用Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测两种细胞系的A值。2.3 统计学处理：按t检测比较实验和对照各组的A值(细胞生存)，采用线性回归计算IC50。
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基因芯片技术分析二氢青蒿素抑制K562细胞增殖的作用机制
[目的]利用基因芯片检测二氢青蒿素作用于K562细胞后的基因表达情况,从基因水平探讨二氢青蒿素抑制K562细胞增殖的作用机制.[方法]K562细胞经不同浓度二氢青蒿素处理24 h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化.提取总RNA,逆转录生成cDNA,同时Cy3标记.标记好的cDNA与基因芯片杂交,用扫描仪检测杂交结果.[结果]倒置光显微镜可见细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多.荧光显微镜下可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体,同时有死亡细胞.流式细胞仪检测显示G2期细胞的比例明显增加.扫描杂交结果数据显示其中13条基因表达有差异.表达上调的基因有chk1,表达下调的基因有:PCNA、cyelinB1、cyclinD1、cyelinE1、cdk4、cdk2、E2F1、DNA-PK、DNA-TopoI、mcl-1、jnk、VEGF.[结论]二氢青蒿素可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关.
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青蒿琥酯和二氢青蒿素抑癌作用机理研究
[目的]基因芯片检测青蒿琥酯和二氢青蒿素作用于K562细胞后的基因表达情况,从基因水平上探讨青蒿琥酯和二氢青蒿素抑制K562增殖的作用机制.[方法]K562细胞经不同浓度青蒿琥酯和二氢青蒿素处理,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞生长抑制率.提取总RNA,逆转录成cDNA与基因芯片杂交,检测杂交结果.[结果]倒置光显微镜:细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多.荧光显微镜:染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块.流式细胞仪:G2期细胞的比例增加.MTT检测两种药物对K562细胞生长有抑制作用.扫描杂交信号,分析数据,青蒿琥酯组10条基因表达有差异,表达上调的基因有:p21、chk1,表达下调的基因有:cyclinB1、cyclinE1、E2F1、DNA-PK、hTERT、bcl-2、jnk、VEGF;二氢青蒿素组13条基因表达有差异,表达上调的基因有chk1,表达下调的基因有:PCNA、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE1、cdk4、cdk2,、E2F1、DNA-PK、DNA-Topo I、Mcl-1、jnk、VEGF.[结论]青蒿琥酯和二氢青蒿素抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关.
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转移抑制基因RKIP在二氢青蒿素逆转人宫颈癌细胞恶性表型作用中的变化
目的 研究二氢青蒿素(DHA)逆转人宫颈癌Hela细胞恶性表型的机制.方法 于2010年3月至2011年 3月在哈尔滨医科大学附属第二医院中心实验室采用MTT法观察不同浓度的二氢青蒿素对宫颈癌细胞的抑制作用,应用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,扫描电镜观察药物作用后细胞超微结构变化,WestemBlot 法观察不同浓度药物作用后转移抑制基因RKIP表达的变化.结果 二氢青蒿素对宫颈癌Hela细胞生长呈抑制作用,药物作用后Hela细胞出现G0/G1期阻滞,且呈剂量依赖性;透射电镜显示Hela细胞微绒毛减少、变短、消失.转移抑制基因RKIP随药物作用浓度的增加而表达含量增高.结论 二氢青蒿素可成功逆转人宫颈癌Hela细胞的恶性表型,转移抑制基因RKIP在宫颈癌Hela细胞的恶性表型逆转过程中起着重要作用.
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二氢青蒿素-查尔酮杂合物的设计、合成及其抗肿瘤活性研究
目的 设计合成二氢青蒿素·查尔酮杂合物,提高二氢青蒿素类化合物对白血病细胞的生长抑制活性.方法 将取代查尔酮以醚键拼合到二氢青蒿素的C-10位,设计并合成了29个二氢青蒿素-查尔酮杂合物.采用细胞计数法测定目标化合物对人白血病HL-60细胞的生长抑制作用.结果 得到了29个含有查尔酮侧链的二氢青蒿素衍生物,均为未见文献报道的新化合物,其结构经1 H-NMR、MS和IR谱确证.所有目标化合物对人白血病HL-60细胞都有不同程度的生长抑制作用.结论 所有目标化合物对HL-60细胞株的生长抑制活性均强于二氢青蒿素,GI50值均小于0.10μmol·L-1.连接链的改变、查尔酮A环和B环的调换以及取代基的改变对化合物活性的影响没有显著差异.
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二氢青蒿素对结肠癌细胞HCT116凋亡基因表达图谱的影响
目的 探讨二氢青蒿素(DHA)诱导结肠癌细胞HCT116凋亡基因差异表达.方法 利用RT Profiler<'TM> PCR ArrayHuman Apoptosis和实时定量PCR方法 对DHA组和对照组HCT116细胞的84种凋亡基因表达进行mRNA水平的检测.结果 与时照组比较,DHA组细胞中,35种凋亡基因表达水平显著改变,TNFα、TRAILR、CASP、GADD45等促凋亡基因的表达显著上调(Fold Up-regulation>2);BCL2、AKT、BAG1等抗凋亡基因表达显著下调(Fold Down.regulation<-2).结论 DHA通过涉及内质网应激、死亡受体介导和线粒体途径等复杂的分子机制诱导HCTll6细胞凋亡.
