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多因子正交试验对中药青蒿丛生芽诱导条件的筛选
中药青蒿,即黄花蒿Artemisia annua L.又名臭蒿、臭青蒿,为菊科蒿属一年生草本植物.从青蒿中提取的青蒿素及其衍生物是继喹啉类和吖啶类之后的一类新的抗疟药物[1],如今临床上还用蒿甲醚、青蒿琥酯预防和治疗血吸虫病,据近几年报道,二氢青蒿素、蒿甲醚用于治疗与艾滋病相关的弓形虫病已取得了很好的临床效果[2].近也发现青蒿类药物具有抗肿瘤的作用,免疫调节作用,抗心律失常以及预防和治疗矽肺的作用等[3].
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低氧对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
近年来,大量研究表明骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是一群具有多向分化潜能、低免疫原性的多能干细胞,在一定的诱导条件下能终分化成心肌、骨、软骨、神经等多种组织,易于在体外分离培养,并易于为外源基因转染和表达。这些特性使 BMMSCs成为在细胞治疗、基因治疗中有效发挥疗效的理想工程细胞,展示了其作为一种新的理想干细胞来源在治疗多种缺血缺氧性疾病中的良好应用前景[1-3]。但骨髓中 BMMSCs含量极其稀少,研究显示,BMMSCs在新生儿骨髓单个核细胞中占0.01%,随着年龄增大,数量逐渐降低,到80岁仅占0.00005%[4]。而应用于临床治疗的干细胞每次需要5千万~2亿个,这不可能从一个捐献者体内分离获得[5-7],而是需要进行体外扩增。但是,BMMSCs 体外增殖亦较慢,因此,如何实现少量取样,批量获取是 BMMSCs满足临床试验研究的当务之急。BMMSCs 的自我更新受多种复杂微环境的调控,如细胞间的接触、各种蛋白及生长因子等,而微环境中的氧张力是调控 BMMSCs功能的重要因素[8]。早在1958年,Cooper等[9]发现在低氧条件下培养细胞时,细胞的增殖能力增强。骨髓中氧张力仅为1%~6%[10-13],因此,推测低氧可能更适合骨髓间充质干细胞的培养。另外,当缺血性心脏病、缺血性脑病等发生时,局部损伤器官多处于低氧微环境中,局部氧浓度可低于0.2%[14-15],BMMSCs移植后疗效的发挥与损伤部位的低氧环境密切相关。因此,开展低氧条件对间充质干细胞生物学特性的研究对于 BMMSCs的应用具有非常重要的意义。
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骨髓间质干细胞的研究现状及其在肝衰竭治疗中的应用
骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchy stem cell,BMSC)是存在于骨髓中的二种多能干细胞之一,本身没有造血功能,是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞,在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞、神经细胞等多种细胞.
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人胎儿骨髓间充质干细胞来源的类肝细胞的分子生物学鉴定
目的:对MMSCs来源类肝细胞进行分子生物学鉴定.方法:从人胎儿骨髓中分离MMSCs,在10 g/L Matrigel作基质,2.5 mmoL/L AZA预处理10-12 h,HGF 10 μg/L+FGF4 10μg/L+HGM培养基中培养和诱导.收集诱导培养4,7,14,21,28 d时的细胞爬片,SABC免疫组化法DAB显色检测肝细胞早期标志AFP,CK19及早期转录因子GATA4,成熟肝细胞标志ALB,CK18,GST-π,肝细胞转录因子HNF1α;提取诱导分化10 d和第28 d细胞RNA及蛋白质,设计AFP,CK19,ALB,CK18,CYP1B1,CYP2B6引物,进行RT-PCR,观察在mRNA水平肝细胞标志的表达,采用Western blot检测CK18,AFP,ALB的表达量.结果:未诱导培养的MMSCs中,有较少的细胞表达AFP,未见其他肝脏特有的转录因子或者胞质蛋白标志.免疫组化显示在诱导早期可见较多细胞呈GATA4,AFP和CK19阳性表达,至诱导后期表达下降,而ALB,CK18,GST-π和肝细胞转录因子HNF1α阳性细胞比例逐渐上升.RT-PCR显示,未诱导的MMSCs仅可表达微弱的AFP mRNA,诱导早期可见AFPmRNA和CK19mRNA表达,诱导后期未见扩增,而ALB,CK18,CYP1B1 mRNA早期和后期均可见表达,在诱导后期可见CYP2B6 mRNA表达,但很弱.Western blot检测显示诱导细胞中AFP,ALB和CK18蛋白的表达趋势同基因表达类似.在65 ku和68ku处诱导细胞组可见AFP和ALB目的条带,在45 ku处诱导细胞组可见CK18目的条带.未诱导的细胞和诱导早期细胞中AFP有表达,后期未见.诱导早期和后期CK18和ALB均有表达,且后期增强.结论:MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞,再分化为成熟肝细胞,在本实验诱导条件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞.
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骨髓间充质干细胞在心血管疾病治疗中的应用
间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞,主要存在于全身结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量为丰富,在一定的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及心肌细胞[1-8].由于不同的文献对其有不同的命名,即集落形成单位成纤维细胞(CFU-F)、骨髓基质成纤维细胞(MSF)、骨髓基质细胞(MSC)、间充质干细胞(MSC)或间充质祖细胞(MPC).由于骨髓是其主要来源,因此统称为骨髓MSCs,并仅就其生物学特征、多向分化潜能及在心血管疾病治疗中的研究进展作一综述.
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间充质干细胞分化机制及诱导方法的研究进展
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)为来源于中胚层间充质、具有多向分化潜能的成体干细胞,广泛存在于骨髓、脐带组织、脐血、外周血、脂肪等组织中,在体内或体外特定的诱导条件下,MSCs不仅可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等中胚层间质组织细胞,还可跨越胚层界限,分化为外胚层的神经元、神经胶质细胞及内胚层的肝细胞等.所以近年来MSCs成为基础医学和临床医学组织器官损伤修复以及再生领域研究的热点.对MSCs分化机制以及策略的研究和认识有助于对MSCs分化的精细调控和充分利用.
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骨髓间充质干细胞及其在心血管疾病中的应用
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs)是一群存在于骨髓中的非造血细胞,在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞、神经细胞等多种细胞[1],具有广泛的临床应用前景,故引起了人们对MSCs广泛而深入的研究.本文就MSCs的生物学特性及其在心血管疾病中的应用作一简要综述.
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脐带血间充质干细胞的研究进展
近年研究结果表明,除了造血干细胞外,脐带血中还存在与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)相似的细胞群,这类细胞在特定诱导条件下可向多种组织细胞分化.由于脐带血具有资源丰富、采集简单且无损伤等优势,如果对脐带血MSC进行开发和应用,将能为组织工程提供新的种子细胞,对干细胞组织工程及其应用具有深远意义.现就目前相关研究做一综述.
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口腔患者全麻慢诱导下插管反应的防治
目前临床上多数全麻患者是在快速麻醉诱导下进行气管内插管,但有些口腔外科患者由于张口受限和手术需经鼻插管,我们采用慢诱导条件下进行气管内插管.其插管难度和插管反应的强度明显增加.本文结合我院对17例患者慢诱导条件下插管反应症状及防治,总结如下.
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骨髓间充质干细胞的研究及进展
间充质干细胞(MSCs)是中胚层来源具有多向分化能力的干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量为丰富,在一定的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及心肌细胞.因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆,也称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、骨髓基质细胞(MSC)或间充质干细胞或间充质祖细胞(MPC).由于骨髓是其主要来源,因此统称为骨髓MSCs.
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脂肪来源间充质干细胞的生物学特性及临床应用前景
组织工程技术发展的关键是获得具有来源方便、广泛、具有分化能力的种子细胞.脂肪来源间充质干细胞的发现及研究,证明了它可以充当这一角色.它具有多项分化潜能,在合适的诱导条件下可以分化为骨细胞、软骨细胞、神经前体细胞,心肌细胞等.它的这些分化能力,给临床上一些疾病如组织缺损性疾病,心肌梗死,基因疾病的治疗带来了曙光.脂肪来源的干细胞,因其取材方便、安全和扩增速率高等特点必将在细胞治疗和组织工程方面有更广阔的应用前景.
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自体骨髓干细胞移植治疗脊髓损伤的护理40例
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后由于神经元再生能力有限,临床治疗常难以取得满意效果.自20世纪70年代以来,移植治疗SCI的研究进入了一个全新阶段.由于骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可在体内、外定向诱导分化为神经干细胞,填充SCI缺损[1],所以,采集自体MSCs植入损伤部位,在特定的诱导条件下分化成神经干细胞,即可达到使患者完全或部分恢复运动和感觉功能,提高生存质量的目的.2003年3月-2004年3月,我科共实施自体MSCs定向分化诱导脊髓内移植手术40例,取得了较好的效果,现报道如下.
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间充质干细胞免疫调节作用的研究进展
间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSCs)是一类具有多向分化潜能及免疫调节作用的细胞.其来源丰富,几乎存在于所有的组织,如骨髓、脂肪、羊水、脐带、胎盘等.在合适的诱导条件下,能分化为中胚层及其它胚层的细胞.目前大量的研究证据表明MSC具有免疫调节,抗炎及营养的作用.MSC逃避免疫识别,在体外发挥免疫抑制的特性使其成为细胞治疗与组织工程再造的侯选者.临床上已将其用于治疗移植排斥反应、自身免疫性疾病等,本文将近年来有关间充质干细胞的免疫调节作用在此做一综述.
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人脐带间充质干细胞的特征及其临床应用前景
1966年间充质干细胞首先由Friedenstein[1]从骨髓中发现,传统理论认为这群细胞在特定诱导条件下可向中胚层细胞即骨、软骨和脂肪细胞分化.
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重组人白细胞介素-4融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达的影响因素
目的提高人重组白细胞介素-4(rhIL-4)在大肠杆菌中的表达量.方法研究rhIL-4的体外诱导条件,包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度、菌体密度对表达量的影响.结果佳表达条件是诱导时间为4 h,诱导温度为42℃,A600为0.7~1.0,而IPTG的浓度对表达量无显著影响.结论诱导时间、诱导温度和菌体密度的优化能提高外源基因在大肠杆菌中的表达产量.
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高效表达幽门螺杆菌cag A蛋白工程菌的构建
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是引起人类慢性活动性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,并与胃癌的发生密切相关.对Hp毒力因子进行的研究表明:尿素酶、空泡毒素(VacA)及细胞毒素相关蛋白A(CagA),是引起人类严重胃部疾患的主要致病因素[1].其中cagA基因已被克隆并进行了序列分析[2].研究还证实cagA基因的存在是产生有活性的空泡毒素所必须的,并能促进细胞因子IL-8的释放及激活转录因子NF-k B,加重胃黏膜的组织损伤,故而目前认为含cagA基因的Hp菌株是高毒株[3].我国人群中,Hp的携带率高达80%左右,胃癌的发病人数每年约20万,约占全世界胃癌发病人数的35%,在Hp分离株中约有97%~98%存在cagA基因,表明我国是Hp高毒株的高感染国[4].为了获得高效表达的幽门螺杆菌CagA蛋白,从而为高毒力Hp的人群普查提供一种具有良好前景的基因工程诊断抗原,我们克隆了该基因的保守区域,对不同诱导条件下CagA蛋白的表达量进行了优化研究,并对CagA蛋白的可溶性表达进行了探索.
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骨髓间质干细胞移植治疗缺血性脑损伤的研究进展
脑血管疾病是目前世界三大主要致死疾病之一.而且由于成年哺乳动物的神经元缺乏再生能力,使其在损伤后很难恢复,这是临床上缺血性脑损伤难以取得满意疗效的主要原因.骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是多能细胞,在一定诱导条件下可分化为多种造血外组织,特别是中胚层和神经外胚层发育来源的组织细胞,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、以及神经细胞、神经胶质细胞等.另外它还具有易于获得,可从患者本人取材;体外培养可快速增殖;免疫原性阴性;移植后能与受体脑细胞结合并长期存活;以及能稳定转染并表达外源性基因产物等特点,所以是治疗缺血性脑损伤理想的移植细胞.
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表皮生长因子对骨髓单个核细胞治疗肝损伤的动物实验研究
干细胞是机体组织器官的起源细胞,具有自我复制、高度增生和多向分化的功能,在适当的诱导条件下,可分化为不同的功能细胞。有研究表明细胞因子可大量扩增骨髓干细胞,并促使其向肝细胞转化[1]。表皮生长因子(EGF)是一种小肽,由53个氨基酸残基组成,是类 EGF 大家族的一个成员,是一种多功能的生长因子,可以促进骨髓干细胞向神经和皮肤等组织器官迁移[2],但在肝脏方面鲜有报道。本实验初步探讨 EGF 动员骨髓单个核细胞向肝脏迁移情况及对肝损伤的修复作用。
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决定神经干细胞分化的内外因素
神经干细胞(NSC)的发现和培养成功是近十年来神经科学领域的重大突破,也是近年来研究的一大热点.神经干细胞是一类存在于中枢神经系统内的具有自我更新、持续分裂增殖、多向分化能力的细胞.在体外诱导条件下,它分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞,移植入动物体内它能分化成神经元和胶质细胞并能迁移、增殖,与宿主细胞形成突触联系.基于这些特点,神经干细胞成为移植入脑内进行细胞替代治疗和转基因治疗,从而达到神经修复的有前景的细胞来源之一[1~3].本文对近年来决定神经干细胞分化的外部条件及内在机制研究进展做一综述.
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大规模培养雨生红球藻生产天然虾青素的研究进展和产业化现状
本文综述了近10年来国际上在雨生红球藻的生物学特性、细胞内积累天然虾青素的诱导条件方面的研究进展,以及应用光生物反应器大规模培养雨生红球藻工业化生产天然虾青素的现状,并对国内虾青素的产业化前景进行了展望.