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RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调
目的 检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系.方法 RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达.结果 成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显.结论 获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测.RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点.
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电磁辐射致海马损伤的比较蛋白质组学研究
目的 研究三种不同频率电磁波辐照后海马组织蛋白质表达谱的差异.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)-质谱鉴定-生物信息学分析的比较蛋白质组学方法研究辐照后6 h海马组织总蛋白的差异,通过Western blot和RT-PCR技术分别在蛋白和基因水平对差异蛋白质进一步检测验证.结果 三种电磁辐射致海马蛋白质表达谱的变化基本相似.经图像分析共筛选到45个差异蛋白点,其中26个差异蛋白点得到了初步鉴定.对于信号转导相关差异蛋白raf激酶抑制蛋白(RKIP),Western blot和RT-PCR进一步验证了2-DE结果.辐照后6 h RKIP蛋白及其mRNA表达均明显下调,各照射组未见明显差异.结论 三种电磁辐射对海马的致伤机制具有相似性,其损伤程度呈频率依赖性.RKIP可能在辐射致海马损伤中发挥重要作用.
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Raf激酶抑制蛋白在鼻咽癌中的研究进展
鼻咽癌是我国南方较为常见的一种恶性肿瘤.近年来,其5年生存率有明显提高.然而,远处转移仍然是其常见的治疗失败的原因之一,寻找可靠、有效的分子标记来筛选具有鼻咽癌高转移风险的患者,并为这些患者提供更合适的治疗策略显得格外重要.
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RKIP和E-cadherin在胃腺癌组织中表达及意义
目的 检测RKIP、E-cadherin在人胃腺癌组织中的表达及两者之间相关性.方法 应用免疫组织化学染色方法检测60例胃腺癌组织、30例癌旁组织中RKIP、E-cadherin的表达,分析其表达与临床病理学指标的关系以及两者表达的相关性.结果 RKIP和E-cadherin在胃腺癌组织中表达明显低于癌旁组织(P＜0.05),在有淋巴结转移的胃腺癌组织中表达明显低于无淋巴结转移的组织(P＜0.05),RKIP和E-cadherin在胃腺癌组织中的表达具有正相关性(P＜0.05).结论 RKIP、E-cadherin 表达的降低能促进胃腺癌的淋巴结转移.
关键词： 胃腺癌 RKIP E-cadherin -
食管鳞状细胞癌RKIP基因甲基化状态的检测及临床意义
目的 研究食管鳞状细胞癌(ESCC)中RKIP基因启动子甲基化及其蛋白表达情况.方法 采用改进的甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组织化学SP法检测ESCC组织及相应癌旁正常组织中RKIP基因的DNA甲基化和蛋白表达情况.结果 77例ESCC组织中RKIP基因启动子的甲基化发生率(75%)显著高于癌旁正常组织(27%)(χ2=35.582,P<0.01) ; 有淋巴结转移的ESCC组织中甲基化率(87%)高于无淋巴结转移的ESCC组织(59%)(χ2=7.494,P＜0.01);低分化ESCC组织中甲基化发生率(94%)高于高、中分化ESCC组织(50%,25%)(P均＜0.01).77例ESCC组织中RKIP蛋白的表达率(36%)与相应癌旁正常组织的RKIP蛋白表达率(77%)比较有显著性差异(χ2=25.39,P<0.001) ;有淋巴结转移的ESCC组织中蛋白表达率(24%)低于无淋巴结转移的ESCC组织(53%)(χ2=6.648,P=0.01).结论 RKIP基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能是ESCC的发生机制之一,可作为反映ESCC生物学行为的检测指标.
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NF-κBp65及RKIP在口腔鳞癌组织中的表达及相关性研究
目的:观察口腔鳞癌组织中核转录因子-κBp65(NF-κBp65)和Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的表达及与疾病发生、发展的相关性.方法:收集经外科手术治疗的口腔鳞状细胞癌80例组织标本(20例口腔转移癌组织及20转移淋巴组织,20例未转移癌组织及20例未转移淋巴组织),应用免疫组化法检测NF-κBp65及RKIP蛋白表达,并进行相关性分析.结果:与口腔鳞癌未转移癌组织比较,口腔鳞癌转移癌组织中NF-κBp65的表达阳性率显著升高(P<0.01);与口腔鳞癌未转移淋巴组织比较,口腔鳞癌转移淋巴组织中NF-κBp65的表达阳性率显著升高(P<0.01).与口腔鳞癌未转移癌组织比较,口腔鳞癌转移癌组织中RKIP的表达阳性率显著降低(P<0.01);与口腔鳞癌未转移淋巴组织比较,口腔鳞癌转移淋巴组织中RKIP的表达阳性率也显著降低(P<0.01).而口腔鳞癌转移癌组织及转移癌淋巴组织中NF-κBp65及RKIP的表达均呈负相关(r=-0.529、-0.557,P<0.05).结论:NF-κBp65表达的增加与PKIP表达的减少与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,并通过上调NF-κBp65表达,下调RKIP表达进而促进口腔鳞癌的侵袭和转移.
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转移抑制基因RKIP在二氢青蒿素逆转人宫颈癌细胞恶性表型作用中的变化
目的 研究二氢青蒿素(DHA)逆转人宫颈癌Hela细胞恶性表型的机制.方法 于2010年3月至2011年 3月在哈尔滨医科大学附属第二医院中心实验室采用MTT法观察不同浓度的二氢青蒿素对宫颈癌细胞的抑制作用,应用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,扫描电镜观察药物作用后细胞超微结构变化,WestemBlot 法观察不同浓度药物作用后转移抑制基因RKIP表达的变化.结果 二氢青蒿素对宫颈癌Hela细胞生长呈抑制作用,药物作用后Hela细胞出现G0/G1期阻滞,且呈剂量依赖性;透射电镜显示Hela细胞微绒毛减少、变短、消失.转移抑制基因RKIP随药物作用浓度的增加而表达含量增高.结论 二氢青蒿素可成功逆转人宫颈癌Hela细胞的恶性表型,转移抑制基因RKIP在宫颈癌Hela细胞的恶性表型逆转过程中起着重要作用.
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上调Raf激酶抑制蛋白的表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨上调Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein,RKIP)表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 脂质体介导将pcDNA3.1(+)-RKIP转染SiHa细胞,转染后将细胞分为空白对照组、空载体转染组及转染组.分别采用MTT方法、体外黏附及侵袭实验以及流式细胞仪检测细胞生物学行为变化.结果 RT-PCR发现空白对照组与空载体转染组的RKIP mRNA表达无差异,转染组RKIP mRNA高表达.MTT显示转染组的增殖能力明显减弱,体外黏附能力及体外侵袭能力亦明显减弱,差异有统计学意义(P值分别为0.010、0.040、0.002).流式细胞仪检测提示转染组细胞呈现G1期阻滞,G2 +S期比例下降,而空白对照组及空载体转染组G1期比例减少,G2 +S期比例增加.结论 RKIP可降低宫颈癌细胞的增殖及侵袭能力,作用机制可能与改变细胞周期分布相关.
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RKIP影响人宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭及其机制的研究
目的 观察上调Raf激酶抑制蛋白(RKIP)表达后人宫颈癌Hela细胞增殖侵袭能力及其机制探讨.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,利用脂质体介导方法,转染后将细胞分为空白对照组、转染空载体组及观察组,观察组转染pcDNA3.1(+)-RKIP,空白对照组正常培养,转染空载体组转染真核表达载体pcDNA3.1(+).采用Western blot法检测RKIP蛋白;细胞培养24、48、72、96 h,采用MTT法测量各组在570 nm波长处的OD值.Transwell实验检测宫颈癌细胞株侵袭及迁移情况;并观察裸鼠成瘤情况结果 观察组RKIP蛋白表达含量明显增加,与空白对照组及转染空载体组比较,P＜0.05.细胞培养24、48、72、96 h时,OD值观察组较空白对照组及转染空载体组低(P＜0.05);Transwell实验结果显示观察组的宫颈癌细胞株侵袭能力弱于其余两组;裸鼠成瘤实验显示与对照组相比,观察组肿瘤生长速度较慢.结论 RKIP表达的上调在肿瘤发展迁移过程中起着抑制作用,其机制可能与其抑制肿瘤细胞增殖、迁移有关.
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RKIP低表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的相关性
目的：探讨RKIP表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的关系。方法采用免疫组化法检测87例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中RKIP的表达；采用甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR, MSP)技术检测食管鳞状细胞癌及癌旁组织中RKIP的甲基化情况；采用Kaplan-Meier法评估食管鳞状细胞癌患者术后5年生存率；采用Cox比例风险模型分析RKIP对食管鳞状细胞癌患者预后的影响。结果食管鳞状细胞癌中RKIP的阳性率低于癌旁组织( P<0.05),RKIP表达与食管鳞状细胞癌的分化程度和淋巴结转移相关(P<0．05)；食管鳞状细胞癌中RKIP基因启动子甲基化阳性率高于癌旁组织( P<0．05)；RKIP低表达与RKIP基因启动子甲基化相关( P<0．05)；RKIP蛋白阳性组患者5年生存率明显高于RKIP蛋白阴性组( P<0．01)；RKIP表达是食管鳞状细胞癌的独立预后因素。结论食管鳞状细胞癌RKIP基因启动子甲基化是导致 RKIP 低表达的原因之一,RKIP低表达与食管鳞状细胞癌的浸润、转移及预后有关,有望成为食管鳞状细胞癌分子治疗的靶点。
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RKIP基因启动子甲基化与胃癌侵袭转移及预后的关系
目的 探讨胃癌组织中RKIP基因启动子甲基化情况与胃癌生物学行为及其预后的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测98例胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中RKIP基因启动子甲基化情况;Kaplan-Meier法评估胃癌患者术后5年生存率;COX比例风险模型分析RKIP基因启动子甲基化对患者预后的影响.结果 胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中RKIP基因启动子的甲基化阳性率分别为45.9％和4.1％(P＜0.05);RKIP基因启动子甲基化与胃癌分化程度、UICC分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).RKIP基因启动子甲基化阳性组患者5年生存率(20.56％)显著低于阴性组(60.38％)(P＜0.05);RKIP基因启动子甲基化是胃癌患者的独立预后因素.结论 RKIP基因启动子的异常甲基化与胃癌的发生、发展、侵袭、转移有关,其可作为预测胃癌患者预后的生物学指标.
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RKIP在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 研究乳腺癌组织中Raf激酶抑制蛋白(raf kinase inhibitor protein,RKIP)的表达,探讨其表达与乳腺癌各临床病理因素之间的关系.方法 应用免疫组织化学染色方法(S-P法)检测54例乳腺癌组织、22例癌旁乳腺组织、14例乳腺增生症组织中RKIP的表达,并对其与临床病理特征的关系进行统计学分析.结果 RKIP主要表达于乳腺癌细胞的胞浆和胞浆膜部分.乳腺癌组织与癌旁乳腺组织、乳腺增生症组织中RKIP高表达的阳性率为51.9%,81.8%,100%,乳腺癌组织与两者比较有显著性差异(P<0.05).乳腺癌RKIP的表达与腋窝淋巴结转移相关(P<0.05).结论 RKIP可能参与了乳腺癌的发生、发展过程.
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前列腺癌发病机制中信号传导通路的研究进展
目的:PI3K/PTEN/Akt/mTOR以及Raf/MEK/ERK信号传导通路途径在细胞的存活、生长、增殖以及分化方面起重要作用.特别对前列腺癌(prostatic cancer,PCa)患者,许多后转化为激素非依赖型PCa,以致失去一个有效的治疗方法.近年来主要以这两个信号传导通路为研究主线,探讨它们对PCa的影响以及相应的变化机制.因此本文旨在综述近几年在这两条信号传导通路机制的研究中,它们对PCa发生、发展所起的作用以及相关机制.
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口腔涎腺腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达及其意义
目的:探讨抑癌基因RKIP和NPRL2在口腔涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和NPRL2蛋白在52例口腔涎腺腺样囊性癌组织、26例癌旁腺样囊性癌组织及15例正常涎腺组织中的表达,并分析RKIP和NPRL2的表达与腺样囊性癌临床病理学特征的关系.结果:免疫组化结果显示腺样囊性癌组织、癌旁及正常涎腺组织中RKIP和NPRL2的阳性率分别为48.08％、76.92％、93.33％和46.15％、80.77％、93.33％；腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达显著低于癌旁及正常涎腺组织,差异有统计学意义(P＜0.05),而腺样囊性癌组织和癌旁组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关(P=0.000,P=0.005).结论:RKIP和NPRL2表达的减少或缺失与腺样囊性癌的发生发展、侵袭转移密切相关.
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RKIP及NPRL2在涎腺黏液表皮样癌中的表达及其临床意义
目的:研究口腔黏液表皮样癌组织中RKIP和抑癌基因NPRL2的表达,探讨其表达与口腔黏液表皮样癌各临床病理因素之间的关系.方法:应用免疫组织化学染色方法检测48例口腔黏液表皮样癌组织和13例正常组织中RKIP和NPRL2的表达,并对其与临床病理特征的关系进行统计学分析.结果:RKIP和NPRL2均表达于黏液表皮样癌细胞的胞浆和部分胞膜.黏液表皮样癌组织与正常组织中RKIP和NPRL2高表达的阳性率分别为52.08％,92.31％和47.92％,100.00％,黏液表皮样癌组织与两者比较有显著性差异(P＜0.05).结论:RKIP和NPRL2可能参与了黏液表皮样癌的发生、发展过程.
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RKIP在鼻咽癌侵袭转移中的作用及机制研究
目的:研究Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein,RKIP)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)侵袭转移中的作用及其机制.方法:采用免疫组织化学染色检测RKIP在转移潜能不同的NPC组织中的表达,分析其表达水平与NPC临床病理特征和患预后的关系;采用脂质体转染技术建立RKIP表达改变的稳定转染NPC细胞系,采用刮痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞的体外运动和侵袭能力,采用Western blot检测NF-κB信号分子磷酸化水平.结果:RKIP在NPC组织中的表达显著低于正常鼻咽粘膜组织,在有转移NPC组织中的表达明显低于无转移NPC组织,在颈淋巴结转移癌组织中的表达明显低于原发癌;RKIP表达水平与NPC的淋巴结转移、远处转移、临床分期以及NPC患的总生存期负相关;RKIP表达上调降低5-8F NPC细胞的体外运动和侵袭能力,而RKIP表达下调增强6-10B NPC细胞的体外运动和侵袭能力;RKIP表达水平与NPC细胞NF-κB信号通路的活性负相关,NF-κB抑制剂Bay11-7082能抑制RKIP下调的6-10B细胞的体外运动和侵袭.结论:RKIP可能是NPC的一个转移抑制蛋白,RKIP低表达的NPC患预后差,RKIP表达下调通过活化NF-κB通路促进NPC的侵袭和转移.
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RKIP在下咽癌中的表达及意义
目的 探讨Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1 kinase inhibitor protein,RKIP)在下咽癌中的表达及其临床意义,通过与癌旁组织RKIP的表达比较,分析RKIP在下咽癌的发生、发展及转移中的作用以及癌旁下咽鳞状上皮中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化方法检测46例下咽鳞癌及13例癌旁下咽鳞状上皮组织中RKIP的表达情况.对实验结果进行x2检验及Wilcoxon检验.结果 RKIP在下咽鳞癌中的表达低于癌旁下咽鳞状上皮,差异具有统计学意义(P =0.034).RKIP在有转移的下咽癌中表达低于无转移的下咽癌,差异具有统计学意义(P =0.020).RKIP在高、中、低不同分化程度的下咽癌中表达阳性率逐渐下降,差异具有统计学意义(P=0.005).结论 下咽癌的分化程度与RKIP的表达有关,下咽癌淋巴结转移的发生与RKIP低表达及缺失有关.
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喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究
目的 检测喉癌组织中Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1 kinase inhibitor protein,RKIP)基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况.结果 喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17％、3％,两者比较差异具有统计学意义(P =0.045).结论 RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关.
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RKIP基因对胃癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨RKIP基因对胃癌细胞株SGC7901恶性生物学行为的影响.方法 采用脂质体转染技术,将RKIP真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/RKIP和空载体质粒分别导入胃癌细胞系SGC7901,定量-反转录-PCR(q-RT-PCR)和Western blot分别检测RKIP mRNA及蛋白质表达,构建RKIP基因稳定表达的胃癌细胞系SGC7901.借助细胞生长曲线及集落形成实验观察胃癌细胞增殖的变化;划痕试验及Transwell实验检测胃癌细胞迁移能力和侵袭力的变化;流式细胞术检测RKIP表达对胃癌细胞的细胞周期和凋亡率的影响;并建立人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察RKIP对胃癌细胞增殖和转移能力的影响.结果转染RKIP基因的SGC7901细胞系RKIP mRNA和蛋白质表达量显著增加.转染组SGC7901细胞较对照组生长速度减慢,集落形成率显著下降,流式细胞术分析发现,RKIP延缓细胞由G0～G1期进入S期,诱导细胞凋亡,裸鼠接种实验显示,RKIP基因可使裸鼠成瘤平均时间延长,生成移植瘤体积显著减小.结论 RKIP与胃癌的增殖、凋亡和侵袭等生物学行为密切相关,RKIP基因重表达有助于SGC7901的恶性表型逆转,是肿瘤治疗的候选有效靶点.
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RKIP在肿瘤中的研究进展
RKIP(Raf kinase inhibitory protein)作为脂酰乙醇胺结合蛋白家族中的一员,初时是在牛的大脑中被发现,后来被证实能够抑制MAPK通路的激活,同时RKIP又参与了NF-κB和G蛋白偶联受体信号通路的调控.RKIP与肿瘤的转移能力和治疗敏感性密切相关,RKIP缺失会导致肿瘤转移能力与耐药性增强,但具体机制仍不清楚.通过结合临床资料,RKIP可能是一种评估肿瘤预后的新的生物学标志物.随着RKIP与肿瘤的研究不断深入,它将有可能成为肿瘤的治疗新的靶点,本文就RKIP在肿瘤中的研究状况进行简要综述.
