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miR-449b介导5-氟尿嘧啶/顺铂抑制肝癌细胞的迁移
目的研究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂对miR-449b在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞迁移能力的分子机制.方法收集肝癌患者的组织样本,提取总RNA,用real-time PCR法检测肝癌组织样本中miR-449b的表达;5-氟尿嘧啶和顺铂处理肝癌细胞,检测miR-449b的表达;在肝癌细胞中过表达miR-449b或用5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理肝癌细胞,利用细胞划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力变化;设计拯救实验,探究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b表达,参与肝癌细胞迁移能力调控;软件预测结合Western blot 实验,鉴定miR-449b的功能靶基因.结果miR-449b在肝癌患者组织中表达下调(P<0.001);5-氟尿嘧啶和顺铂诱导肝癌细胞内源性miR-449b的表达上调(P<0.001);过表达miR-449b可以抑制肝癌细胞的迁移(P<0.001);敲低miR-449b的表达可以抑制5-氟尿嘧啶和顺铂对肝癌细胞迁移能力的抑制作用(P<0.05);catenin-δ是miR-449b的直接靶基因.结论5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b的表达抑制肝癌细胞的迁移.
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microRNA-449b对高迁移率族蛋白B1介导树突状细胞功能的影响
目的:探讨miR-449b在高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)刺激树突状细胞(DC)中的变化及其对DC免疫功能的影响.方法:分别以10、100、1 000 ng/ml剂量的HMGB1刺激小鼠脾脏来源的CD11c+ DC,于48后检测DC表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ及细胞内miR-449b改变;流式细胞仪分析不同剂量HMGB1刺激对DC凋亡的影响.DC转染miR-449b模拟物(miR-449b)、抑制物(In-miR-449b)及相应对照(miR-NC、In-miR-NC)后,HMGB1 (100 ng/ml)刺激48 h收取细胞,检测DC表面分子、凋亡改变以及与T细胞混合培养后T细胞增殖、分化功能的变化.结果:HMGB1刺激DC后,其表面分子随着剂量的增加表达上调,其中以100 ng/ml组上调为明显,而大剂量(1 000 ng/ml)时表达有所下调;miR-449b在48 h 100及1 000 ng/ml HMBG1组表达明显上调(P＜0.05);随着HMGB1剂量的增加,DC在48 h凋亡逐渐增加(P＜0.05).转染miR-449b可上调其在细胞内表达,而抑制物可抑制其表达;上调miR-449b后HMGB1 (100 ng/ml)刺激48 h DC表面分子CD86表达显著上调(P＜0.05)、凋亡增加(P＜0.01)、对T细胞的共刺激增殖效应减弱、混合性淋巴细胞反应中IL-4水平增多(P＜0.01)、IFN-γ水平下降(P＜0.05).结论:miR-449b可负性调控HMGB1介导DC免疫功能及促进其凋亡,进而在机体免疫反应障碍过程中发挥调控作用.
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miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长
目的 探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径.方法 脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况.细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力.Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况.结果 转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P＜0.05).miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P＜0.05).结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标.
