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雌激素调控ABCG2介导的乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性
目的 探讨雌二醇(E2)对乳腺癌耐药蛋白ABCG2表达和乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性的影响.方法 用雌激素受体激动剂E2及其拮抗剂TAM(同时也是GPER激动剂)、GPER特异性激动剂G1及其特异性拮抗剂G15分别或联合处理MCF-7细胞,Western blot和免疫荧光法检测MCF-7中ABCG2的蛋白表达量和细胞内定位;用盐酸阿霉素(Dox)处理经上述干预的细胞,流式细胞技术及CCK8法检测细胞对化疗药物敏感性的改变.结果 ABCG2在MCF-7的细胞膜及细胞质均有表达,E2可以上调ABCG2蛋白的表达量(P＜0.05),且使胞质内ABCG2向细胞膜移动,并且抑制细胞毒性作用,上述效应能被抑制剂TAM显著抑制(P＜0.05);TAM单独处理细胞后ABCG2蛋白表达量减少(P＜0.05),GPER特异性激动剂G1同样也抑制ABCG2蛋白的表达(P＜0.05),但两者对ABCG2胞膜定位的影响不显著,G1具有增强Dox化疗效能的作用,上述抑制作用均能被特异性抑制剂G15抑制.结论 E2同时激活ER及GPER时起到上调ABCG2的作用,抵抗化疗药物效果,但特异性激活GPER使ABCG2表达量明显减少,提高化疗疗效.
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GPR30/GPER介导雌激素快速效应的研究进展
雌激素不仅在生殖系统,而且还在机体其他多个系统中发挥重要的生理作用.雌激素对靶细胞的作用除了传统的基因组效应外还具有快速非基因组效应.近年来的研究发现,一种膜结合的雌激素受体:G蛋白耦联受体30(GPR30)又称G蛋白耦联雌激素受体(GPER),与雌激素结合后可通过调节激酶活性、影响第二信使分子、调节基因转录,从而介导雌激素对靶细胞的快速效应.GPR30介导的快速效应在生殖、心血管、神经和免疫系统的生理功能中都发挥重要的作用,并与肿瘤密切相关.对GPR30介导的雌激素快速效应的特异生物学功能和作用机制的研究,将为研制新一代用于治疗雌激素相关疾病的药物提供新的思路.
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双酚A对雄性小鼠生殖和睾丸GPER表达的影响及与肾虚不育的相关性研究
目的:探讨双酚A(Bisphenol-A,BPA)对雄性小鼠生殖和睾丸GPER表达的影响及与肾虚不育的相关性.方法:将6周龄雄性昆明小鼠随机分为正常、阴性对照、BPA、肾阳虚及肾阴虚组.高架十字迷宫和游泳力竭等实验评价小鼠惊恐程度、耐力等行为学改变;全自动精子分析仪检测精液质量,并计算平均育仔数;免疫组织化学和免疫荧光染色检测GPER在睾丸的定位和表达.结果:BPA与肾阳虚组小鼠均出现活动度和耐力下降及惊恐程度增加,精子数量与育仔数亦下降及精子畸形率增加及睾丸GPER的表达增加,且两组间无显著差异(P＞0.05).结论:BPA致雄性小鼠生精障碍与肾阳虚不育具有相关性.
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BPA激活GPER-EGFR-ERK1/2信号通路诱导乳腺癌细胞增殖
目的:研究雌激素G蛋白偶联受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)-表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)-细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路在双酚A促乳腺癌细胞SKBR-3增殖中的作用.方法:采用CCK8试剂盒检测SKBR-3细胞的增殖情况,利用Western Blot观察ERKl/2磷酸化变化.结果:与对照组相比,10-11～10-7M浓度的双酚A具有促乳腺癌细胞增殖作用,10-9M浓度的双酚A可诱导细胞增殖大效应(细胞活力高于对照组约38.84％,P＜0.001);预孵GPER、EGFR、ERK1/2特异性抑制剂G15、AG-1478、PD98059后,双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖明显减少,细胞活力与单纯双酚A(10-9M)处理相比降低约14.27％、12.23％和17.98 ％(P＜0.05);双酚A(10-9 M)处理细胞0.5、1、3小时后,发现磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达明显高于对照组,双酚A可快速激活ERKl/2;而阻断GPR30和EGFR后,ERKl/2的磷酸化表达减少.结论:双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖可能与GPR30-EGFR-ERKl/2信号通路有关,但不是唯一通路.深入研究双酚A对促进乳腺癌细胞增殖机制,可能为乳腺癌的防治提供新的方向.
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GPER在子宫内膜样腺癌中的表达及其与ER的相关性
目的：研究GPER ( G protein-coupled estrogen receptor )在子宫内膜样腺癌( EEC)组织中的表达情况,探讨GPER对EEC临床病理因素、预后的意义及其与雌激素受体( ER)之间的相关性。方法：采用实时定量PCR技术检测EEC组织中的GPER mR-NA含量,免疫组化法检测GPER蛋白含量,分析GPER表达对EEC的临床意义。结果：GPER高表达于FIGO晚期、低分化、子宫肌层深浸润及淋巴转移的EEC组织中。单因素分析结果显示,GPER mRNA高表达的患者预后较差( OS,P=0.001；DSS,P=0.001；PFS, P<0.001),GPER 蛋白阳性的患者预后亦较差(OS,P=0.009；DSS,P=0.009；PFS,P<0.001)。多因素分析发现, GPER不是影响EEC患者预后的独立因子。 GPER与ER无统计学相关性。结论：GPER不是EEC预后的独立因子,但在其临床生物学行为中扮演重要的角色。
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新型雌激素受体GPER在乳腺癌组织中的表达及与预后的相关性
目的 探讨新型雌激素受体GPER在乳腺癌中的表达及与患者预后的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测241例乳腺癌患者手术标本中GPER蛋白的表达,利用x2检验和t检验分析其与临床病理变量的关系,结合随访资料利用生存函数分析其与患者预后的关系.结果 乳腺癌组织中GPER阳性表达率为64.7％,其表达与ER、PR的表达显著相关(P＜0.05),与HER-2及其他临床病理指标(年龄、月经情况、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、病理类型)无相关性(P＞0.05).中位随访时间44.6月,GPER阳性肿瘤患者无进展生存时间和总生存时间较阴性患者长,但差异无统计学意义(P＞0.05).GPER的表达与乳腺癌患者内分泌治疗耐药也无相关性(P＞0.05).结论 GPER在大部分乳腺癌中阳性表达,但对患者预后无显著影响,可能不是乳腺癌的独立预后因子.
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p55PIK蛋白对ER(-/+)乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 观察p55PIK蛋白在雌激素受体(ER)阳性人乳腺癌细胞株MCF-7及ER阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231内的表达情况,并进一步探讨干扰p55PIK蛋白的表达对2种细胞增殖及迁移能力的影响,及可能的机制.方法 Western blot检测p55PIK在MCF-7及MDA-MB-231细胞株内的表达情况;瞬时转染特异性针对p55PIK蛋白的siRNA,并以无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照(blank),Western blot检测p55PIK蛋白表达的下调效果以及下调p55PIK后细胞内Akt及G蛋白偶联雌激素受体(G-protien coupled estrogen receptor,GPER)的表达变化;流式细胞术检测p55PIK表达下调对细胞周期的影响;MTT法和Transwell实验检测下调p55PIK后乳腺癌细胞增殖和迁移能力的改变.结果 p55PIK蛋白在人乳腺癌细胞株MCF-7及MDA-MB-231内均有表达,在MDA-MB-231细胞内表达强于MCF-7细胞;siRNA-p55PIK明显下调MCF-7及MDA-MB-231细胞中p55PIK蛋白的表达;Transwell实验显示下调p55PIK后MCF-7及MDA-MB-231细胞迁移能力均下降,且MCF-7细胞的siRNA-p55PIK组迁移能力显著低于siRNA-NC组[(44.2±7.6)vs.(83.7±14.8)]以及空白对照组[(44.2±7.6)vs.(95.9±17.3)](均P<0.01),MDA-MB-231细胞亦是siRNA-p55PIK组显著低于siRNA-NC组[(94.6±9.7)vs.(179.5±19.1)]和空白对照组[(94.6±9.7)vs.(194.7±34.9)](均P<0.01);MTT检测显示下调p55PIK后,MCF-7及MDA-MB-231细胞生长均明显受到抑制;Western blot结果显示下调p55PIK蛋白后,Akt蛋白磷酸化水平变化不明显;ER(-)细胞MDA-MB-231内GPER蛋白表达增加,而ER(+)细胞MCF-7内GPER表达变化不明显.结论 p55PIK蛋白在人乳腺癌细胞株MCF-7及MDA-MB-231内的表达有差异,下调p55PIK的表达可显著抑制MCF-7及MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,并可上调ER(-)细胞MDA-MB-231内GPER蛋白的表达,为ER(-/+)乳腺癌的预后观察及临床治疗提供了新思路.
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雌激素活化GPER介导的IL-6/STAT3通路促进乳腺癌细胞SKBR-3增殖作用
目的 探讨雌激素活化膜性雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)所介导的IL-6/STAT3炎症信号通路对乳腺癌SKBR-3细胞增殖能力的影响.方法 用17-β雌二醇(E2)、GPER特异性激动剂(G1)、GPER特异性拮抗剂(G15)、IL-6中和抗体(Anti-IL-6)及STAT3特异性抑制剂JSI-124(cucurbitacin I)药物处理SKBR-3细胞后,分别得到对照组、E2处理组、G1处理组、E2+G15处理组、G1+G15处理组、E2+ Anti-IL-6处理组、G1+Anti-IL-6处理组、E2+ JSI-124处理组与G1+JSI-124处理组,用ELISA检测细胞培养液上清中IL-6的分泌量,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Westernblot检测细胞中p-STAT3与STAT3的蛋白表达水平.结果 E2和G1显著促进SKBR-3细胞上清中IL-6的分泌量,G15可显著阻断其分泌(P＜0.05).E2及G1药物处理细胞后增殖能力较对照组显著增强,相对细胞数分别为对照组的(1.68±0.13)倍与(1.74±0.21)倍,其促增殖作用被G15及IL-6中和抗体(Anti-IL-6)显著抑制(P＜0.05).E2及G1在不同时间点(1、3、6、12 h)均可显著促进细胞中p-STAT3的蛋白表达量,分别于12 h和3h达到表达峰值,其蛋白相对表达量分别为对照组的(2.54±0.23)倍和(3.12±0.24)倍.G15、Anti-IL-6及JSI-124显著阻断以上变化(P＜0.05).JSI-124亦可明显抑制E2及G1所引起的促增殖效应(P＜0.05).结论 雌激素活化膜性雌激素受体GPER促进乳腺癌SKBR-3细胞自分泌IL-6从而激活细胞中下游STAT3炎症信号通路,同时,GPER/IL-6/STAT3信号通路也介导了雌激素对细胞的增殖作用.
关键词： GPER 雌激素 IL-6/STAT3信号通路 细胞增殖 -
雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖
目的 探讨G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)介导雌激素对人乳癌细胞系SKBR-3增殖的影响.方法 激光共聚焦显微镜扫描检测钙离子探针标记的细胞内钙离子浓度随时间的变化,CCK-8法观测细胞的增殖生长,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶(pbospho-extracellular regulate kinase,p-ERK)的相对表达量.结果 17-β雌二醇(E2)与GPER激动剂(G1)(E2、G1处理组)刺激SKBR-3细胞后,细胞内钙离子浓度从120 s开始迅速升高,细胞增殖与对照组相比显著增加,CCK-8测定的(E2、G1处理组)相对细胞数分别是对照组的(2.08 ±0.07)倍和(2.00±0.04)倍；流式细胞术检测E2、G1处理组细胞增殖指数(PI)(E2、G1处理组)为(43.12±0.38)％、(42.43±0.52)％,较对照组(29.19 ±0.29)％明显增加(P＜0.05)；Western blot检测结果显示E2处理组p-ERK表达量显著高于对照组(P＜0.05).GPER特异性抑制剂G15、EGFR拮抗剂AG1478、ERK拮抗剂U0126均可抑制E2、G1触发的相应变化,PI3K拮抗剂WM则不能.结论 雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖.
