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Notch1在前列腺癌细胞PC3中对其配体Jagged1表达的调控
目的 探讨在前列腺癌细胞PC3中,Notch1和Jagged1对细胞生长的影响,及Notch1对其配体Jagged1表达的调控作用.方法 通过siRNA干扰的方法分别抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达,用MTT法检测PC3细胞的生长;分别通过siRNA干扰和转染质粒的方法,抑制和促进PC3细胞中Notch1蛋白的表达,用Western blot检测Jagged1蛋白水平,用Real-time PCR检测Jagged1 mRNA水平.结果 抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达后,PC3细胞的生长减慢;抑制Notch1的表达引起Jagged1的蛋白水平下降而过表达Notch1引起Jagged1的蛋白水平上升,同时,Jagged1蛋白水平与mRNA水平的变化不一致.结论 Notch1和Jagged1对前列腺癌细胞PC3的生长有重要影响.Notch1可以调控其配体Jagged1的表达.
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沉默信息调节因子1(SIRT1)在前列腺癌恶性生物学表型中的作用
目的 观察SIRT1在前列腺癌组织和细胞中的表达,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的作用.方法 收集辽宁医学院附属第一医院手术切除的8例成对前列腺癌组织和癌旁组织随机分组,体外培养PrEC、LNCap、PC3和DU145细胞,real-time PCR和Western blot法检测SIRT1和P53在前列腺癌组织和细胞中mRNA和蛋白表达.提取细胞系中总蛋白、浆蛋白和核蛋白,Western blot法检测PC3和DU145细胞中SIRT1和P53的蛋白表达和定位.结果 前列腺癌组织中,SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜0.O1);LNCap、PC3和DU145细胞中SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于PrEC细胞(P ＜0.01);PC3和DU145细胞系SIRT1蛋白表达明显高于胞质(P＜0.01).结论 SIRT1可能通过P53不同方式促进前列腺癌发生,为探讨SIRT1在前列腺癌恶性生物学表型中的作用和机制奠定基础.
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叶绿素光敏剂-光动力学诱导PC3细胞凋亡的形态学研究
目的观察新型光敏剂-叶绿素衍生物(chlorophyll derivative,CPD4)结合650 nm激光照射的光动力学疗法体外对雄激素非依赖性细胞PC3的作用.方法PC3细胞培养后,分成空白对照、激光照射、光敏剂和治疗组(光敏剂加激光照射组)4组,光敏剂浓度0.1g/L,采用650 nm半导体激光照射、剂量为6 J/cm2,通过光镜、透射电镜和激光共聚焦显微镜观察.结果治疗组光镜下见PC3细胞体积变小、皱缩、变圆,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞质内有深褐色的光敏剂颗粒沉积.透射电镜下见细胞核内染色质高度凝聚在核膜下、边缘化,核膜出现破裂,细胞质中内质网肿胀,线粒体出现空泡化.激光共聚焦显微镜细胞质内有较强的红色荧光.正常对照组、激光照射组和光敏剂组均无上述特征变化.结论叶绿素光敏剂结合650 nm半导体激光照射能诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3出现凋亡改变,线粒体是光动力学的原始靶位,叶绿素-光动力学疗法通过线粒体途经激活细胞凋亡.
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AKR1C3基因沉默对前列腺癌PC3细胞转移潜能及多西紫杉醇敏感性影响研究
目的:探讨AKR1C3基因沉默对前列腺癌PC3细胞增殖与转移以及多西紫杉醇药物敏感性的影响.方法:通过脂质体转染的方法将GAPDH-pGIPZ shRNA和AKR1C3-pGIPZ shRNA瞬时转染前列腺癌PC3细胞.实验分为对照组、阴性对照组(GAPDH-pGIPZ shRNA)和实验组(AKR1C3-pGIPZ shRNA).通过蛋白质印迹法检测转染72 h后PC3细胞中AKR1C3蛋白的表达;细胞计数法检测各组前列腺癌PC3细胞的生长曲线及多西紫杉醇对各组细胞的抑制作用;划痕实验检测各组前列腺癌PC3细胞的迁移能力.结果:shRNA转染前列腺癌PC3细胞48 h后荧光显微镜下细胞发绿色荧光.蛋白质印迹法结果表明,实验组AKR1C3蛋白表达下降,相对表达量为(5.71±0.03)％,明显低于阴性对照组(9.75±0.08)％和对照组(9.55±0.05)％,F=44.050,P＜0.001.同时PC3细胞生长速率变慢,对多西紫杉醇的药物敏感性增加,实验组耐药IC50(27.81±0.02) nmol/L明显低于对照组(60.26±0.03) nmol/L和阴性对照组(59.94±0.05) nmol/L,F=823 200.711,P＜0.001.实验组细胞迁移能力下降.结论:前列腺癌PC3中AKR1C3基因的沉默能有效影响肿瘤细胞增殖、迁移和对多西紫杉醇药物的敏感性,提示AKR1C3有望成为前列腺癌治疗的靶基因.
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SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达的实验研究
目的:探讨SATB1与前列腺癌增殖及侵袭发生的关系.方法:体外培养前列腺癌细胞系(LNCaP、PC3、DU145),MMT法检测其增殖能力;Tanswell细胞侵袭实验检测其侵袭能力;RT-PCR检测其SATB1 mRNA的表达情况;Western blot检测其SATB1蛋白质的表达.结果:前列腺癌细胞PC3和DU145的增值能力及侵袭能力比LNCaP强(P＜0.01),PC3和DU145细胞中SATB1 mRNA及蛋白质表达水平均显著高于LNCaP细胞(P＜0.01).结论:SATB1在前列腺癌表达水平可能与前列腺癌的增殖和侵袭正相关.
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人线粒体转录因子A的表达与前列腺癌细胞顺铂耐药性机制的研究
目的 探讨人线粒体转录因子A (TFAM)的表达在前列腺癌非激素依赖型细胞系PC3中对顺铂耐药性的影响.方法 应用Western blot检测PC3细胞与顺铂高耐受性细胞PCDP6中TFAM的表达.并应用小干扰RNA降低PC3细胞中TFAM表达水平,检测细胞对顺铂的耐受性变化,绘制耐药曲线,计算IC50.结果 相比其母细胞PC3,顺铂高耐受性PCDP6细胞高表达TFAM.当用小干扰RNA降低TFAM表达后,PC3细胞对顺铂的敏感性增强,且TFAM的低表达可引起survivin的低表达.结论 TFAM的表达促进PC3细胞对顺铂的耐受,TFAM能提高细胞耐药性很可能与TFAM调控survivin的表达有关.
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α-维生素E的派生物,RRR-α-tocopheryloxybutyric acid对前列腺癌细胞的生长抑制作用
Aim:To investigate the activity of RRR-α-tocopheryloxybutyric acid (TOB), an ether analog of RRR-α-tocopheryl succinate (VES), in prostate cancer cells. Methods: VES and TOB were used to treat prostate cancer LNCaP, PC3,and 22Rv1 cells and primary-cultured prostate fibroblasts. The proliferation rates were determined by MTT assay,the cell viabilities were determined by trypan blue exclusion assay, and the cell deaths were evaluated by using Cell Death Detection ELISA kit. The protein expression levels were determined by Western blot analysis. Results: The MTT growth assay demonstrated that TOB could effectively suppress the proliferation of prostate cancer cells, but not normal prostate fibroblasts. Mechanism dissections revealed that TOB reduced cell viability and induced apoptosis in prostate cancer cells similar to VES. In addition, both TOB and VES suppressed prostate-specific antigen (PSA) at the transcriptional level leading to reduced PSA protein expression. Furthermore, vitamin D receptor (VDR) expression increased after the addition of TOB. Conclusion: Our data suggests that the VES derivative, TOB, is effective in inhibiting prostate cancer cell proliferation, suggesting that TOB could be used for both chemopreventive and chemotherapeutic purposes in the future.
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Rock蛋白抑制剂法舒地尔对前列腺癌PC3、DU145细胞侵袭、迁移和凋亡的影响
目的:探讨RhoA/Rock信号传导通路在前列腺癌形成过程中的可能作用;研究Rock蛋白抑制剂法舒地尔潜在抗肿瘤侵袭、迁移和促凋亡的作用. 方法:分别用5、10、20、40、80、160 μmol/L浓度的法舒地尔作用于前列腺癌PC3、DU145细胞24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,并计算其IC50,取法舒地尔IC50的1/4作为给药剂量用于进一步研究.免疫细胞化学法检测法舒地尔对PC3、DU145细胞RhoA、Rock I、RockⅡ蛋白表达的影响;Western印迹检测法舒地尔对PC3、DU145细胞RhoA总蛋白、RhoA膜蛋白、Rock I、RockⅡ蛋白表达的影响;通过Transwell、划痕实验、流式细胞术评估细胞的侵袭、迁移、凋亡情况. 结果:随着法舒地尔作用浓度的增加,对PC3、DU145的抑制率分别从(9.29 ±1.23)％、(7.59 ±1.54)％增加到(81.37 ±3.97)％、(76.53 ±2.67)％,呈一定剂量依赖性(P均＜0.05);细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC3、DU145细胞为(39.2±8.4)个和(34.2±6.7)个,阴性对照组分别为(116.8 ±9.3)和(112.5 +10.8)个,差异有统计学意义(P均＜0.05);划痕实验结果显示实验组PC3、DU145细胞24 h划痕愈合率为(37.26±1.17)％和(32.38 ±2.73)％,阴性对照组愈合率为(78.12±4.16)％和(69.47 ±6.71)％(P均＜0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示,法舒地尔作用PC3、DU145细胞后凋亡率分别为(31.88±2.49)％、(28.65±2.99)％,显著高于阴性对照组[(7.51 ±2.28)％、(7.13±1.61)％,P均＜0.05].免疫细胞化学检测显示,法舒地尔能明显降低Rock I和RockⅡ的表达(与阴性对照组比较P均＜0.05),而RhoA的表达与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Western印迹也显示,法舒地尔也明显降低RhoA膜蛋白、Rock I、RockⅡ蛋白的表达(与阴性对照组比较P均＜0.05),而RhoA总蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05). 结论:RhoA/Rock信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成;法舒地尔能够有效地抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与法舒地尔下调RhoA/Rock信号通路有关.
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褪黑素对人前列腺癌PC3细胞的增殖抑制作用
目的体外研究褪黑素(melatonin,MLT)对人前列腺癌PC3细胞的增殖抑制作用及与5-Fu联合用药的的影响.方法用细胞计数法绘制细胞生长曲线、MTT比色法测定细胞活力、改良对硝基酚法测定酸性磷酸酶(ACP)、改良二苯胺法测细胞内DNA含量及考马斯亮蓝法测定蛋白含量,并观察与5-Fu联合用药对PC3细胞的影响.结果 MLT对PC3、CoLo205、K562和 HeLa细胞的IC50分别为(1.20±0.30)、(1.27±0.12)、(1.60±0.16)和(2.25±0.11) mmol*L-1,MLT对上述细胞增殖的抑制呈时间和浓度依赖性,MLT减少PC3细胞的蛋白、DNA含量和降低酸性磷酸酶活性,MLT与5-Fu 0.5 mg*L-1联合用药有协同作用.结论 MLT对体外培养的肿瘤细胞的增殖有抑制作用,与5-Fu联合用药有协同作用.
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雄激素受体对前列腺癌细胞侵袭转移能力的影响及其意义
目的 研究雄激素受体(AR)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3侵袭转移能力的影响及意义. 方法应用肿瘤细胞侵袭实验、创伤愈合实验以及软琼脂糖凝胶实验检测AR对PC3侵袭转移能力的影响.结果 外源性AR转染到PC3(PC3-AR)后,其侵袭能力明显减弱,创伤愈合能力降低,在琼脂糖凝胶中形成克隆能力降低.结论 AR明显降低雄激素非依赖性PC3的侵袭转移能力.
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新型核素分子探针18F-NT靶向前列腺癌的实验研究
目的 探讨新型核素分子探针18F-NT在前列腺癌细胞及荷瘤小鼠的靶向性,为后续18F-NT靶向前列腺癌的在体显像提供实验依据.方法 制备18F-NT,并完成质量控制检测.选取高表达神经降压素受体1(NTR1)的人前列腺癌细胞系PC3,分3组进行细胞结合实验,分别为实验组、阻断组和对照组(游离18F离子).对照组在细胞中加入游离18F离子,实验组在细胞中加18F-NT,阻断组细胞中加入18F-NT前30 min加入神经降压素(NT)进行阻断.复制荷PC3前列腺癌裸鼠模型,分为实验组和阻断组,每组3只.阻断组单次尾静脉注射NT 0.2 ml(浓度为1 mg/ml);实验组注射0.2 ml生理盐水,30 min后两组裸鼠尾静脉分别注射37 MBq/ml的18F-NT 0.2 ml,1 h后处死裸鼠,分离主要脏器及肿瘤组织,γ计数器测量各脏器组织的放射性计数.分析两组肿瘤细胞的放射性计数及肿瘤组织的放射性摄取值(％ID/g).结果 成功制备18F-NT,其理化性质及各项质控指标均达标.细胞结合实验显示,PC3细胞实验组计数值(5825.00±1074.52)/min,高于阻断组(1941.66±173.58)/min,两者比较,差异有统计学意义(t=7.227,P=0.003),而对照组计数值仅为(170.33±56.59)/min;两组荷瘤裸鼠体内生物学分布实验表明,18F-NT血液清除较快,主要经肾脏代谢.实验组肿瘤摄取值高,为(1.02±0.49)％ID/g,阻断组肿瘤摄取值降低,为(0.21±0.03)％ID/g,两者比较,差异有统计学意义(t=2.815,P=0.049).结论 18F-NT标记率和放化纯高,体外稳定性好,前列腺癌细胞系PC3结合18F-NT高,PC3荷瘤裸鼠的肿瘤摄取18F-NT高,细胞和荷瘤均能被NT有效阻断,为后续18F-NT靶向前列腺癌NTR1在体显像打下良好的实验基础.
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β-细辛醚对3种肿瘤细胞增殖的抑制作用
[目的]观察β-细辛醚对A549、PC3、PC9-R 3种肿瘤细胞增殖活力、 周期、 凋亡及迁移的作用,为β-细辛醚应用于肿瘤治疗提供实验依据.[方法]将不同浓度的β-细辛醚分别作用于A549、PC3、PC9-R肿瘤细胞24 h、48 h及72 h后,采用CCK-8法检测各细胞光密度(D)值,计算细胞增殖活力,采用流式细胞术测定各细胞DNA周期及细胞凋亡率,采用Transwell小室检测细胞迁移.[结果]不同浓度β-细辛醚作用A549、PC3、PC9-R肿瘤细胞24 h、48 h及72 h后,与正常对照组比较,3种细胞生长均有下降趋势,呈浓度依赖性和时间依赖性,细胞周期均表现为G0/G1期细胞比例显著上升,S期细胞比例和增殖指数显著降低,细胞凋亡率显著增高,细胞迁移显著减少(均P<0.05或P<0.01).[结论]β-细辛醚可抑制A549、PC3、PC9-R肿瘤细胞的生长,阻滞细胞从G0/G1期进入S期,抑制DNA的合成,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移.
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BCL2（Ala43Thr）多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响
目的：：研究BCL2(Ala43Thr)多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响。方法：选用前列腺癌PC3细胞作为目的细胞,实验分为4组：(1)空白对照(CON)组：正常目的细胞、未感染任何病毒的细胞组；(2)阴性对照(NC)组：正常目的细胞、加阴性对照病毒感染的细胞组；(3)过表达-野生型(OE-wt)组：正常目的细胞、加目的基因 BCL2野生型病毒感染的细胞组；(4)过表达-突变型(OE-mu)组：正常目的细胞、加目的基因BCL2突变型病毒感染的细胞组。通过质粒构建和 PC3细胞转染以后进行细胞划痕实验,比较各组的迁移率,在6 h和24 h分别观察细胞形态学和测量每组的迁移距离并计算迁移率。结果：(1)从形态学上观察,4个组的细胞形态没有区别,生长良好。(2)细胞克隆形成率测定：CON 组为30%,NC 组为20%,OE-wt 组为12%, OE-mu组为14%。(3)在6 h时 OE-wt组、OE-mu组与CON组迁移率比较差异有统计学意义(P =0.004,P =0.005),但OE-wt组与 OE-mu组相比差异无统计学意义(P>0.05)。24 h 划痕均愈合,迁移率为1。结论：BCL2(Ala43Thr)过表达的野生型和突变型均对前列腺癌PC3细胞的迁移无影响。
关键词： 前列腺癌 BCL2 Ala43Thr PC3 划痕实验 -
沉默信息调节因子1小干扰RNA诱导前列腺癌细胞PC3细胞凋亡
目的 观察沉默信息调节因子1 (SIRT1)小干扰RNA (siRNA)对前列腺癌细胞PC3细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡和Bcl-2和Bax蛋白的表达变化,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能机制.方法 体外培养PC3细胞,分空白对照组(mock组),转染阴性对照组(scramble siRNA组)和SIRT1 siRNA转染组;Western blot检测PC3细胞中SIRT1的干涉效能;MTT法测定PC3细胞的增殖率;BrdU掺入法测定DNA合成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测PC3细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达.结果 与对照组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1蛋白表达降低(P＜0.01),PC3细胞的增殖和DNA合成明显受抑制(P＜0.01),细胞凋亡比例增加(P＜0,01),Bcl-2蛋白表达减少,Bax的表达增加.结论 下调SIRT1的表达抑制细胞增殖和DNA合成,诱导前列腺癌PC3细胞发生凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达相关.
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蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞的细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:利用MTT比色法检测蛇葡萄索对PC3细胞的抑制作用,并计算IC50;流式PI单染法检测细胞周期;流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率.结果:蛇葡萄素能明显抑制PC3细胞增殖,并呈剂量依赖关系;使细胞增殖阻滞于S期,G0/G1期细胞数减少;蛇葡萄索对PC3细胞作用72小时后的凋亡率随剂量增加而加大.结论:蛇葡萄素显著抑制PC3细胞的增殖,引起细胞S期阻滞,诱导细胞凋亡.
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姜黄素对前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡的研究
目的:从细胞水平观察探讨姜黄素对前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤作用,为临床前列腺癌的有效治疗提供相应的理论依据.方法:利用MTT比色法检测姜黄素对PC3细胞的抑制作用,并计算IC50；流式PI单染法检测细胞周期；流式AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率.结果:姜黄素能明显抑制PC3细胞增殖,并呈剂量依赖关系；使细胞增殖阻滞S期；姜黄素对PC3细胞作用72h后的凋亡率随剂量增加而加大.结论:姜黄素显著抑制pC3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有一定的抗前列腺癌作用.
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石榴叶提取物诱导前列腺癌细胞凋亡并抑制其增殖转移的研究
目的 研究石榴叶提取物(pomegranate leaves extract,PLE)对前列腺癌细胞增殖、凋亡及转移能力的影响.方法 采用MTT法检测不同质量浓度PLE(终质量浓度分别为12.5、25、50、100、200 μg/mL)干预作用不同时间(24、48、72 h)对前列腺癌细胞TRAMP-C1、DU145、PC3增殖的影响,克隆形成实验验证PLE对DU145、PC3细胞增殖的长期影响.PLE干预PC3细胞48 h后,Hoechst-33258染色观察细胞核内染色质变化,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,细胞划痕实验测试细胞迁移运动能力的变化.结果 与对照组比较,PLE在12.5～200 μg/mL范围内对TRAMP-C1、DU145、PC3细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05);PLE在6.25～100 μg/mL范围内使DU145和PC3集落形成数明显减少(P＜0.01).PLE干预48 h后,PC3出现细胞核断裂、产生凋亡小体的现象,随着PLE质量浓度增大,凋亡率逐渐上升(P＜0.05),同时PC3细胞向划痕区域迁移生长的能力比对照组低(P＜0.01).结论 PLE能抑制前列腺癌细胞增殖,同时促进PC3细胞凋亡,减弱其迁移能力.
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土贝母苷甲对雄激素非依赖性前列腺癌 PC3细胞增殖和形态学的影响
目的：从细胞水平探讨土贝母苷甲（TBMS1）对 PC3细胞的抗肿瘤作用，为临床前列腺癌的有效治疗提供相应的理论依据。方法：利用 MTT 比色法检测 TBMS1对 PC3细胞的抑制作用，并计算抑制率。瑞氏染色法观察 TBMS1作用细胞后，细胞内部形态学变化。结果：土贝母苷甲能明显抑制 PC3细胞的增殖，并呈剂量依赖性。细胞形态呈典型的凋亡形态学改变。结论：土贝母苷甲显著抑制 PC3细胞的增殖，具有一定的抗前列腺癌作用。
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黄腐酚抑制人前列腺癌PC3细胞增殖机制初探
目的：初步探讨黄腐酚抑制人前列腺癌 PC3细胞增殖机制。方法：检测细胞周期和凋亡分析黄腐酚对 PC3细胞增殖的影响；Western blot 分析黄腐酚对 Notch 信号通路关键蛋白的作用。结果：黄腐酚可以抑制PC3细胞增殖，同时降低 Notch 信号通路活性。在黄腐酚对 Notch 信号通路的作用机制研究中发现，黄腐酚能够降低 GSK －3β活性，引起 Notch 信号通路活性降低。结论：黄腐酚可能是通过抑制 GSK －3β活性从而降低Notch 信号通路活性，终抑制 PC3细胞的增殖。
