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miR-211通过靶向调控 TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖
目的 探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响.方法 用miR-211及TFAM作为研究对象.首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5′端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pcDNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;后,检测pcDNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖.结果 miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P<0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P<0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pcDNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P<0.01,蛋白质P<0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P<0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P<0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P<0.05).结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖.
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miR-211对上皮性卵巢癌细胞 HO8910增殖及细胞周期相关蛋白的影响
目的：：探讨miR-211与上皮性卵巢癌发生的关系,及其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法：对30例上皮性卵巢癌组织标本及卵巢癌细胞系HO8910中miR-211、Cyclin D1和CDK6表达情况进行研究,同时选取30例非卵巢癌患者组织标本及正常卵巢上皮细胞株IOSE80作为对照,并分析上皮性卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中miR-211、Cyclin D1、CDK6表达情况及表达相关性；miR-211对卵巢癌细胞增殖,以及对Cyclin D1和CDK6表达的影响。结果：卵巢癌组织miR-211相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),卵巢癌细胞中miR-211相对表达水平显著低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05)；在上皮性卵巢癌细胞系HO8910中,第3天和第4天miR-211组细胞数显著低于miR-Ctrl组( P<0.05)；上皮性卵巢癌组织中Cyclin D1、CDK6相对表达水平显著高于正常卵巢上皮组织(P<0.05)；上皮性卵巢癌细胞系中miR-211显著抑制Cyclin D1和CDK6的表达；在卵巢癌组织中,Spearman 相关性分析结果显示miR-211和Cyclin D1和CDK6相对表达水平呈负相关(r=-0.583,P=0.010)。结论：miR-211可抑制卵巢癌细胞增殖,并抑制周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6的表达,miR-211与周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6在卵巢癌发生中可能存在调控关系。
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脂多糖在人缺氧诱导心肌细胞凋亡中的作用及相关机制
目的 探讨脂多糖在人缺氧诱导心肌细胞凋亡中的作用及机制.方法 收集在该院行风心病换瓣手术的患者二尖瓣乳头肌组织,分离、纯化得到心肌细胞;分别用40、60 μg/ml脂多糖预处理心肌细胞6h,设置空白对照;在37℃、3％ O2、5％CO2、95％ N2缺氧条件下培养24h;原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞.分别与脂多糖处理前后、缺氧诱导后采用qRT-PCR检测细胞中miR-211表达情况,Western印迹检测细胞中Sirt1蛋白水平.结果 缺氧条件下培养24 h后,脂多糖组心肌细胞凋亡率明显高于对照组,60 μg/ml脂多糖组明显高于40 μg/ml脂多糖组(均P＜0.05).脂多糖处理前,3组细胞中miR-211、Sirt1相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05);脂多糖处理6h和缺氧诱导后,40、60 μg/ml脂多糖组细胞中miR-211相对表达量均明显高于同期对照组和脂多糖处理前,Sirt1蛋白相对表达量均明显低于同期对照组(均P＜0.05),其中60 μg/ml脂多糖组变化更明显.结论 脂多糖可加速缺氧诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制与上调miR-211表达及抑制Sirt1蛋白表达有关.
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miR-211通过抑制PTEN基因的表达促进肺鳞状细胞癌的增殖及侵袭能力
目的 探讨miR-211是否通过调控PTEN的表达而影响人肺鳞状细胞癌细胞体外增殖和侵袭能力.方法 通过双荧光素酶报告证明PTEN为miR-211的下游靶基因,miR-211及其阴性对照( miR-N. C. )转染人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H520,观察细胞中PTEN的mRNA水平和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖实验、细胞周期实验和侵袭实验(Trans-well),观察NCI-H520细胞体外增殖和侵袭能力的变化.结果与对照组相比,miR-211可显著降低荧光素酶的表达活性(70.6% vs100% ,χ2=28.331,P=0.001). miR-211靶向作用PTEN可使NCI-H520细胞中mRNA表达水平较对照下调78.9% (χ2=114.973,P=0.045),而蛋白水平则下调71.4% (χ2=113.318,P=0.025). miR-211处理后第3天,NCI-H520细胞的增殖能力比对照组细胞增高32.6% (χ2=27.143,P=0.031).而细胞周期实验表明与阴性对照相比,miR-7-5p处理组的NCI-H1975细胞,其S期所占比例显著上调(19.2% vs32.7% ,χ2=5.221,P=0.013),而G0/G1期所占比例则显著降低(67.8% vs55.1% ,χ2=2.973,P=0.026).相比对照组,miR-211可将NCI-H520细胞的侵袭能力上调约47.3% (χ2=48.937,P=0.035).结论 MiR-211主要是通过靶向抑制PTEN表达增强人肺鳞状细胞癌的增殖和侵袭能力.
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姜黄素通过下调microRNA-211表达促进结肠癌细胞的凋亡及其机制
目的：检测姜黄素对结肠癌细胞中微小RNA 211（microRNA 211，miR-211）表达的影响并探讨miR-211调控结肠癌细胞增殖和凋亡的可能机制。方法使用MTT法和流式细胞术检测不同浓度姜黄素在不同时间点对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响；使用实时荧光定量PCR（qRT- PCR）检测不同浓度姜黄素对结肠癌细胞中miR-211表达的影响；使用生物信息学预测miR-211下游靶基因TP53INP1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合；用miR-211模拟物（miR-211 mimics）检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖的影响，同时使用Western blot法检测其对TP53INP1蛋白表达的影响；用TP53INP1小干扰RNA检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果相较于未处理组，姜黄素在10～50μmol/L浓度可抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡（<0.05）。姜黄素可抑制肿瘤细胞中miR-211的表达，并具有时间和剂量依赖性（<0.05）；此外，miR-211下游靶基因TP53INP1蛋白表达量上调（<0.05）。用miR-211转染结肠癌细胞可逆转姜黄素对其增殖的抑制作用，并且TP53INP1表达下调（<0.05）；用TP53INP1小干扰RNA可逆转姜黄素对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响（<0.05）。结论姜黄素可通过下调miR-211抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡，并且TP53INP1是miR-211下游调控蛋白之一。
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胃癌组织中血管生成素样蛋白2和miR-211表达水平与其预后的关系
目的 探讨胃癌组织中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和miR-211表达水平与其预后的关系.方法 采用免疫组化法检测胃癌根治术治疗的62例患者胃癌组织及其相应癌旁组织中ANGPTL2和miR-211的表达水平,并分析其对胃癌患者预后的影响.结果 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率分别为88.71%和83.87%,均显著高于其癌旁正常组织的3.23%和8.06%(P<0.05).62例患者随访3年的复发率、无病生存期(DFS)和3年生存率分别为45.16%、(16.62±4.78)个月和62.90%,且ANGPTL2和miR-211阳性表达患者的复发率高于阴性表达患者,DFS短于阴性表达患者,3年生存率则低于阴性表达患者(P<0.05).logistic线性回归分析结果显示,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率均可明显影响其预后情况(P<0.05).结论 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率较高且可影响其复发率、DFS和3年生存率等预后情况,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达可能作为其不良预后评估的参考指标.
