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Let-7a靶向抑制Ewing肉瘤中CDK6的表达
目的 研究抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因.方法 用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建pMIR-reporter-CDK6野生型(CDK6_WT)或突变型(CDK6_MUT)及阳性对照(Let-7a_PC)质粒;体外合成的寡核苷酸(Let-7a_mimic)转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因.结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值高为:0.193±0.024(P＜0.05);双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a(P＜0.01);野生型CDK6(CDK6_WT)荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6(CDK6_MUT)相比明显下降(P＜0.05);在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达.结论 确定了抑癌micmRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础.
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MicroRNA-26a及靶基因CDK6在结外NK/T细胞淋巴瘤的表达研究
目的:探讨microRNA-26a(miR-26a)及靶基因CDK6在结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma,ENKTCL)的表达及其在ENKTCL发生发展中的可能作用.方法:采用实时荧光定量PCR法检测15例ENKTCL组织和10例正常NK细胞中miR-26a的表达;采用免疫组织化学Maxvision法检测20例ENKTCL组织、10例增生性淋巴结炎组织和10例正常淋巴结组织中CDK6蛋白表达水平;结合ENKTCL患者临床特征,分析miR-26a及靶基因CDK在ENKTCL发生发展中的可能作用.结果:ENKTCL组织miR-26a的表达显著低于正常NK细胞;ENKTCL组CDK6蛋白表达显著高于增生性淋巴结炎组和正常淋巴结组织.相关性分析显示,ENKTCL组织中miR-26a表达与CDK表达呈显著负相关(r=-0.54,P=0.04).同时,miR-26a表达与患者年龄、性别、Ann Arbor分期、LDH水平、B症状、国际预后指数评分(IPI)无关;CDK6表达与患者的Ann Arbor分期、IPI有关,但是与年龄、性别、LDH水平、B症状无关.结论:miR-26a的异常表达可能通过调控ENKTCL组织中靶基因CDK6的表达,参与ENKTCL的发生发展.
关键词： 结外NK/T细胞淋巴瘤 CDK6 microRNA-26a -
CyclinD1、Cdk6在子宫内膜腺癌中的表达与临床意义
目的 探讨CyclinD1、Cdk6在子宫内膜腺癌中的表达与临床意义.方法 应用免疫组织化学,检测30例正常子宫内膜及30例不典型增生子宫内膜和45例子宫内膜腺癌中的CyclinD1与Cdk 6蛋白的表达情况.结果 CyclinD1与Cdk 6在不典型增生子宫内膜和子宫内膜腺癌中的表达率与正常子宫内膜组相比有统计学意义(P<0.05),与子宫内膜腺癌的分化程度,Dukes分期及淋巴结转移呈正相关关系 (P<0.05).结论 CyclinD1与Cdk 6蛋白的过度表达可能在子宫内膜癌的发生、发展、浸润中起重要作用,对判断子宫内膜腺癌的预后有一定的临床意义.
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CDK6导致肿瘤的机制研究进展
细胞周期的异常调控导致细胞过度增殖是人类肿瘤发生的重要原因之一,目前已发现CDK6和CDK4是细胞周期的重要调控因子,促进细胞周期正向进行,且在人类大多数肿瘤中过度激活,与肿瘤的发生密切相关.近,研究证实以CDK4/6为靶点的肿瘤治疗有广泛前景.但是对于CDK6过度激活导致肿瘤发生的机制尚不完全清楚.因此有必要进一步了解CDK4/6在细胞周期调控通路、细胞分化中的作用及其在不同类型肿瘤中的异常表达,对深入了解肿瘤的发生机制及治疗有重大意义.本文拟对CDK6的结构、生物学功能、促进肿瘤的相关机制,以及其抑制剂的临床应用等方面的内容进行阐述.
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细胞周期调控相关蛋白CDK4、CDK6在子宫内膜样腺癌中的表达与临床意义
目的 探讨细胞周期调控相关蛋白CDK4、CDK6在子宫内膜样腺癌中的表达、相互关系与临床意义.方法 应用免疫组织化学,检测50例子宫内膜样腺癌及50例不典型增生子宫内膜及50例子宫内膜增生和40例正常子宫内膜中的CDK4、CDK6蛋白的表达情况.结果 CDK4与CDK6的阳性表达在正常子宫内膜、子宫内膜增生、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样腺癌中依次增加,组间差异具有统计学意义(P＜0.05),与子宫内膜样腺癌的分化程度,Dukes分期及淋巴结转移呈正相关关系(P＜0.05).结论 CDK4与CDK6蛋白的高表达可能在子宫内膜样腺癌的发生、发展、浸润及转移中起一定作用,对临床判断子宫内膜样腺癌的恶性程度和预后具有一定的意义,还可能作为一种有价值的肿瘤标志物.
关键词： 子宫内膜样腺癌CDK4 CDK6 免疫组织化学 -
miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系
目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量(P＜0.001),说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖(P＜0.01),同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型(CDK6-WT)会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达(P=0.002);Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.
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miR-211对上皮性卵巢癌细胞 HO8910增殖及细胞周期相关蛋白的影响
目的：：探讨miR-211与上皮性卵巢癌发生的关系,及其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法：对30例上皮性卵巢癌组织标本及卵巢癌细胞系HO8910中miR-211、Cyclin D1和CDK6表达情况进行研究,同时选取30例非卵巢癌患者组织标本及正常卵巢上皮细胞株IOSE80作为对照,并分析上皮性卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中miR-211、Cyclin D1、CDK6表达情况及表达相关性；miR-211对卵巢癌细胞增殖,以及对Cyclin D1和CDK6表达的影响。结果：卵巢癌组织miR-211相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),卵巢癌细胞中miR-211相对表达水平显著低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05)；在上皮性卵巢癌细胞系HO8910中,第3天和第4天miR-211组细胞数显著低于miR-Ctrl组( P<0.05)；上皮性卵巢癌组织中Cyclin D1、CDK6相对表达水平显著高于正常卵巢上皮组织(P<0.05)；上皮性卵巢癌细胞系中miR-211显著抑制Cyclin D1和CDK6的表达；在卵巢癌组织中,Spearman 相关性分析结果显示miR-211和Cyclin D1和CDK6相对表达水平呈负相关(r=-0.583,P=0.010)。结论：miR-211可抑制卵巢癌细胞增殖,并抑制周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6的表达,miR-211与周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6在卵巢癌发生中可能存在调控关系。
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血清间皮素联合CDK6诊断早期卵巢癌的临床价值研究
目的:探讨血清间皮素联合CDK6诊断早期卵巢癌的临床价值.方法:选择2014年6月～2017年6月就诊于我院妇产科的51例Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌患者(实验组)及同期经病理确诊为正常卵巢组织的43例患者(对照组)为研究对象,检测和比较其血清MSLN、CA125、CA199、HE4、VEGF-C水平及卵巢癌组织CDK6的表达.采用多因素logistic回归进一步分析两种间上述有显著差异的指标.同时,对新指标与血清CA125、CA199水平进行相关性分析,ROC曲线分析其对早期卵巢癌的诊断价值.结果:实验组血清MSLN、CA125、CA199、HE4、VEGF-C水平及CDK6表达均显著高于对照组(P＜0.05).多因素logistic分析结果显示血清MSLN、CA125、CDK6表达对早期卵巢癌的诊断有价值(P＜0.05),且血清CA125的影响程度高(RR=1.421).卵巢癌患者血清MSLN(r=0.573,P=0.013)和卵巢癌组织CDK6表达(r=0.412,P=0.037)与CA125呈正相关关系.ROC曲线提示血清MSLN、CDK6表达、血清CA125及MSLN联合CDK6诊断早期卵巢癌的ROC曲线下面积分别为0.639、0.700、0.715、0.765,MSLN联合CDK6的曲线下面积大.结论:血清MSLN联合癌组织CDK6的表达诊断早期卵巢癌的临床价值明显优于常规血清学指标CA125、CA199.
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低浓度MNNG诱发细胞周期相关基因DK6及E2F7表达研究
目的 研究低浓度N-甲基-N'-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞的细胞周期相关基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的基因及其调控机制.方法 用实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在0.2μmol/L MNNG处理后细胞周期相关基因CDK6及E2F7基因表达的改变.数据用ABI公司的SDS2.1软件分析.结果 MNNG处理后,细胞周期相关基因CDK6及E2F7表达显著下调(P＜0.05).结论 低浓度MNNG攻击可使人羊膜FL细胞周期发生异常.
关键词： N-甲基-N'-硝基-N-甲基亚硝基胍 细胞周期 CDK6 E2F7 -
miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响
目的探讨miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响,以及对CDK6蛋白表达的调控。方法将50 nmol/L的miR-107 mimics 或阴性对照序列由 Lipofectamine 2000转染入人肝癌细胞株 HepG2中；qRT-PCR 法检测转染后HepG2细胞内miR-107表达水平；四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞增殖能力；流式细胞术分析转染后细胞周期的变化；Western blot法检测CDK6蛋白表达水平。结果转染后24 h,miR-107 mimics转染组细胞内miR-107表达水平较空白对照组明显升高(P<0.05)；与空白对照组相比,miR-107 mimics转染组HepG2细胞增殖受抑制( P<0.05),处于G0/G1期的细胞增多( P <0.05), CDK6蛋白表达下调( P <0.05)。结论 miR-107能够抑制 HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞G0/G1期阻滞,这可能与其抑制 CDK6蛋白的表达有关。
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慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者舌苔脱落细胞CDK4和CDK6的表达及意义
用免疫细胞化学方法,观察慢性浅表性胃炎脾胃湿热证舌苔脱落细胞CDK4和CDK6的表达的意义.结果:脾胃湿热组患者舌苔脱落细胞CDK4和CDK6阳性细胞显著高于脾气虚组和正常对照组(P<0.01).结论:CDK4和CDK6在脾胃湿热证舌苔脱落细胞保持高表达,可能与中医证型有关.
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XIAP通过调节CDK4/CDK6/cyclinD1复合物表达促进肝癌细胞增殖
目的 研究肝癌细胞中XIAP与CDK4/CDK6/cyclin D1复合物之间的调控关系及在肝癌细胞增殖中的作用.方法 前期研究用Pathway Array进行肝癌组织异常表达蛋白筛选,后期XIAP特异性抑制剂embelin处理Huh7细胞进行增殖、周期分析.Western blot验证XIAP与CDK4/CDK6/cyclin D1复合物之间的调控关系.结果 Pathway Array提示XIAP与CDK4、CDK6、cyclin D1之间存在联合表达.embelin引起Huh7细胞G1期阻滞、S期分布减少,抑制细胞增殖.XIAP可以调节Huh7细胞G1期蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1表达.结论 XIAP通过调节肝癌细胞G1期蛋白CDK4/CDK6/cyclin D1复合物的表达,促使细胞进入G1周期,从而促进其增殖.
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胃癌中CDK6 mR NA表达变化研究
目的：探讨胃癌中CDK6 mRNA含量的变化。方法采用实时荧光定量PCR检测胃癌及癌旁组织中CDK6 mRNA的表达。结果胃癌组织中 CDK6 mRNA 含量为0．433±0．468，癌旁组织为1．304±1．206，两组相比，差异具有统计学差异（P＜0．05）。结论 CDK6 mRNA在胃癌癌旁组织表达水平明显高于癌组织。
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子宫内膜样腺癌组织中PTEN、CDK6蛋白的表达及临床意义
目的 探讨PTEN、CDK6蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测正常子宫内膜、内膜增生、非典型增生和子宫内膜样腺癌组织中PTEN和CDK6蛋白.结果 非典型性增生和子宫内膜样腺癌组中PTEN和CDK6蛋白阳性表达率分别为56.7%、46.7%和40.0%、66.7%,两组中PTEN阳性表达均显著低于正常内膜和子宫内膜增生组(P<0.001),而CDK6则显著增高(P<0.003),二者在非典型性增生和子宫内膜样腺癌组中的表达均呈显著负相关(r=-0.384 5,P<0.04;r=-0.472 5,P<0.002).癌组中PTEN阳性表达缺失与组织学分级(P<0.04)、肌层浸润深度或伴有转移(P<0.02)及临床分期有关(P<0.03).CDK6的阳性表达与肌层浸润(Ρ<0.05)和临床分期有关(Ρ<0.03).肿瘤的复发与PTEN的低表达和CDK6的高表达有关(P<0.05,P<0.02).结论 PTEN表达缺失和CDK6的过表达可能涉及了子宫内膜样腺癌的发生、发展过程,二者的联合检测可作为临床预测肿瘤复发的生物学指标.
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大肠癌组织中CDK6、Ki67表达及其与临床病理因素的关系
目的:探讨大肠癌组织中CDK6、Ki67蛋白的表达及与其大肠癌病理因素的关系及二者之间的相关性.方法:应用免疫组织化学方法研究84例大肠癌组织及其配对的48例切缘正常大肠组织中CDK6、Ki67蛋白的表达情况,比较CDK6、Ki67表达的差异及其与大肠癌病理因素之间的关系及二者之间的相关性.结果:大肠癌组织中CDK6蛋白表达阳性率(88.1％)明显高于切缘正常大肠组织(10.4％)(P＜0.05),CDK6蛋白表达阳性率与Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关(P＜0.05)；与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大体类型无关(P＞0.05)；大肠癌组织中Ki67蛋白表达阳性率(92.9％)明显高于切缘正常大肠组织(20.8％)(P＜0.05),Ki67蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤大体类型、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度无关(P＞0.05),CDK6与Ki67蛋白表达具有正相关关系(r=0.581,P=-0.000).结论:CDK6与Ki67过量表达可能在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用,可能用于大肠癌辅助诊断.CDK6可作为判断大肠癌预后的因子之一.
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siRNA抑制CDK6表达影响鼻咽癌细胞增殖和细胞周期进展
目的：利用siRNA抑制CDK6表达后对鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响及分子基础。方法实时荧光定量PCR检测CDK6在30例鼻咽癌与18例鼻咽组织中的表达差异。siRNA转染鼻咽癌细胞CNE2，靶向抑制CDK6表达。利用MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞周期改变。Western blot检测细胞周期相关因子的表达改变。结果与鼻咽组织相比，CDK6基因mRNA在鼻咽癌组织中表达明显增高。siRNA在鼻咽癌细胞中靶向抑制CDK6表达后，细胞生长能力明显降低，且细胞周期也明显阻滞在G1期，S期细胞减少。机制分析显示在抑制CDK6表达后，细胞周期促进因子CDK4、CCND1和E2F1表达显著下降，而细胞周期抑制因子p21表达明显提升。结论 CDK6在鼻咽癌中表达升高。siRNA靶向抑制CDK6之后通过下调CDK4、CCND1和E2F1以及上调p21表达后，能明显抑制鼻咽癌细胞增殖能力及细胞周期转化。
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CDK6在早期卵巢癌中表达及其临床意义
目的：探讨CDK6在早期卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR检测CDK6在卵巢癌以及卵巢组织中的表达；进一步，利用免疫组化检测CDK6蛋白在卵巢癌以及卵巢组织中的表达；统计分析CDK6在卵巢癌与卵巢组织中的表达差异；分析CDK6蛋白表达与临床参数以及生存预后的相关性。结果实时荧光定量PCR分析36例卵巢癌与16例卵巢组织中的CDK6 mRNA表达显示，与卵巢组织相比，CDK6 mRNA表达水平在卵巢癌组织中明显升高（P=0.0063）；免疫组化分析121例卵巢癌和48例卵巢组织CDK6蛋白表达后显示，CDK6蛋白是一个核浆共表达因子，其表达水平在卵巢癌组织中明显高于卵巢组织（P=0.044）。除此之外，过表达的CDK6与卵巢癌组织临床参数无明显相关性，但与患者的预后呈明显负相关（P=0.006）。后，多变量分析显示，CDK6是早期卵巢癌预后不良的一个独立因子（P=0.025）。结论 CDK6过表达作为不利的因素促进了早期卵巢癌发生发展。
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MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能
目的 检测MicroRNA-218(miR-218)在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能.方法 收集46例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况；应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化.结果 miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P＜0.05);miR-218低表达与肿瘤大小(＞5cm)和高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)具有显著相关性(P＜o.05)；在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达(P＜0.05).结论 miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡.
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CDK6在鼻咽癌中的表达及临床意义
目的：探讨CDK6在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组化检测CDK6在鼻咽以及鼻咽癌组织中表达，并利用统计学方法分析CDK6在鼻咽与鼻咽癌中表达差异。利用统计学方法分析CDK6与鼻咽癌患者临床参数之间的相关性。结果分析了101例鼻咽癌组织和30例鼻咽组织中CDK6表达。免疫组化结果显示，CDK6是一个核浆共表达因子。在鼻咽组织中， CDK6主要在胞浆表达。而在鼻咽癌组织中，主要为核浆共表达。与非癌鼻咽组织相比，CDK6蛋白在鼻咽癌组织中表达明显上调（P=0.009）。此外，CDK6调的表达与鼻咽癌组织大小（P=0.020）及临床分期（P=0.039）呈明显的正相关。CDK6表达越高，患者肿瘤越大，临床分期越晚。结论CDK6表达下调作为不利因素促进了鼻咽癌的发生发展。
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CDK6在早期卵巢癌组织中的表达及其临床价值评价
目的 研究CDK6在早期卵巢癌组织中的表达.方法 选取本院2017年1月至2018年5月收治的卵巢癌患者42例为研究对象,并随机在志愿者中选取42例健康女性为对照组,通过PCR以及免疫组化法检测两组对象CDK6的表达情况,并分析实验组患者各临床参数与CDK6表达的相关性.结果 实验组CDK6mRNA表达及CDK6蛋白表达相对于对照组明显上升,实验组CDK6高表达率28.57％(12/42),高于对照组11.90％(5/42),差异有统计学意义(P＜0.05);CDK6表达结果与年龄、病理分类、分化程度、临床分期等参数相关性较低(P=1.113、0.524、0.627、0.068);患者生存时间与CDK6表达时间具有一定相关性,CDK6表达越高,患者生存时间越短.结论 CDK6表达越高,卵巢癌发生概率越大.
