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散瘀和胃汤对胃癌前病变胃黏膜组织中let-7a的表达及临床症状的影响
目的:观察散瘀和胃汤对胃癌前病变(PLGC)胃黏膜组织中let-7a的表达及对病理、临床症状的影响.方法:将76例PLGC患者随机分为两组各38例,治疗组脱落5例,对照组脱落7例.治疗组33例,对照组31例.治疗组给予散瘀和胃汤方治疗,对照组给予胃复春片治疗,治疗前后分别行电子胃镜检查并经内镜下活检.通过RT-PCR反应检测治疗前后let-7a的相对表达量,并观察两组临床症状和病理的改善情况.结果:治疗后,治疗组let-7a的相对表达量显著高于治疗前(P＜0.01);对照组治疗前后let-7a的相对表达量差别不显著.治疗后,治疗组let-7a的表达水平显著高于对照组(P＜0.01).治疗后两组临床症状及病理积分均较治疗前显著降低(P＜0.01);治疗组较对照组降低更显著(P＜0.01).结论:散瘀和胃汤治疗PLGC疗效显著,并能提高let-7a的表达量,有效改善临床症状.
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硒化合物诱导高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡
目的 探讨二氧化硒(SeO2)对高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡的诱导作用及其分子途径.方法 不同浓度SeO2分别作用于高危型HPV亚型宫颈癌细胞HeLa(HPV18+)和Caski(HPV16+)24 h,光学显微镜下观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖及活力;流式细胞计量术(FCM)检测细胞凋亡率;Western blot测定细胞内caspase-3和p53蛋白表达;Stem-loop实时定量PCR检测凋亡相关miRNA LET-7a表达.结果 SeO2作用后宫颈癌细胞变圆、皱缩;SeO2呈量效依赖关系抑制宫颈癌细胞增殖,其中HeLa细胞在7.5~30μmol/L组抑制作用显著;Caski细胞在SeO2低浓度组即有显著抑制作用(P<0.05).宫颈癌细胞凋亡率亦随SeO2浓度升高而升高,在Caski细胞上升更加明显.SeO2可明显上调宫颈癌细胞系中caspase-3与p53蛋白水平,在HeLa细胞中二者均于7.5μmol/L处达到峰值.Caski细胞从7.5μmol/L组开始凋亡蛋白表达量显著性升高(P<0.05).SeO2还可显著上调两细胞系实验组细胞LET-7a表达水平,且均在7.5μmol/L处出现峰值.结论 SeO2通过上调高危型HPV亚型宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白p53蛋白及miRNA LET-7a的表达,经caspase-3途径诱导细胞凋亡.对于SeO2诱导宫颈癌细胞凋亡,HPV16+型较HPV18+型宫颈癌细胞更为敏感.
关键词： 二氧化硒(SeO2) 高危HPV亚型 凋亡 miRNA let-7a -
Let-7a靶向抑制Ewing肉瘤中CDK6的表达
目的 研究抑癌microRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中的靶基因.方法 用Northern blot分析细胞系中Let-7a的表达量;构建pMIR-reporter-CDK6野生型(CDK6_WT)或突变型(CDK6_MUT)及阳性对照(Let-7a_PC)质粒;体外合成的寡核苷酸(Let-7a_mimic)转染Ewing肉瘤细胞系SK-ES-1,用real time PCR检测Let-7a的表达;通过生物信息软件分析、双荧光素酶报告实验和Western blot寻找并确定Let-7a的靶基因.结果 Let-7a在Ewing肉瘤细胞系中系低表达,以MSCs为参照,SK-ES-1 Let-7a/U6 snRNA灰度值高为:0.193±0.024(P＜0.05);双酶切和DNA测序鉴定质粒构建成功;在SK-ES-1细胞中成功过表达Let-7a(P＜0.01);野生型CDK6(CDK6_WT)荧光素酶表达水平与对照组和突变型CDK6(CDK6_MUT)相比明显下降(P＜0.05);在SK-ES-1细胞系中过表达Let-7a抑制了CDK-6 mRNA和蛋白质的表达.结论 确定了抑癌micmRNA(Let-7a)在Ewing肉瘤细胞系中靶基因,为进一步实验奠定了基础.
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口腔鳞癌中let-7a、miR-21和miR-27a的表达及其作用
目的 探讨let-7a、miR-21和miR-27a在口腔鳞状细胞癌(OSCCs)中的表达及其作用.方法 采用地高辛标记的锁定核酸修饰的miRNA探针进行原位杂交,对5例正常口腔黏膜组织和30例口腔鳞癌及其癌旁组织中let-7a、miR-21、miR-27a的表达进行定性、定位研究,通过图像分析对实验结果进行了半定量分析.结果 let-7a、miR-21和miR-27a分别在40％ (2/5)、80％ (4/5)、40％(2/5)的正常口腔黏膜组织中有微弱表达,而在肿瘤组织和癌旁组织均有不同程度的表达.这3种miRNAs在口腔鳞癌组织中的表达均明显高于其癌旁组织和正常组织(P＜0.01),let-7a和miR-27a在癌旁组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.01),但miR-21在癌旁组织和正常组织中的表达差异无显著性(P＞0.05).这3种miRNAs的表达在不同年龄、不同性别及有无淋巴结转移的口腔鳞癌患者之间的差异均无显著性(P＞0.05).miR-27a在中低分化口腔鳞癌组织中的表达明显高于其在高分化肿瘤组织中的表达(P＜0.05),而let-7a和miR-21的表达与肿瘤分化程度无关(P＞0.05).相关分析发现,OSCCs中let-7a与miR-21的表达之间具有相关性,而miR-27a与let-7a和miR-21表达之间均无相关性.结论 Let-7a、miR-21和miR-27a过度表达在口腔鳞癌发生发展中具有一定作用,miR-27a可能是与口腔鳞癌分化程度有关的一个分子标志.在OSCCs中let-7a和miR-21之间可能存在一定联系.
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let-7a调控自噬对缺氧状态卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响
目的 自噬是细胞在不良环境中自我吞噬的生物学现象,在恶性肿瘤发病机制中具有重要作用,缺氧是诱导细胞自噬的重要因素.本研究探讨不同氧环境中卵巢癌HO-8910细胞let-7a的表达变化及对缺氧细胞自噬、增殖的影响.方法 实验分常氧组、缺氧组、缺氧+ miR-NC-mimics组和缺氧+let-7a-mimics组4组,各组细胞经处理48 h后:吖啶橙染色观察细胞自噬发生情况;MTT法分析细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞周期分布;Real time PCR分析let-7a、Be-clin-1和LC3-Ⅱ的表达变化,蛋白质印迹试验分析Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达变化.结果 HO-8910细胞经缺氧处理后自噬率显著增高至(34.46±5.13)％,F=49.932,P=0.002;在缺氧基础上转染miR-NC-mimics后,自噬率变化不大,F=0.110,P=0.756;而转染let-7a-mimics后,细胞自噬率显著降低至(4.56±2.04)％,F=68.186,P＜0.001.缺氧使G0/G1期细胞数量明显增至(70.43±3.19)％,F=23.216,P=0.008;同时转染miR-NC-mimics后,其数量变化差异无统计学意义,F=0.467,P=0.532;而在缺氧条件下转染let-7a-mirnics,其数量则增至(82.37±3.45)％,F=67.423,P=0.001;并伴随细胞增殖抑制率显著上升,F=24.602,P=0.007.缺氧条件下以及缺氧同时转染miR-NC-mimics后,let-7a表达下调,而Beclin-1、LC3-Ⅱ表达上调;而在缺氧基础上转染let-7a-mimics后,let-7a表达明显增强,F=295.623,P＜0.001;Beclin-1蛋白表达下调,F=33.285,P=0.002;LC3-Ⅱ也明显下调,F=41.969,P=0.001.结论 卵巢癌HO-8910细胞在缺氧状态时,let-7a表达下调,细胞启动适度自噬保护机制,介导细胞逃避缺氧环境使细胞继续快速生长,当上调let-7a表达后,缺氧所致的适度自噬保护作用被消减,细胞增殖明显受抑.
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异常高氡温泉周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA的表达
目的 探讨四川省若尔盖县降扎乡异常高氡温泉对周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA表达的影响.方法 获取高氡温泉及对照地区居民外周血样,用实时RT-PCR检测肺癌相关基因( p53、k-ras)及血浆中相关miRNA(let-7a、miR-34a/b)的表达,用Western blot检测靶蛋白p53和k-ras的表达.结果 高氡温泉周围居民p53和k-ras基因mRNA表达分别是对照组的0.97和1.33倍,但差异无统计学意义(t=0.13、-1.12,P＞0.05)；靶蛋白p53和k-ras的表达与基因表达变化趋势一致,分别是对照组的0.7倍和1.23倍,(t=0.72、0.46,P＞0.05).高氡组let-7a与对照相比有下降趋势(t=1.63,P＞0.05).值得注意的是,与对照组相比,高氡组miR-34a和miR-34b明显高表达(t=-3.20、-3.32,P＜0.05).结论 通过检测p53和k-ras基因以及miRNA的变化,推测高氡温泉周围居民受到了辐射损伤.
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Let-7a和miR-96对胰腺癌K-RAS基因的调节作用
目的 探讨miRNA分子Let-7a和miR-96对胰腺癌系K-RAS基因的抑制作用及其致病机制.方法 通过检测胰腺癌细胞系miRNA分子(Let-7a和miR-96)水平、K-RAS基因mRNA和蛋白质表达水平,观察Let-7a和miR-96水平与K-RAS蛋白表达的关系；并通过升高胰腺癌细胞Let-7a和miR-96水平,检测其对K-RAS蛋白表达水平的影响.结果 胰腺癌细胞系K-RAS的mRNA与蛋白质表达均保持在一个较高的水平；胰腺癌细胞系miRNA分子Let-7a和miR-96水平均较低；升高胰腺癌细胞Let-7a或miR-96水平会降低K-RAS蛋白表达水平.结论 正常状态下,Let-7a和miR-96通过调控K-RAS基因发挥对肿瘤的抑制作用,胰腺癌细胞的Let-7a和miR-96水平呈一定程度的降低,削弱了对K-RAS基因的抑制作用,进而参与肿瘤的致病过程.
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局部注射胆固醇包裹let－7a miRNA模拟物下调人3种Ras表达抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长和转移
目的：研究胆固醇包裹let－7a模拟物（mimics）是否能通过下调人3种Ras抑制肝癌发展，寻找肝癌的潜在治疗策略。方法采用MTT增殖分析、 PI单染和Annexin V／FITC双染方法检测let－7a mimics在体外对肝癌细胞的作用。使用裸鼠皮下移植瘤模型和通过肿瘤局部注射方法观察let－7a mimics对体内肝癌的作用。采用实时定量PCR和Western blot方法检测let－7a及其靶点Ras的表达。结果与阴性对照组相比， let－7a mimics转染的肝癌细胞let－7a水平升高，细胞增殖缓慢（P均＜0．05）； let－7a mimics阻滞更多肝癌细胞停留在G0－G1期且促进肝癌细胞凋亡（P均＜0．05）。经let－7a mimics治疗的裸鼠体内肿瘤体积较阴性对照组减小，是阴性对照组的54．97％（ P＝0．039）；局部浸润和肝脏转移较阴性对照组明显减轻。肝癌细胞和移植瘤组织内let－7a上调的同时，人K－Ras、 H－Rras和N－Ras mRNA和蛋白的表达降低（P均＜0．05）。结论 let－7a mimics下调人3种Ras mRNA和蛋白的表达，影响细胞周期，进而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。瘤周多点注射胆固醇包裹的let－7a mimics能抑制移植瘤的生长、浸润和转移。提示let－7阻断Ras可成为肝癌治疗的研究策略。
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microRNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控及其在白内障中的作用
目的 探讨microRNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用及其在白内障中的作用.方法 利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜、人晶状体上皮细胞凋亡模型和正常人晶状体上皮细胞系let-7a的表达情况;利用Lipofectamine 2000瞬时转染let-7a mimic和let-7a inhibitor,分别上调和下调人晶状体上皮细胞中let-7a的表达,并利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.结果 年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组let-7a的表达显著低于正常对照组;人晶状体上皮细胞凋亡模型组let-7a的表达显著低于正常对照组;let-7a mimic转染组let-7a的表达显著高于对照组,let-7a inhibitor转染组let-7a的表达显著低于对照组;let-7a mimic转染组细胞凋亡率显著低于对照组,let-7a inhibitor转染组细胞凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 microRNA let-7a能够调控人晶状体上皮细胞凋亡,从而在白内障发病过程中发挥重要作用,microRNA let-7a可能成为白内障非手术治疗的新靶点.
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let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响
目的 研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB / c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况.结果 与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51 %,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ra.蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中.k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P > 0.05).结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关.
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Let-7a在哮喘T淋巴细胞失衡中的作用研究
目的:探讨let-7a在哮喘中的表达水平及调节T淋巴细胞亚群失衡的功能作用.方法:收集39例哮喘患者及19例非哮喘对照,Real-time PCR检测let-7a的表达.从哮喘患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分选Th1,Th2和Th17细胞,检测let-7a在T淋巴细胞亚群中的表达.磁珠分选naive T细胞,分别诱导分化成Thl、Th2和Thl7细胞,分析let-7a在T淋巴细胞亚群中的表达.Let-7amimic分别转染Th2和Th17细胞,ELISA检测IL-13和IL-17的表达.结果:与对照组比较,let-7a在哮喘患者肺组织和血清中低表达,并随着哮喘病程进展,let-7a的表达水平也越低.哮喘患者来源的CD4+T细胞中,let-7a表达明显低于非哮喘对照组.Let-7a在哮喘来源和体外刺激分化的哮喘炎性Th2和Th17细胞中的表达明显下调,而在Thl细胞中的表达没有变化.Let-7a mimic改变了Th2和Th17相关细胞因子IL-13和IL-17的表达.结论:Let-7a在哮喘中低表达,调节哮喘T淋巴细胞亚群失衡,改变了Th2和Th17细胞的功能,是哮喘理想的诊断和治疗靶点.
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Let-7a下调k-Ras和c-Myc癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖
目的:MicroRNA是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点.近的研究发现,1et-7a在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过程中,let-7a扮演着不可替代的角色.本文主要研究let-7a在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因,寻求肾癌新的治疗途径有重要意义.方法:应用化学合成的let-7a模拟物(mimics)用脂质体Lipofectamine 2000在体外瞬时转染786-O和Caki-1肾癌细胞株,转染48小时后采用荧光定量RT-PCR的方法检测let-7a及c-Myc、k-Ras mRNA的表达情况,Western blot检测这两株肾癌细胞转染了let-7a mimics后c-Myc及k-Ras蛋白的表达变化;转染let-7a mimics后分别在24、48、72小时三个时间点用CCK-8试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响.结果:786-O和Caki-1肾癌细胞株中let-7a的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞株HK-2 (P＜0.05);转染了let-7amimics的786-O和Caki-1肾癌细胞株,RT-PCR及Western blot结果显示c-Myc、k-Ras在基因及蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05);CCK-8检测结果显示转染了let-7a mimics的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Let-7a在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异,let-7a通过调控c-Myc、k-Ras的表达能抑制肾癌细胞增殖.Let-7a mimics可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调Let-7a的表达有可能成为肾癌基因治疗的一种有效治疗手段.
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microRNA let-7a对乙型肝炎病毒复制的影响
目的 研究microRNA let-7a(以下简称let-7a)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响.方法 (1)收集23例伴有慢性活动性乙型肝炎的肝细胞癌(HCC)患者的手术标本,用实时荧光定量PCR(real-time qRT-PCR)检测let-7a在HCC组织中的表达,分析let-7a的表达和HBV复制状态之间的关系.(2)用real-time qRT-PCR法检测HBV稳定复制的HCC细胞系HepG2.2.15及其亲本HCC细胞HepG2的let-7a表达.(3)通过细胞转染,利用let 7a特异的反义寡核苷酸抑制物下调HepG2.2.15细胞中let-7a的表达,通过实时PCR(real time PCR)检测HBV DNA水平的变化.结果 let-7a在HBV高复制的临床HCC标本中明显高于HBV低复制者(P＜0.05).与HepG2相比,let-7a在HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞系中表达上调(P＜0.05).let-7a抑制剂能显著抑制HBV DNA的水平,并且具有时间依赖性(P＜0.05).结论 let-7a的表达和HBV的复制状态呈正相关,let-7a能促进HBV复制.
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Let-7a通过调控骨髓间充质干细胞增殖影响骨质疏松的研究
目的·研究雌激素缺乏所致骨质疏松发生过程中Let-7a对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖能力的影响.方法·取20只8周龄健康雌性小鼠,行双侧卵巢切除术(OVX),建立雌激素缺乏骨质疏松动物模型.另取20只健康雌性小鼠行卵巢附近脂肪组织部分切除术(sham).术后2个月,Micro-CT检测2组小鼠股骨干骺端骨密度、骨体积分数及骨小梁数量;MTT检测2组BMSC的增殖能力;real-time PCR检测2组BMSC中Let-7a的表达;上调或下调BMSC内Let-7a的表达水平后,MTT检测BMSC的增殖能力.结果 ·Micro-CT显示OVX组股骨干骺端骨密度、骨体积分数及骨小梁数量均低于sham组.成脂能力及成骨能力检测发现,OVX组BMSC成骨能力低于sham组,成脂能力高于sham组.MTT显示OVX组BMSC增殖能力低于sham组.OVX组BMSC中Let-7a的表达明显高于sham组.上调Let-7a的表达水平后,BMSC增殖水平下降;下调Let-7a的表达水平后,BMSC增殖水平上升.结论·在雌激素缺乏所致的骨质疏松小鼠中,高表达的Let-7a抑制BMSC增殖,可能是导致骨质疏松发生的原因之一.
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let-7a微小RNA在黑素瘤中的表达及其对A375细胞增殖的影响
目的 探讨甲醛固定石蜡包埋的黑素瘤组织中let-7a微小RNA(mieroRNA)的表达情况及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 选取黑素瘤蜡块13份,先天性色素痣蜡块10份,抽提microRNA,采用茎环引物逆转录为cDNA,然后采用Taqman MGB探针,相应的引物,进行实时荧光定量PCR.继而采用cy3标记的siRNA阴性对照物转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率,后将let-7a的模拟物转染入A375细胞,MTT实验检测转染后细胞增殖的变化.结果 从石蜡包埋组织中成功抽提出microRNA,而且定量PCR结果显示let-7a在黑素瘤中的表达明显低于色素痣组织(t=2.364,P＜0.05).荧光显微镜下观察siRNA转染效率约80%～90%,hsa-let-7a转染A375细胞后,使其增殖受抑,转染后24 h抑制率达32.7%.结论 let-7a在黑素瘤中表达下降,过表达let-7a可使A375细胞增殖受到抑制,提示其在黑素瘤中可能起抑癌基因样作用.
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Let-7a靶向调节周期素D2抑制胶质瘤细胞增殖
目的 探讨let-7a通过靶向调控周期素D2 (cyclin D2)对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 在U87和U251胶质瘤细胞中转染入化学合成的let-7a模拟物上调let-7a表达,荧光素酶报告基因实验检测let-7a与周期素D2的靶向调控关系,Western blot检测转染let-7a后周期素D2的表达情况,MTT和流式细胞术检测let-7a对胶质瘤细胞增殖的抑制作用.结果 在胶质瘤细胞中周期素D2是let-7a的靶基因,过表达的let-7a可下调周期素D2表达和抑制胶质瘤细胞增殖.结论 let-7a可通过靶向调控周期素D2而抑制胶质瘤细胞增殖.
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let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响
目的 探讨let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响.方法 将HCCLM3细胞分为常氧组、缺氧组和缺氧let-7a组,分别给予不同的处理.各组设6个平行孔,培养72 h.采用吖啶橙染液法测定HCCLM3细胞自噬率,采用MTT法检测HCCLM3细胞活力,使用流式细胞仪分析HCCLM3细胞周期G1,采用酶联免疫吸附法测定培养上清let-7a、细胞周期D1蛋白(cyc D1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平.结果 缺氧let-7a组细胞存活率为(49.7±9.5)％,显著低于常氧组或缺氧组的(100.0±0.0)％或(119.1±13.1)％(P<0.05),缺氧组细胞存活率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞周期G1期和细胞自噬率分别为(89.6±16.1)％和(49.3±7.4)％,显著高于常氧组或缺氧组的(56.3±11.0)％和(13.2±8.1)％或(69.7±14.1)％和(23.5±5.5)％(P<0.05),缺氧组细胞周期G1期和自噬率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞let-7a蛋白水平为(96.1±9.3)μmol/L,显著高于常氧组或缺氧组的(33.4±7.1)μmol/L或(65.3±5.2)μmol/L(P<0.05),cyc D1和VEGF水平分别为(72.3±8.8)μmol/L和(56.3±6.3)μmol/L,显著低于常氧组或缺氧组的(124.1±7.2)μmol/L和(114.1±5.2)μmol/L或(98.2±6.7)μmol/L和(85.2±8.1)μmol/L(P<0.05),缺氧组let-7a蛋白显著低于常氧组(P<0.05),cyc D1和VEGF显著高于常氧组(P<0.05).结论 上调let-7a在肝癌HCCLM3细胞的表达能诱发细胞自噬,使得细胞在G1期往S期的分化过程发生障碍,抑制细胞在缺氧环境中的增殖,其机制可能与细胞CYC D1和VEGF表达下调有关.
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microRNA let-7a在刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤中的作用
目的:探讨microRNA let-7a对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)小鼠肝损伤的保护作用.方法:建立ConA诱导的小鼠肝损伤模型,采用尾静脉注射let-7a慢病毒表达质粒的方法,并在造模前7d给予let-7a进行治疗干预.采用自动生化仪分析检测血清ALT变化；ELISA检测血清TNF-α、IL-6和干扰素-γ(IFN-γ)表达水平；HE染色肝脏组织病理学观察,评价let-7a治疗效果.结果:治疗组血清ALT水平较模型组明显降低(P＜0.01)；与模型组相比,治疗组IL-6水平明显降低(P＜0.01),治疗组血清炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ水平也显著下降(P＜0.05).肝脏组织病理学检查显示,治疗组较模型组肝组织损伤程度明显减轻,炎症细胞明显减少(P＜0.01,P＜0.05).治疗组小鼠生存率明显高于模型组(P＜0.01).结论:let-7a对ConA诱导的小鼠肝损伤有保护作用,该作用可能通过抑制相关炎症细胞因子TNF-α、IL-6和IFN-γ表达来实现.
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膝骨关节炎患者软骨组织、软骨细胞中let-7a表达变化及意义
目的 观察let-7a在膝骨关节炎(KOA)患者软骨组织、软骨细胞中的表达变化,并探讨其对细胞凋亡和自噬的影响.方法 ①收集40例KOA患者及15例行下肢截肢手术患者的膝关节软骨组织并分离培养软骨细胞.采用实时荧光定量PCR法分别检测KOA软骨组织、正常软骨组织及KOA软骨细胞、正常软骨细胞let-7a mR-NA相对表达量.②取生长状态良好的KOA软骨细胞,随机分为let-7a过表达组和对照组,分别转染let-7a mimics及NC-mimics,转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测let-7a mRNA相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3,包括LC3Ⅱ、LC3Ⅰ)、Beclin1表达,计算Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ.结果 ①KOA软骨组织及正常软骨组织let-7a mRNA相对表达量分别为0.48±0.18、0.29±0.13,两者相比P均<0.01;KOA软骨细胞、正常软骨细胞let-7a mRNA相对表达量分别为1.02±0.07、0.98±0.05,两者相比P<0.01.②let-7a过表达组let-7a mRNA相对表达量高于对照组,细胞凋亡率低于对照组(P均<0.01);Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均高于对照组,Bax、LC3Ⅰ蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05).结论 let-7a在KOA患者软骨组织、软骨细胞中的表达均降低;上调let-7a表达能够促进软骨细胞自噬并抑制其凋亡,从而发挥软骨保护作用.
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Let-7a 对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制探讨
目的 观察Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 分别用LipofectamineTM2000介导的Let-7a和siRNA转染人乳腺癌细胞株MCF-7(分别为Let-7a组、空白对照组和阴性对照组),半定量RT-PCR法检测两组C-myc mRNA表达;Western blot法测定转染24 h后C-myc蛋白的表达水平; CCK-8法检测细胞增殖抑制率.结果 Let-7a组的C-myc mRNA表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组,P均＜0.01;在MCF-7细胞中存在相对分子质量62 kD的特异性条带,与C-myc相对分子质量相符,Let-7a组特异性条带明显弱于对照组; Let-7a组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(P＜0.05),且具有时间和浓度依赖性.转染24 h后,Let-7a组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).结论 Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有抑制作用;其机制可能为抑制C-myc基因的表达.
