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Tet-on调控系统文献资料
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CX26/CX32缝隙连接蛋白的Tet-on HeLa细胞模型的建立及鉴定
目的 体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接(GJ)作用的特异性细胞模型,为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段.方法 构建同时双向表达2种不同连接蛋白(CXs)的质粒;用表达CX26/CX32的质粒转染Tet-on HeLa细胞,建立稳定表达CX26/CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型.设置多西环素(Dox)(1μg/mL)处理组和未处理组,分别用RT-PCR和Western blot法检测细胞CX26 mRNA和蛋白质表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能;丽丝胺罗丹明B(SRB)法检测细胞的增殖.在上述细胞模型上,用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)和GJ激活剂维甲酸(RA)干预.结果 HeLa细胞无内源性CX的表达,Dox可诱导Tet-on HeLa细胞CX26 mRNA和蛋白质表达,并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ.2-APB(50 μmol/L)减少稳定表达CX26/Cx32的HeLa细胞间的荧光传递数目,GJ抑制率为51.3％ (P ＜0.01);RA(10 μmol/L)增多细胞间的荧光传递数目,GJ增强率为60.3％ (P ＜0.01).结论 成功建立Dox调控的、稳定表达CX26/Cx32的Tet-on HeLa细胞模型,为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段.
关键词： 细胞缝隙连接 CX26/CX32 Tet-on调控系统 Hela细胞 诱导表达
