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CRP促进THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的表达
目的 探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞株(THP-1)来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)蛋白和mRNA的表达及相关信号转导通路的影响.方法 用佛波醇脂诱导THP-1分化为巨噬细胞.用不同浓度CRP在体外干预,分别采用RT-PCR和细胞酶联免疫测定干预后巨噬细胞LOX-1抗原蛋白和mRNA的表达.同时观察当NF-κB、AP-1和MARK信号通路抑制剂存在时,CRP对LOX-1抗原和mRNA表达的影响.结果 CRP促进巨噬细胞LOX-1蛋白和mRNA表达增加.NF-κB的抑制剂BAY11-7085能抑制CRP对LOX-1蛋白和mRNA表达的诱导作用.结论 CRP能在转录及转录后水平诱导THP-1来源的巨噬细胞表达LOX-1,这种调节作用可能是通过NF-κB信号传导通路实现的.
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FLT3靶向短发夹状干扰RNA体外转录合成及作用
FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关.为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3 mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达.结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3 mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强.25 nmol/L shRNA1转染48小时对FLT3 mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时.5 nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3 mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系.15 nmol/L shRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%.FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%.结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具.
关键词： 急性髓系白血病 Flt3 FLT3-shRNA RNA干扰 THP-1细胞株 -
淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对THP-1细胞分泌细胞因子的影响
目的:比较淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对人组织细胞瘤THP-1细胞分泌4种细胞因子的影响.方法:放射免疫测定方法(RIA).结果:在LPS和PMA存在下,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物(宝藿苷I和淫羊藿苷元)对IL-6的产生有促进作用,代谢物的作用更强,对IL-8的产生有一定的抑制作用.当LPS和PMA不存在时,对IL-6的产生无明显影响,而对IL-8的产生则有促进作用.不论LPS和PMA存在与否,原苷对TNFα的产生有抑制作用,原苷及其肠菌代谢产物对IL-1α的产生均有明显抑制作用.结论:在不同的实验条件下,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对各种炎症性细胞因子的产生均有特异的调节作用.
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二氧化硅致人单核细胞THP-1核因子-κB活化定位改变的研究
目的探讨矽肺发病过程中SiO2诱导对人单核细胞株THP-1核因子-κB(NF-κB)活化的影响.方法采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜(LSCM,Zeiss 510)检测THP-1细胞NF-κB p65亚基(NF-κB/p65)定位;Western-blot法测定THP-1细胞核蛋白中NF-κB/p65水平.结果免疫荧光分析显示,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB/p65在胞浆区为绿色荧光,而进入了丙亚基碘(PI)红色荧光标记的胞核区时则红绿两色叠加成黄色荧光.正常细胞NF-κB/p65主要分布于胞浆区,核区很少,而100μg/ml SiO2刺激30 min后NF-κB/p65荧光标记集聚于核区,胞浆区少见.Western-blot结果显示,对照组(0μg/ml SiO2)THP-1细胞核蛋白中有低水平NF-κB/p65表达;100μg/ml和200μg/mlSiO2作用15 min和30 min,THP-1细胞核蛋白中NF-κB/p65表达增加,并随着剂量的增加和时间的延长,NF-κB/p65水平相对增加.NF-κB/p65激活剂脂多糖(LPS)处理的THP-1细胞NF-κB/p65定位情况和核蛋白水平与上述结果相似.结论SiO2刺激可引起THP-1单核细胞NF-κB核转位活化.
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三氧化二砷对白血病细胞EVI-1基因作用的研究
目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对白血病细胞中EVI-1基因的作用.方法:采用1μmol/L的As2O3处理1例高表达EVI-1基因的急性单核细胞白血病患者的原代细胞,并用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞的EVI-1 mRNA表达率;同时采用RT-PCR检测人白血病细胞株K562、HL-60、U937和THP-1中EVI-1 mRNA基因的相对表达量.选取EVI-1 mRNA表达量高的THP-1细胞株作为研究对象,经多位点PCR测序确认其包含EVI-1基因全长片段后,分别以1、3、5 μmol/L的As2O3处理THP-1细胞株,观察细胞形态变化,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测EVI-1 mRNA表达率,蛋白质印迹法检测细胞内EVI-1蛋白的表达情况.结果:As2O3能下调原代细胞中EVI-1 mRNA,抑制THP-1细胞株增殖、诱导其凋亡,且呈剂量、时间依赖性;As2O3能下调THP-1细胞株EVI-1 mRNA、EVI-1蛋白的表达.结论:As2O3通过抑制白血病细胞EVI-1 mRNA、EVI-1蛋白的表达,从而促进其凋亡.
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蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响
目的:探讨蓝桉油对人单核细胞THP-1细胞株核因子-κB(NF-κB)核转位活化的影响.方法:蓝桉油(1、10、100 mg/L,30 min)预处理THP-1细胞,经脂多糖(LPS,1 mg/L,30 min)刺激后,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜,测定THP-1细胞NF-κB p65亚基(NF-κB/p65)定位;Western-blot法分析细胞核内NF-κB/p65水平.结果:免疫荧光分析显示,正常细胞NF-κB/p65荧光标记主要分布于胞浆区,核区很少,LPS刺激后NF-κB/p65荧光标记浓集于核区,胞浆区少见;但经蓝桉油(100 mg/L)预处理后,LPS刺激的THP-1细胞NF-κB/p65荧光标记则主要位于胞浆区;Western-blot分析显示,在正常THP-1细胞核蛋白中有低水平的NF-κB/p65表达,经LPS刺激,核内NF-κB/p65表达明显增高;蓝桉油预处理后,可以抑制LPS诱导的核内NF-κB/p65高水平表达,且呈剂量依赖关系.结论:蓝桉油预处理阻止了LPS诱导的NF-κB/p65核转位,从而抑制了其活性功能的发挥.蓝桉油可抑制LPS刺激引起的NF-κB核转位活化.
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雷公藤内酯醇抗单核细胞白血病细胞株THP-1的实验研究
目的:探讨雷公藤内酯醇对人类单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响.方法:运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对THP-1细胞株增殖和凋亡的影响.结果:雷公藤内酯醇能明显抑制THP-1细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用48 h时其半数抑制浓度IC50为18 nmol/L,且经雷公藤内酯醇处理后THP-1细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05).雷公藤内酯醇作用后48 h的变化与THP-1细胞凋亡率具有相关性,r=0.97,P<0.05,而作用24 h,其无明显诱导凋亡的作用.结论:雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰THP-1细胞周期,上调细胞G1/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用.
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西立伐他汀对THP-1细胞CD40和基质金属蛋白酶9表达的影响
通过观察他汀类药物对单核细胞CD40和基质金属蛋白酶9的表达是否存在抑制作用,初步探讨他汀类药物可能的非调脂的抗动脉粥样硬化机制.将培养的THP-1细胞中加入不同浓度的西立伐他汀,运用RT-PCR法检测CD40及基质金属蛋白酶9 mRNA,酶联免疫吸附测定法测定培养基的基质金属蛋白酶9的浓度.结果发现,西立伐他汀抑制THP-1细胞CD40和基质金属蛋白酶9 mRNA的表达,并呈浓度依赖性.西立伐他汀在0.01 μmol/L时,CD40及基质金属蛋白酶9的表达无明显降低,但在1和10 μmol/L时,CD40 mRNA的表达下调55%、89%,基质金属蛋白酶9 mRNA的表达亦明显下降(0.453±0.13比0.073±0.01和0.009±0.001).培养基的基质金属蛋白酶9浓度在西立伐他汀1和10 μmol/L时分别从0.469±0.06降低至0.243±0.04和0.039±0.01(P<0.05).结果提示,西立伐他汀能抑制THP-1细胞CD40表达以及基质金属蛋白酶的表达和分泌,提示他汀类药物可减轻动脉粥样斑块炎症,防止斑块破裂,从而减少急性冠状动脉事件的发生.
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血管壁细胞人突触相关蛋白的表达
目的目前尚无文献报道人突触相关蛋白与脂蛋白代谢和泡沫细胞形成、凋亡的关系.本文研究氧化型低密度脂蛋白致THP-1细胞泡沫化过程中人突触相关蛋白基因的表达,用制备的兔抗人突触相关蛋白多克隆抗体检测其在血管细胞及肝癌细胞系HepG2细胞中的表达.方法 THP-1细胞用1640培养,PMA处理诱导其向巨噬细胞分化,实验组加氧化型低密度脂蛋白(终浓度80 mg/L),对照组不加氧化型低密度脂蛋白.根据人突触相关蛋白基因序列设计引物,以看家基因GAPDH为内对照,反转录-聚合酶链反应半定量检测人突触相关蛋白基因的表达.用特异的抗人突触相关蛋白的多克隆抗体,采用免疫组织化学或流式细胞术检测人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP-1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中的表达.结果人突触相关蛋白基因在氧化型低密度脂蛋白致THP-1细胞泡沫化过程中表达增高,与抑制消减杂交结果一致.免疫组织化学或流式细胞术检测,人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP-1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中均有表达,主要定位在细胞质,与该基因的生物信息学分析结果一致.结论人突触相关蛋白在多种细胞中均有表达,人突触相关蛋白基因在单核细胞泡沫化过程中表达增高,可能与单核细胞源性泡沫化细胞形成有关.
