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MiR-145在胶质瘤中的表达及其与患者临床病理特征的关系
目的:探究MiR-145在胶质瘤中的表达及其与患者临床病理特征的关系.方法:从我院2010年1月至2012年12月收治的胶质瘤手术患者中选取其中的51例进行研究,同期选取25例正常脑组织标本,检测MiR-145的表达水平,同时检测患者的累积生存率.结果:MiR-145在胶质瘤中表达水平明显低于在正常脑组织中的表达水平(P＜0.05),有统计学意义.MiR-145表达与性别、年龄、肿瘤大小等基本临床特征无相关性(P＞0.05),无统计学意义;MiR-145表达与肿瘤分级、KPS评分、生存累积时间等存在明显关系(P＜0.05),有统计学意义.MiR-145低表达胶质瘤患者死亡风险比(HR)明显高于MiR-145高表达胶质瘤患者(P＜0.05),有统计学意义.结论:MiR-145在胶质瘤中有着很强的抑制肿瘤的作用,胶质瘤中的MiR-145的表达水平异常低,其与患者的生存时间相关性明显.
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氯吡格雷通过上调miR-145表达抑制VSMC增殖的机制研究
目的 本研究旨在探究miR-145是否对血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖起调控作用,以及氯吡格雷如何通过调控CD40来发挥其消炎作用,以期为氯吡格雷的药用作用发挥提供新的理论依据.方法 实验分组为①DMSO组,即溶剂对照组;②TNF-α组;③miR-145抑制剂对照组;④氯吡格雷组;⑤miR-145抑制剂+氯吡格雷组.并通过EdU标记检测细胞增殖;qRT-PCR用于检测miR-145,CD40和VSMC中Calponin mRNA的表达;Western blot检测CD40的蛋白表达水平;通过ELISA检测细胞培养物上清液中IL-6的水平.结果 与氯吡格雷组相比,miR-145抑制剂+氯吡格雷组的Calponin mRNA水平降低(P <0.01);与DMSO组相比,TNF-α组的miR-145 mRNA水平下降(P<0.01);与TNF-α组相比,氯吡格雷组的miR-145 mRNA水平上升(P<0.01);与氯吡格雷组相比,miR-145抑制剂+氯吡格雷组的miR-145 mRNA水平下降(P<0.01).miR-145抑制剂对照组不影响CD40的水平;与DMSO组相比,TNF-α组的CD40 mRNA水平上升(P<0.01);与TNF-α组相比,氯吡格雷组的CD40 mRNA水平下降(P<0.01);与氯吡格雷组相比,miR-145 抑制剂+氯吡格雷组的CD40 mRNA水平上升(P<0.01).TNF-α组上清液中IL-6的水平高于DMSO组(P<0.01);氯吡格雷组中IL-6水平低于TNF-α组(P<0.01);miR-145抑制剂+氯吡格雷组IL-6的水平高于氯吡格雷组(P<0.01).结论 氯吡格雷通过抑制CD40的表达,诱导miR-145抑制VSMC细胞增殖并发挥消炎作用.
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miRNA-145与肿瘤的相关性研究进展
肿瘤的发生过程和多种因素有关,其中,基因表达的异常起着重要的作用.微小核糖核酸(microRNA,miRNA)在真核生物体内广泛存在,且其与肿瘤相关基因的表达调控密切相关.近年来,有研究表明miR-145在多种肿瘤中的表达较正常组织下调,提示miR-145可能作为一种肿瘤抑制基因调控肿瘤的发生过程,本文就miR-145与肿瘤的相关性进行了综合叙述.
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高糖及高胰岛素对人血管平滑肌细胞增殖、迁移及miR-145水平的影响
目的：探讨高血糖和高胰岛素对人miR-145水平的影响。方法将人血管平滑肌细胞（ VSMC ）分为正常组、高糖组（25 mmol／L）、高胰岛素组（300 mU／L）和高糖高胰岛素组，各组细胞培养72 h后，用real-time PCR测定各组VSMC中miR-145的水平；用四甲基偶氮唑盐（ MTT）法及细胞划痕法分别测定VSMC的增殖及迁移。miR-145病毒转染VSMC 48 h后，再分为上述4组，用上述方法测定病毒转染后VSMC的增殖与迁移。结果与正常组相比，其他3组miR-145水平均不同程度下降（ P＜0.05），尤以高糖高胰岛素组下降明显（ P＜0.01）；高糖及高胰岛素促进VSMC的增殖和迁移。 miR-145病毒转染后，各组VSMC的增殖和迁移均较转染前明显降低（P＜0.05）。结论高血糖及高胰岛素降低VSMC中miR-145的表达，miR-145的过表达可抑制VSMC的增殖和迁移。
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miR-145抑制人肝内胆管细胞癌细胞增殖
目的 研究miR-145调节人肝内胆管细胞癌(ICC)细胞增殖的机制.方法 收集标本ICC癌组织和癌旁胆管组织,共38对;2种ICC细胞系:HuCCT-1和RBE;对其进行miR-145及NUAK1的表达调控.通过RT-qPCR检测miR-145和新式激酶家族1(NUAK1)的表达及两者相关性;检测细胞周期观察细胞增殖变化;荧光素酶报告基因实验确认miR-145的靶基因;Western blot观察AKT通路蛋白水平变化.结果 miR-145在癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.05),NUAK1在癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),两者具有相关性(P<0.05).miR-145过表达组和NUAK1干扰组细胞计数均明显少于对照组(P<0.05);HuCCT-1细胞系转染miR-145 mimics后,G1期的细胞数明显增加(P<0.05);野生型的荧光信号明显被抑制(P<0.05);过表达miR-145或抑制NUAK1后,pAKT和pFOXO1表达明显下降(P<0.05).结论 miR-145可能通过抑制NUAK1及其下游通路抑制ICC细胞增殖,它有可能为ICC临床诊治提供新的靶点和思路.
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MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路的作用.方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物(mimics)组和negative-mimics组(miR-NC)以及antago miR-145组(抑制剂组)和antago miR control组(antago-NC),采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3 K/AKT通路的影响.此外,采用细胞外调节蛋白激酶(ERK)及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变.结果 miR-145 mimics组穿过细胞数(90.67 ±10.33)明显少于miR-NC组(175.33±23.67),miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数(153.33±22.33)少于miR-NC组(77.33±13.67),P＜0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组(P＜0.05),结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90％、78％以及73％的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115％、125％以及129％,而当抑制MAPK通路及PI3 K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降.结论 miR-145通过MAPK和PI3 K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭.
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miRNA-145对血管平滑肌细胞功能调节与心血管疾病研究进展
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)是血管壁主要细胞类型,在维持血管正常生理功能过程扮演重要角色,其在正常环境下是一种具有调节血管壁张力、维持血压等功能的高度分化型细胞(收缩型).在血管增殖性疾病的发展过程中,VSMC由分化型转化为具有合成和分泌多种基质蛋白能力的未分化型(合成型),导致自身肥大、血管内膜增厚、血管狭窄等病理结果,这些是形成高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的病理基础.近年来发现miRNAs参与心血管生理、病理过程的调控并且与VSMC密切相关,其中miR-145经证实是正常动脉壁表达为丰富的micoRNAs,其在VSMC功能调节中起着非常重要的作用,这可能为治疗高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病提供新的诊断、治疗依据.本文就miR-145对VSMC功能调节以及心血管疾病病理生理学意义作一综述.
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Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.
关键词： 乳腺肿瘤 微RNAs MiR-145 Transwell侵袭及迁移 -
低表达的microRNA-145对c-Myc表达的影响
目的:探讨microRNA(miR)-145是否通过调控c-Myc参与肝癌行为的调控.方法:实时定量PCR检测肝组织及细胞系miR-145表达水平:检测不同肝组织c-Myc的mRNA和蛋白表达量:通过转染上调miR-145在HepG2细胞表达后,检测转染前后空白组、实验组、阴性对照组HepG2中c-Myc的mRNA和蛋白表达量;应用流式细胞仪检测转染前后各组HepG2的凋亡情况.结果:miR-145 mRNA在正常肝组织中表达明显高于癌旁和肝癌组织(0.878±0.146 vs0.265±0.084,0.271±0.096,均P<0.05);癌旁和肝癌组织中miR-145 mRNA的表达量差别无统计学意义.miR-145 mRNA在LO-2中的表达明显高于HepG2(0.755±0.185 VS 0.471±0.074,P<0.05).c-Myc mRNA和蛋白在癌旁和肝癌中表达均高于正常肝组织(mRNA:0.136±0.071.0.451±0.026 VS 0.029±0.023;蛋白:0.301±0.022.0.445±0.018 vs 0.137±0.011,均P<0.05),且在肝癌组织中表达量较癌旁组织中明显升高(P<0.05).转染miR-145 mim-ics后空白组、实验组、阴性对照组c-MycmRNA表达差异无统计学意义;而相对于空白组和阴性对照组,实验组c-Myc蛋白表达量表达明显下降(0.146±0.011 vs 0.366±0.014,0.350±0.013.均P<0.05),空白组和阴性对照组之间差异无统计学意义.流式细胞术检测发现,在HepG2中上调miR-145的表达后,细胞的凋亡明显增多,实验组与空白组和阴性对照组之间有明显差异(3.000±0.100 vs 1.167±0.1 53,0.933±0.208,均P<0.05).结论:miR-145反向调节c-Myc的表达;表达下调的miR-145丧失对c-Myc的抑制可能是肝癌发生的重要机制;miR-145能够作为抑癌基因促进细胞凋亡.
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关键词：
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miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭
目的 探索microRNA145(miR-145)对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系.方法 选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力.Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况.结果 转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低(P＜0.05),c-Myc蛋白表达也明显较低(P＜0.05).结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力.总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点.
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miR-145对HepG2细胞中肿瘤干细胞增殖的影响
目的：探讨HepG2细胞中miR-145与肝癌干细胞之间的关系及可能的分子机制，为肝癌诊治探索一条新方法。方法分别以siRNA-NC-FAM和shRNA-GFP为转染物，倒置荧光显微镜下观察用脂质体Lipofectamine2000转染的效率，进行转染效率评价。结果中剂量的siRNAoligo转染HepG2细胞效果较好；各实验对照组相比，miR-145-5p模拟物转染组的miR-145表达明显上调；过表达miR-145抑制HepG2细胞生长；转染后48h模拟物转染组过表达的miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞标志物CD90mRNA的表达。结论以Lipofectamin2000为转染试剂，使用中剂量的siRNAoligo转染HepG2细胞效果优于低、高剂量，同时明显优于转染shRNA者；过表达miR-145可抑制HepG2细胞株增殖；miR-145可能通过下调OCT4基因表达抑制HepG2细胞株中肿瘤干细胞的增殖，是一种潜在的肝癌“保护性”miRNA。
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miR-145靶向调控Smad3对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
[目的]探讨miR-145靶向调控Smad3对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.[方法]骨髓间充质干细胞诱导分化0、 3、7、10、14d 后,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测 ALP 活性;Western blotting 检测 Runx2、osteopontin、Smad3 的蛋白表达;RT-PCR 检测 miR-145 的表达;miR-control、miR-145 mimics、anti-miR-control、miR-145 inhibitors及 pcDNA-control和pcDNA-Smad3转染hBMMSCs,并进行miR-NC+miR-145 mimics、Wt- Smad3+miR-145 mimics、Mut-Smad3+miR-143 mimics 3组共转染,检测ALP活性及Runx2.osteopontin、Smad3的蛋白表达.[结果]随着时间的延长,ALP活性及Runx2和osteopontin的蛋白表达升高,与0d比较差异具有统计学意义(P＜0.01);Smad3是miR-145的靶基因;随着时间延长miR-145的表达降低,而Smad3表达升高,与0 d比较差异具有统计学意义(P＜0.01); miR-145 inhibitors组ALP活性及Runx2和osteopontin的蛋白表达显著高于anti-miR-control, peDNA-Smad3组ALP活性及Runx2和osteopontin的蛋白表达显著高于pcDNA-control组(P＜ 0.01 ).[结论]miR-145可靶向调控Smad3促进入骨髓间充质干细胞的成骨分化.
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microRNA-145通过CD40对泡沫细胞免疫炎症反应的影响
目的 探讨microRNA(miR)-145通过CD40对泡沫细胞免疫炎症反应的影响.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,随机均分为模型组(不转染)、miR-145 mimics组(转染miR-145 mimics)、miR-145 inhibitor组(转染miR-145 inhibitor)、沉默CD40序列组(转染siCD40),转染6 h之后,用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h诱导形成泡沫细胞.应用real-time qPCR(RT-qPCR)和Western blot检测各组细胞中CD40 mRNA和蛋白的表达情况;ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果 与模型组相比,miR-145 mimics组CD40 mRNA、蛋白及IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平均明显下降(P<0.01);经miR-145抑制剂干预后,上述指标均较模型组和miR-145 mimics组升高(P<0.01);而转染沉默CD40序列后,CD40 mRNA、蛋白及IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平较miR-145抑制剂组均明显下降(P<0.01).结论 miR-145可通过靶基因CD40调控泡沫细胞免疫炎症过程,抑制CD40/CD40L信号通路活化,抑制炎症反应.
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宫颈鳞癌患者组织中miR-145的表达及意义
目的 探讨miR-145在宫颈上皮内瘤变III级(CINIII级)和宫颈鳞癌患者组织中的表达情况及与宫颈鳞癌发生之间的关系.方法 2010年11月-2011年8月在内蒙古医科大学第一附属医院提取49例宫颈鳞癌组织(宫颈癌组)、27例宫颈上皮内瘤变III级和2例原位癌(CINIII级组)、11例宫颈良性病变患者(健康对照组)组织中的miRNA,用实时定量PCR的方法分析miR-145在各组患者组织中的表达情况.结果 (1)宫颈鳞癌患者组织中miR-145的表达较健康对照组、CINIII级组降低(P＜0.05),miRNA-145在宫颈癌组织中的表达是CINIII级组的0.579倍,是健康对照组的0.521倍;(2)miR-145在宫颈鳞癌III~IV期与I~II期以及在宫颈鳞癌高、中分化与低分化组的表达均无明显差异(P>0.05).结论 miR-145在宫颈鳞癌组织中存在异常表达,提示其与宫颈鳞癌的发生及进展可能有关,值得进一步研究.
关键词： MiR-145 宫颈鳞癌 宫颈上皮内瘤变 实时荧光定量PCR法 -
miR-143及miR-145在肿瘤患者中表达的研究进展
microRNA 即miRNA是一类由内源基因编码的非编码单链RNA 分子,长度为18～25nt,它能在转录后水平抑制靶基因的表达或翻译.1993 年,Lee 等[1]在秀丽新小杆线虫中发现了第一个miRNA即lin-4, 2000年Reinhart 等[2]在线虫发育调控研究中发现了let-7, 从而拉开了miRNA 研究的序幕.至今提交并已认识的成熟miRNA序列(http://microrna.sangel.ac.Uk/)在生物体内有10 000多个miRNA,其中人类基因miRNAs有870个,并且这一数据还在不断扩大更新中.它们调控约1/3的人类基因.miRNAs在物种进化中相当保守,其在细胞生长和发育过程的调节过程起多种作用.实验证据表明,miRNA在多种肿瘤细胞及组织内表达水平发生异常性改变,包括表达上调和表达下调.这种表达改变在肿瘤发生发展中发挥着非常重要的作用,有些miRNA起着促进癌基因的作用,另一些则发挥着抑癌基因的作用.每种肿瘤基本上都有相对固定的miRNA表达谱,这种表达谱与肿瘤的预后密切相关.它们参与细胞增殖、分化、凋亡和代谢等重要的生物学过程[3].miRNA 表达水平的改变导致多种疾病(包括肿瘤)的发生[4].
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miR-145通过下调LRRFIP1抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移机制
目的:探究miR-145抑制血管平滑肌增殖和迁移的机制.方法:采用实时定量PCR检测血管平滑肌细胞miR-145的表达.采用mimics-miR-145转染血管平滑肌细胞,然后利用荧光素酶检测和Western blot检测miR-145在平滑肌细胞的增殖和迁移.结果:体外过表达miR-145,可抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移,反之,下调miR-145促进血管平滑肌细胞增殖和迁移.LRRFIP1与miR-145表达负相关,下调LRRFIP1可抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移.结论:miR-145可能通过下调LRRFIP1抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移.
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狼疮性肾炎患儿血管损伤中心肌素与 miR－145的表达情况及其临床意义研究
目的：观察狼疮性肾炎（ LN）患儿血管损伤中心肌素与miR－145的表达情况，并探讨二者在LN患儿血管损伤发生中的作用。方法选取2008年1月—2015年9月在湘雅二医院儿科住院的系统性红斑狼疮（ SLE）患儿中确诊为LN的患儿49例，均行肾活检，活检组织常规进行免疫荧光、光镜及电镜检查。依据国际肾脏病协会（ ISN）和肾脏病理学会（ RPS）2002—2003年联合修订的ISN／RPS 2003 LN分型标准进行病理分型，共分为Ⅱ型5例、Ⅲ型7例、Ⅲ＋Ⅴ型9例、Ⅳ型17例、Ⅳ＋Ⅴ型11例。以中膜比例评价血管损害程度，并分为轻度14例、中度19例、重度16例。依据KATAFUCHI等的评价方法对肾小球、肾间质损害进行半定量积分；采用双抗体夹心法测定血清心肌素水平；采用原位杂交法检测miR－145表达。结果不同病理分型患儿肾小球、肾间质损害积分间差异均有统计学意义（P＜0．05）。肾小球损害积分与肾间质损害积分呈直线正相关（r＝0．961， P＜0．01）。不同血管损害程度、病理分型患儿血清心肌素水平间差异均有统计学意义（P＜0．05）。不同血管损害程度、病理分型患儿肾内血管miR－145表达间差异均有统计学意义（P＜0．05）。血清心肌素水平与肾内血管miR－145表达呈直线正相关（r＝0．782， P＜0．01）；血清心肌素水平、肾内血管miR－145表达与血管损害程度呈直线负相关（ r值分别为－0．728、－0．790， P＜0．01）。结论随着血管损害程度的增加血清心肌素水平和肾内血管miR－145表达均降低，二者不仅可用于评估LN患儿肾内血管损害（ RVLs）程度，也可能是LN肾血管损伤治疗的新靶点。
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miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究
目的 探讨miR-145对PDGF-BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)的作用及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用.方法 体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR-NC组、PDGF-BB+miR-145组及PDGF-BB组.CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT-PCR方法检测PCNA、c-Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1/2和P-ERK1/2的表达、JNK和P-JNK的表达以及p38MAPK和p-p38MAPK的表达.结果 miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF-BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调.结论 miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖.
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miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系
目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量(P＜0.001),说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖(P＜0.01),同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型(CDK6-WT)会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达(P=0.002);Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.
