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miR-143靶向调控ER-α36影响胃癌细胞系SGC7901的侵袭
目的 探讨miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36介导人胃癌细胞系SGC7901的侵袭.方法 通过慢病毒载体的构建及包装生成上调/下调miR-143的慢病毒LV-miR-143 up和LV-miR-143 down并感染人胃癌细胞系SGC7901,用Western blot检测ER-α36的蛋白表达水平和细胞的侵袭能力;生物信息学软件预测miR-143的靶基因;荧光素酶报告基因实验验证靶基因.结果 LV-miR-143 up 与 LV-miR-143 down 慢病毒病毒颗粒分别感染人胃癌细胞系SGC7901,感染效率均在80%以上;上调miR-143,人胃癌细胞系SGC7901的ER-α36表达水平明显下降,侵袭能力明显降低(P<0.05),反之则增加.结论 miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36负向调控胃癌细胞SGC7901的侵袭.
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MicroRNA-143在急性白血病患者与正常人骨髓细胞中的差异表达及意义
microRNA(miR)与急性白血病的发生密切相关.为分析急性白血病患者与正常人骨髓细胞中miR-143的差异表达情况,常规提取50例急性白血病患者及20例正常人骨髓细胞中的总RNA,应用实时荧光定量PCR的方法检测标本中miR-143的表达状况.结果表明:急性白血病患者骨髓细胞中miR-143表达明显下调(p<0.05);化疗缓解后表达明显上调;miR-143的表达与靶基因DNMT3A呈负相关.结论:miR-143在白血病病人骨髓细胞中的表达下调,这可能与白血病的发生发展有关.
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miR-143在胰腺癌组织中的表达及临床意义
目的:探究miR-143在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织中的表达与临床参数、预后的相关性.方法:收集70例PDAC患者的癌组织及配对癌旁组织石蜡切片,应用锁定核酸原位杂交(locked nucleic acids-in situ hybridization,LNA-ISH)法检测组织中miR-143的表达水平,收集相关临床资料,并对患者的预后进行随访,采用SPSS16.0进行统计学分析.结果:PDAC癌组织中miR-143阳性表达率明显低于癌旁组织(25.71％ vs 68.57％,P=0.001),miR-143的表达与淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P=0.045).生存分析结果显示,miR-143阳性者的预后较好(P=0.026).结论:PDAC患者癌组织中miR-143呈低表达,且与不良预后相关.
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MiR-143促进心脏成纤维细胞增殖
目的 寻找调控心脏成纤维细胞增殖的microRNA.方法 微矩阵分析比较正常培养和经TGF β诱导的人成年心脏成纤维细胞microRNA表达谱,发现受TGF β调控的microRNA.Realtime PCR验证microRNA的表达改变.通过转染模拟物或antagomir,高表达或敲低miR-143表达,MTT实验观察对心脏成纤维细胞增殖的影响.结果 TGF β诱导心脏成纤维细胞中多个microRNA表达失调.MiR-143表达被TGF β特异性诱导上调,但不受AngⅡ、CTGF和TNFα的影响.高表达miR-143能够促进心脏成纤维细胞增殖10％左右,而敲低miR-143则显著抑制心脏成纤维细胞增殖.结论 MiR-143在心脏成纤维细胞中受TGF β信号通路调控,是心脏成纤维细胞增殖的调控因子.
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miR-143抑制胃癌细胞SGC7901增殖与迁移的机制研究
目的：探究微小核糖核酸（microRNA，miRNA）-143在胃癌细胞增殖与迁移中的作用与机制。方法：三对肿瘤组织及配对正常组织选自2015年1月至2015年5月天津医科大学肿瘤医院行胃癌根治术的患者，所有患者术前均未予任何放化疗，肿瘤组织病理检测证实均为中分化胃腺癌，癌旁正常组织未见癌细胞浸润。采用Western blot检测胃癌、癌旁正常组织和SGC7901胃癌细胞中鸟成红细胞增多症癌基因-3（avian erythroblastosis oncogene B-3，ERBB3）的蛋白表达水平，逆转录定量聚合酶链式反应（reverse transcription quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测ERBB3 mRNA和miR-143的表达水平，生物信息学软件预测miR-143的靶基因，荧光素酶报告基因实验验证靶基因，Transwell迁移实验和EdU增殖实验分别检测用miR-143 mimics/inhibitor/NC mimics/inhibitor转染SGC7901细胞后对其迁移和增殖能力的影响。结果：与癌旁正常组织相比，胃癌组织ERBB3蛋白表达水平明显上升，mRNA水平升高差异远不及蛋白显著，miR-143表达水平显著下降；生物信息学软件预测ERBB3 mRNA的3'非翻译区（untranslated regions，UTR）有1个miR-143的结合位点，荧光素酶报告基因实验证实靶点存在；体外实验通过细胞转染上调miR-143后ERBB3蛋白表达水平明显下降，而下调miR-143后明显升高；Transwell迁移实验和EdU增殖实验分别显示miR-143过表达后细胞迁移和增殖能力显著减弱，而下调miR-143后显著增强。结论：miR-143可通过抑制ERBB3的表达抑制胃癌细胞的增殖与迁移。
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miR-143及miR-145在肿瘤患者中表达的研究进展
microRNA 即miRNA是一类由内源基因编码的非编码单链RNA 分子,长度为18～25nt,它能在转录后水平抑制靶基因的表达或翻译.1993 年,Lee 等[1]在秀丽新小杆线虫中发现了第一个miRNA即lin-4, 2000年Reinhart 等[2]在线虫发育调控研究中发现了let-7, 从而拉开了miRNA 研究的序幕.至今提交并已认识的成熟miRNA序列(http://microrna.sangel.ac.Uk/)在生物体内有10 000多个miRNA,其中人类基因miRNAs有870个,并且这一数据还在不断扩大更新中.它们调控约1/3的人类基因.miRNAs在物种进化中相当保守,其在细胞生长和发育过程的调节过程起多种作用.实验证据表明,miRNA在多种肿瘤细胞及组织内表达水平发生异常性改变,包括表达上调和表达下调.这种表达改变在肿瘤发生发展中发挥着非常重要的作用,有些miRNA起着促进癌基因的作用,另一些则发挥着抑癌基因的作用.每种肿瘤基本上都有相对固定的miRNA表达谱,这种表达谱与肿瘤的预后密切相关.它们参与细胞增殖、分化、凋亡和代谢等重要的生物学过程[3].miRNA 表达水平的改变导致多种疾病(包括肿瘤)的发生[4].
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手足口病特异性微小RNA-143靶基因预测和生物信息学分析
目的:通过对手足口病特异性微小RNA-143(miR-143)潜在靶基因预测及生物学分析,探究其在手足口病发生中可能的机制.方法:应用多个的靶基因预测软件搜集miR-143潜在靶基因,取预测结果的交集进一步进行基因功能注释(Gene ontology,G0)和生物通路富集分析(Pathway enrichment).结果:miRBase、miRDB、RNA22、Targetscan、miRNA.org、TarBase、Targetminer、miRTarBase共7个靶基因预测软件中取1160个交集后的基因,GO分析及KEGG分析发现miR-143靶基因功能主要富集于MAPK信号通路、Wnt信号转导通路、癌症相关的信号通路等信号通路中及在调节细胞进程、蛋白装配、核酸结合等生物学功能中发挥作用.结论miR-143可能通过调节不同的靶基因及信号通路在手足口病中发挥作用,具体分子机制尚待进一步实验证实.
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脑胶质瘤中miR-143对MACC1表达的调控作用
目的 探讨脑胶质瘤中miR-143对MACC1基因表达的调控作用.方法 实时定量PCR检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-143与MACC1基因的表达.将miR-143的前体pre-miR-143和抑制物anti-miR-143分别转染脑胶质瘤U87细胞,Westernblot检测MACC1蛋白的表达.荧光素酶报告基因分析验证miR-143与MACC1基因3 ' UTR的结合.结果 与癌旁组织相比,miR-143与MACC1的表达在脑胶质瘤组织中分别呈现显著的下调和上调,且二者的表达呈显著负相关.转染后pre-miR-143和anti-miR-143能够分别下调和上调脑胶质瘤U87细胞中MACC1蛋白的表达.荧光素酶报告基因分析证实miR-143能够与MACC1基因3 ’ UTR结合.结论 miR-143与MACC1基因的表达改变与脑胶质瘤相关,miR-143能够靶向负性调节MACC1基因的表达.
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miR-143调控PAN3蛋白的表达对B细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响
目的:探讨miR-143调控PAN3蛋白的表达对B细胞淋巴瘤细胞侵袭和迁移的影响.方法:运用qPCR实验检测miR-143在正常骨髓组织和淋巴瘤血液组织中的表达情况;检测在不同种类的细胞株中miR-143的表达水平;qPCR检测miR-143对PAN3的表达水平的影响;双荧光素酶实验检测miR-143和PAN3之间的相互关系;划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-143表达对B细胞淋巴瘤E6-1细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:和正常骨髓组织相比,miR-143在B细胞淋巴瘤中表达明显下调;选取miR-143表达水平较低的E6-1细胞株;双荧光素酶实验表明miR-143可以下调PAN3的表达水平,直接影响PAN3的表达活性;过表达miR-143后,E6-1细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,抑制E6-1细胞的侵袭转移能力.结论:miR-143可以通过调控PAN3的表达,从而调节B细胞淋巴瘤细胞的迁移和侵袭行为.
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miR-143在人膀胱癌细胞中的作用及机制
目的:microRNAs (miRNAs)的异常表达与多种疾病密切相关,并有可能用于肿瘤治疗.本研究探讨了miR-143在人膀胱癌细胞中的作用及机制,为膀胱癌的临床诊治提供参考.方法:采用体外培养的T24细胞株为研究对象,按照处理方式分为空白对照组(T24)、阴性对照组(NC)、miRNA-143转染组(miR-143)以及si-COX-2转染组(si-COX-2).3H-thymidine法和Transwell趋化实验检测T24细胞增殖和迁移能力,免疫印迹法检测COX-2蛋白表达变化.结果:miR-143和si-COX-2转染T24细胞48h-72h后,细胞增值能力较正常T24细胞相比下降36％-49％(P＜ 0.01),迁移能力下降81％.免疫印迹结果表明,si-COX-2或miR-143转染的T24细胞内源性COX-2表达水平显著减少至正常T24细胞表达水平的0.39和0.31倍(P＜0.01).结论:miR-143可降低膀胱癌T24细胞增值力和侵袭力,并抑制COX-2表达.miR-143可能通过COX-2通路发挥对膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭的抑制作用.研究结果更加明确了microRNA在癌症中的功能,提示miR-143可作为膀胱癌的治疗候选药物.本研究为探索肿瘤生物标志物和治疗提供新的启示.
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miR-143通过靶向FASN抑制肝癌HepG2细胞脂质形成
目的 研究miR-143对肝癌HepG2细胞脂质形成的影响及其分子机制.方法 应用qRT-PCR方法检测miR-143在临床肝癌和癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达.通过油红O染色实验检测miR-143对肝癌细胞脂质形成的影响.Western blotting检测miR-143对肝癌细胞中脂肪酸合成酶(FASN)表达的影响.通过报告基因实验检测miR-143及其抑制子对报告基因载体FASN-CDS活性的影响.结果 qRT-PCR结果表明在临床肝癌组织和HepG2细胞中miR-143的表达显著低于癌旁组织和Chang liver肝细胞系(P＜0.01).油红O染色实验结果显示,miR-143能显著降低肝癌细胞中脂质的形成.qRT-PCR和Westernblotting结果证实,miR-143可以显著下降FASN的mRNA和蛋白表达水平.报告基因检测结果表明,在HepG2细胞中miR-143可以显著降低FASN-CDS报告基因的活性(P＜0.01);相反,miR-143抑制子可以显著升高FASN-CDS的活性(P＜0.01).在HepG2细胞中miR-143抑制子可以上调FASN的表达并促进脂质形成.结论 miR-143可以通过抑制FASN的表达阻碍肝癌细胞脂质形成.
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miR－143和miR－145在胃癌中的表达和临床意义
目的：探讨胃癌组织中miR－143、miR－145的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法采用Real－time PCR法检测miR－143、miR－145在胃癌组织中的表达，分析miR－143和miR－145的表达与胃癌临床分期、分级的关系。结果 Real－time PCR法检测提示miR－143和miR－145在胃癌组织中较癌旁组织中表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。 miR－143和miR－145的低表达与临床分期、有无淋巴结转移及分化程度有关，2种miR的表达与年龄、性别无关。胃癌组织中miR－143、miR－145表达呈正相关（ r＝0．792，P＜0．05）。结论 miR－143和miR－145在胃癌中明显低表达，可能与胃癌的发生密切相关。
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miR-143在宫颈癌组织中表达及临床意义的初步研究
目的 微小RNA(microRNAs,miRNAs)为一类小分子单链非编码RNA,具有癌基因或抑癌基因的作用.miR-143可抑制癌细胞的增殖.文中探讨miR-143在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌临床病理特征之间的关系. 方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR,RT-PCR)检测30例正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织及宫颈癌组织中miR-143的表达水平,探讨miR-143的表达与宫颈癌临床病理特征之间的关系. 结果 miR-143在正常宫颈组织、CIN组织和宫颈鳞状细胞癌组织中的相对表达量分别为1.02 ±0.15、0.93±0.17和0.32±0.23,三者比较差异有统计学意义(F=122.097,P＜0.05).用LSD统计方法对其进行两两比较,发现正常宫颈组织和CIN组织比较差异无统计学意义(P＞0.05);正常宫颈组织和CIN组织与宫颈鳞状细胞癌组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组织中miR-143的表达量在病理分级、淋巴结转移等方面比较的差异有统计学意义(P＜0.05);而在肿瘤直径、间质浸润深度、临床分期、年龄方面的比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 miR-143在宫颈鳞癌中低表达,miR-143表达水平的高低与组织病理分级和淋巴结转移有关.
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微小RNA-143在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞凋亡的影响
[目的]探讨微小RNA-143 (miR-143)在结直肠癌组织中的表达及临床意义,以及上调miR-143对于结直肠癌细胞凋亡的影响.[方法]采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription-PCR,real-time PCR)的方法在45例结直肠癌患者组织标本中检测miR-143的表达水平,结合病理资料分析其临床意义.HCT-116细胞转染miR-143 mimics后,用流式细胞术检测miR-143对凋亡的影响.[结果]miR-143在结肠癌组织中的相对表达量为0.48(0.24～0.91),在癌旁组织中的表达量为1.64(0.83～1.87),差异有统计学意义(P＜0.001),且在黏液癌患者中下调更明显(P＜0.05).流式细胞术检测发现,与对照组的细胞凋亡率(20.00％±2.00％)相比,实验组的细胞凋亡率升高至31.83％±2.02％,差异有统计学意义(P=0.002).[结论]miR-143在结直肠癌组织中低表达,并且与组织学类型有关;miR-143表达上调可促进HCT-116细胞凋亡;miR-143具有潜在抑癌作用.
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miR-143及其前体转录本在宫颈鳞癌组织中的表达
[目的]探讨miR-143及其前体转录本在宫颈鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系.[方法]采用Real-time PCR方法检测48例宫颈鳞癌及20例正常宫颈组织中miR-143的表达,分析miR-143与其前体转录本表达间的相关性,以及miR-143表达与宫颈鳞癌临床病理特征的关系.[结果]用Real-time PCR能有效检测miR-143及其前体转录本；miR-143及其前体转录本在宫颈鳞癌组织中的表达均显著低于正常宫颈组织(P＜0.05),Spearman相关分析显示,miR-143前体转录本表达和miR-143表达呈明显正相关(r=-0.723,P=0.000).不同组织分化程度的宫颈鳞癌miR-143表达存在显著差异(P=0.005),小细胞型宫颈癌的miR-143表达明显低于其他组织分化类型的标本.miR-143的表达在不同年龄、肿块大小、大体类型及FIGO分期间未见显著差异(P＞0.05).[结论]前体转录本减少是miR-143表达下调的重要原因.miR-143在宫颈鳞癌组织中的异常表达,可能在宫颈鳞癌的发生和发展过程中发挥重要作用,有望成为宫颈鳞癌新的预后指标及治疗靶点.
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子宫内膜异位症中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达
目的 探索子宫内膜异位症(EMs)中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达,以及不同月经周期的影响.方法 利用real time RT-PCR技术,比较miR-143、miR-145和miR-126在EMs患者在位内膜(EU,2例)、异位内膜(EC,14例)、配对EU+EC(14例),与非EMs患者内膜(EN,28例)中的表达差异;并分析EN和EC组不同月经周期对miR-143、miR-145和miR-126表达的影响.结果 不同月经周期的影响分析,发现仅EN标本中miR-143增生期表达量高于分泌期,差异有统计学意义(P＜0.05).与EN相比,miR-143和miR-145在EU中均表达上调(P＜0.05),miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调(P＜0.01).配对EU-EC中,miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调(P＜0.01).结论 miR-143、miR-145和miR-126在EMs中表达高于非EMs,在EC中表达高于EU.
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上调miR-143表达对CasKi人宫颈鳞癌细胞系增殖与凋亡的影响
目的 探讨miR-143对CasKi宫颈鳞癌细胞增殖与凋亡活性影响.方法 应用荧光定量RT-PCR法检测miR-143在人宫颈鳞癌组织中表达水平,以及miR-143在CasKi细胞株中表达水平与变化;人工合成miR-143模拟体转染CasKi宫颈鳞癌细胞系,采用流式细胞技术、MTT等实验方法探讨上调miR-143表达对CasKi癌细胞增殖活性与凋亡影响.结果 宫颈鳞癌组织与宫颈鳞癌细胞株CasKi中miR-143表达水平较正常宫颈组织明显下调,其中2例鳞癌组织未能检测出miR-143表达.miR-143 mimics转染组miR-143表达显著高于空白对照组;MTT检测结果表明miR-143 mimics转染组中细胞增殖抑制明显,且抑制效应自转染48 h开始显现.细胞周期检测结果显示miR-143 mimics转染组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-143表达可抑制宫颈鳞癌细胞增殖活性,影响宫颈鳞癌细胞周期和诱导宫颈鳞癌细胞凋亡.
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miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响
目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.
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miR-143调控DNMT3B表达对肝细胞癌耐阿霉素敏感性的影响
目的:构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,探讨miR-143在调控肝细胞癌耐阿霉素中的作用机制.方法:采用逐步递增阿霉素浓度法构建耐阿霉素细胞株SMMC-7721/ADM,评估其IC50值;采用荧光定量PCR技术检测miR-143、DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)、多耐药基因1(MDR1)变化、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;Western blotting检测DNMT3B蛋白表达;通过转染miR-143 mimics上调耐药细胞株SMMC-7721/ADM中miR-143表达水平后,检测耐药细胞IC50、侵袭能力、细胞凋亡、DNMT3B、MDR1变化.应用脂质体-2000瞬时转染miR-143 mimics于耐药细胞株,观察上述指标变化.结果:成功构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,IC50值升高78.97倍(P＜0.01),miR-143表达量降低,DNMT3B、MDR1、Bax、Bcl-2表达量升高(P＜0.05 ～P＜0.01).转染miR-143 mimics后耐药细胞株IC50值降低57％,侵袭能力下降,细胞凋亡增加,DNMT3B表达减少,MDR1 mRNA表达减少(P＜0.01).结论:miR-143可能通过降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性.
关键词： 肝肿瘤 阿霉素 miR-143 DNA甲基转移酶3b 耐药 -
miR-143在遗传性ob/ob肥胖小鼠脂肪组织中的表达
目的 观察miR-143在遗传性ob/ob肥胖小鼠与正常C57/BL6J小鼠内脏(附睾、肾周)脂肪和皮下脂肪中的表达差异,分析miR-143在肥胖及相关脂代谢紊乱发生中的作用.方法 1 6周龄ob/ob小鼠(肥胖组)与C57/BL6J小鼠(对照组)各12只,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测2组小鼠附睾、肾周及皮下脂肪组织中miR-143的表达水平并进行比较.结果 miR-143在肥胖组小鼠附睾、肾周脂肪组织中的表达水平(1.41±0.25、3.44±1.25)明显低于对照组(4.99±1.07、12.28±2.84)(P＜0.05),在皮下脂肪中的表达水平(6.49±2.72)与对照组(7.15±1.94)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR 143可能参与了ob/ob小鼠肥胖和脂质代谢紊乱的发生过程.
