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丹参红花提取物对鼠心脏成纤维细胞胶原合成的影响
目的:探讨丹参红花提取物(DCE)对血管升压素(AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞(CF)胶原合成作用的影响,为应用中成药防治高血压心肌纤维化提供理论依据.方法:运用3H-脯氨酸掺入法分别观察不同浓度和不同时间DCE对AVP诱导CF胶原合成的影响.结果:CF的3H-脯氨酸掺入率随着DCE干预浓度的增加而降低,其中100mg/L和200mg/L DCE组的3H-脯氨酸掺入率明显低于空白对照组,并具有统计学意义(P<0.01);随着DCE作用时间的延长,CF的3H-脯氨酸掺入率呈递减趋势,CF胶原合成功能与DCE作用时间呈明显的负相关.结论:DCE能够呈浓度和时间依赖性抑制AVP诱导的CF胶原合成功能,防治高血压心肌纤维化.
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丹皮酚与三七总皂苷配伍应用对血管紧张素Ⅱ诱导增殖的心脏成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的:探讨丹皮酚与三七总皂苷配伍应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导增殖的心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法:选取原代培养的乳鼠心脏成纤维细胞,随机分为6组,分别为空白组,模型组,丹皮酚(45 mg·L-1)组,三七总皂苷(50 mg·L-1)组,丹皮酚与三七总皂苷配伍的高、低剂量(丹皮酚45,30 mg·L-1+三七总皂苷50,30 mg·L-1)组.药物干预48 h,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原的mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,AngⅡ可刺激心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)的增殖,丹皮酚,三七总皂苷及其配伍的高、低剂量均可抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA及蛋白表达(P＜0.05),其中配伍组的抑制作用较优,且配伍高剂量作用时抑制效果更佳.结论:丹皮酚和三七总皂苷配伍组方可抑制血管紧张素Ⅱ诱导增殖的心脏成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达,显示明显的协同效应.
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姜黄素对心脏成纤维细胞增殖的研究
目的:探究姜黄素在AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞大量增殖和CTGF、PAl-1过表达中的影响,探讨姜黄素与心脏成纤维细胞增殖的关系.方法:心脏成纤维细胞原代的培养,分别用倒置显微镜及免疫组织化学法对原代心脏成纤维细胞进行监测,用MTT法测定不同浓度姜黄素(0～ 100 μmol/L)对心脏成纤维细胞活性的影响,用MTT法检测不同浓度姜黄素对心脏成纤维细胞增殖能力的影响,用real-time PCR检测CTGF、PAI-1 mRNA,用western-blot法分析不同浓度姜黄素时各组心脏成纤维细胞CTGF、PAI-1表达的影响.结果:在0～60μmol/L范围内,姜黄素未显示明显的细胞毒性,因此在后续试验中我们选择5、10、30 μmol/L浓度姜黄素进行试验,试验说明姜黄素可以有效的抑制AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖,并具有浓度依赖性,可以有效地抑制AngⅡ诱导的CTGF和PAI-1表达.结论:姜黄素能够有效地抑制AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞过度增殖和CTGF、PAI-1 mRNA与蛋白的过表达,从而起到抗增殖作用.
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槲皮素对大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌的干预作用
该研究采用LPS 100 μg·L-1联合ATP 5 mmol·L-1建立大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌模型,考察槲皮素对心脏成纤维细胞炎症因子TNF-α,IL-6及IL-1β分泌的抑制作用,并进一步采用Western blot考察槲皮素对p-NF-κB p65 (S276)及p-Akt(S473)蛋白表达的影响,探讨槲皮素抑制心脏成纤维细胞炎症分泌的作用机制.研究结果发现:①槲皮素51.74 ～827.81 μmol·L-1对大鼠心脏成纤维细胞活力无明显影响;②槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用36 h所致的TNF-α,IL-1β的水平升高(P＜0.01或P＜0.05);槲皮素82.78,41.39 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用36 h所致的IL-6的水平升高(P＜0.05),而槲皮素20.70 μmol·L-1未见明显影响;③槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP 5 mmol·L-1作用15 min所致的NF-κB p65(S276)激活,以20.70 μmol·L-1明显;槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用240 min所致的p-Akt(473)表达增加(P＜0.05).因此,该研究认为槲皮素可通过抑制NF-κB p65 (S276)和Akt(473)的激活而减少心脏成纤维细胞TNF-α,IL-6及IL-1β炎症因子的分泌.
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白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的实验研究
目的 观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(cFs)增殖的影响及其机制.方法 差速贴壁法培养新生大鼠cFs,在体外建立Ang Ⅱ诱导的cFs增殖模型.采用MTT法检测细胞增殖,分别观察一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)、鸟苷酸环化酶抑制剂(ODQ)及白藜芦醇对Ang Ⅱ诱导的cFs增殖的影响;采用心钠素(ANP)及脑钠素(BNP)mRNA表达检测细胞肥厚反应;放免法及ELISA法测细胞培养液中ANP及BNP水平;RT-PCR方法检测ANP、BNP mRNA表达;硝酸还原酶法测细胞培养液中一氧化氮(NO)水平;化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶(NOS)水平;放免法测定细胞内环磷酸鸟苷(cGMP)水平.结果 白藜芦醇25～100 μmol/L呈时间及剂量依赖性抑制Ang Ⅱ诱导的cFs增殖,但这种作用可被L-NAME及ODQ部分阻断.白藜芦醇作用细胞后NO、cGMP水平升高,ANP、BNP水平降低,ANP、BNP mRNA的表达下降.结论 白藜芦醇在一定浓度范围对Ang Ⅱ诱导的cFs增殖及细胞肥厚有抑制作用,上调NO-cGMP信号通路可能是其发挥作用的途径之一.
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醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞内皮素表达的影响
目的 探讨醛固酮(Ald)对新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)内皮素(ET)表达的影响.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠CFs,应用放射免疫法、免疫荧光检测法、RT-PCR方法分别测定不同条件下CFs培养液中ET水平和CFs中的ET-1含量以及ppET-1 mRNA的表达.结果 醛固酮(10-9、10-8和10-7 mol/L)可剂量依赖性地促进CFs ppET-1 mRNA的表达以及ET·I的合成和分泌,同时醛固酮(10-7 mol/L)以时间依赖的方式促进CFs ppET-1 mRNA的表达,在作用2 h后表达开始增加,4 h达高峰,以后逐渐降低.提前给予螺内酯(10-6 mol/L)能抑制醛固酮(10-7 mol/L)的上述作用.结论 醛固酮能促使CFs ppET-1 mRNA的表达以及ET-1的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导.
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阿司匹林抑制内皮素-1诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖
目的 探讨阿司匹林(aspirin)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的干预作用及可能机制.方法 经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为7组:对照组、ET-1组、阿司匹林组、ET-1+阿司匹林1、2、5和10 mmol/L组.用四氮唑盐(MTT)法测定CFs数目,流式细胞仪检测CFs细胞周期,液体闪烁计数仪测定CFs[~3H]-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO含量.结果 与对照组相比,10~(-7)mol/L ET-1能显著促CFs增殖及[~3H]-脯氨酸掺入率,降低CFs生成NO_2~-/NO_3~-的量(均P<0.01),1～10 mmol/L阿司匹林呈浓度依赖性地缓解上述变化(均P<0.05);ET-1能显著提高S期细胞百分率(P<0.01),10 mmol/L阿司匹林抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升(P<0.01).结论 阿司匹林抑制ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成,可能和NO生成有关.
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奥帕曲拉抑制内皮素-1诱导新生大鼠心肌细胞肥大
许多研究证明心力衰竭及心肌缺血时循环中的内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)的浓度升高,终导致心肌细胞肥大以及心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成[1-2].本实验室曾报道奥帕曲拉(Omapatrilat,OMA)呈浓度依赖性抑制ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成,此作用部分通过B2受体介导[2],但OMA对心肌肥大及其机制目前尚未见报道.本研究探讨OMA抗心肌肥大的作用及其是否与NO/cGMP及PKC调控有关.
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醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞内皮素A型受体表达的影响
醛固酮(aldosterone,Aid)能促进心脏成纤维细胞(cardi-ac fibroblasts,CFs)合成和分泌内皮素[1],通过与内皮素A型受体(endothelin subtype A receptor,ET-AR)结合对心肌纤维化起重要作用.但Ald干预下CFs ET-AR表达的变化及其机制尚不清楚.本实验观察Ald对CFs ET-AR mRNA和蛋白表达的调控作用,阐述Ald在心脏局部的作用.
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新生大鼠心脏成纤维细胞体外分裂方式
目的 观察体外培养状态下心脏成纤维细胞(CFs)的形态特征和分裂增殖方式.方法 原代培养新生大鼠CFs,免疫荧光双标法分别检测波形蛋白和磷酸化组蛋白H3(H3P)共表达,波形蛋白和微管蛋白共表达.利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处于不同分裂期的细胞时相.结果 CFs 0.5 ～ 1h贴壁,培养2～3 d细胞增殖旺盛,大量细胞进入有丝分裂期,其中多数CFs先隆起变圆,而少数则仍维持扁平状进行分裂.偶见无丝分裂现象.圆隆型有丝分裂时长为20～ 30min,扁平型分裂时长为40 ～ 50min.分裂前期胞核形状规则,H3P开始表达;前中期核膜破裂,纺锤体形成;中期染色体排列在赤道面,H3P高表达,纺锤体呈典型纺锤样;后期染色单体分开并移向两极,H3P在染色单体上持续表达;末期两个子核形成,微管聚集在两子核之间;胞质分裂期,两个子细胞形成,H3P不表达.结论 体外培养的CFs存在圆隆型和扁平型两种有丝分裂形态,在分裂方式上存在有丝分裂和无丝分裂两种形式.
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心脏成纤维细胞生物表型多样性
目的 探讨心脏成纤维细胞(CFs) 生物表型多样性.方法 新生1～3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin) 、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1) 和盘状结构域受体(DDR2) 的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况.结果 酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高. Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达.部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog + /CD73 + 共表达阳性率高(59. 02％ ± 8. 39％) ,与其他3组相比差异均有极显著性(P＜0.01);而nanog + /CD90 + 共表达阳性率与nanog + /sca-1 + 之间差异无显著性(P＞0.05) ,但这两组与CD90 + /sca-1 + 相比差异均有极显著性(P＜0.01);CD90 + /sca-1 + 共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P＜0.01).结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性.
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血管紧张素(1～7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶的关系
目的探讨血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶(CaN)的关系.方法分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期,发色底物法测定细胞内CaN的活性.结果 (1)10-7 mol/L AVP干预24 h后,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较对照组(0.14±0.01)明显增高(P<0.01);给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7)和AVP共同干预后,CFs的吸光度值呈递减趋势,分别为0.22±0.01、0.21±0.01、0.18±0.01和0.16±0.01,均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(2)AVP刺激后, CFs 的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(分别为5.4±0.7和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);10-7 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同作用后S期百分率(8.5±0.7)和增殖指数(16.2±2.0)较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(3)AVP组CFs内CaN活性(0.27±0.02 kU/mg)较对照组(0.12±0.01)kU/mg明显增加(P<0.01),给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同干预后,CaN活性分别为0.25±0.01、0.20±0.02、0.17±0.01和0.15±0.02(kU/mg),均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ang(1～7)能抑制AVP诱导CFs增殖,CaN活性降低可能是其分子生物学机制之一.
关键词： 血管紧张素(1～7) 血管加压素 心脏成纤维细胞 钙调神经磷酸酶 增殖 -
糜酶介导心脏成纤维细胞增殖中转化生长因子β1的作用
目的 探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与转化生长因子β1(TGF-β1)信号的关系.方法 用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs.采用四氮唑盐(MTT)比色法(A4go值)测定细胞数目,[3H]脱氧胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定CFs的DNA合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1的mRNA表达水平.结果 糜酶以剂量依赖方式增加CFs数目与DNA合成速率.15、30和60 ng/mL糜酶组的A490值分别为0.263±0.033、0.348±0.031和0.387±O.026,均明显高于对照组的A490值(O.201±0.019,P
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白细胞介素10对血管升压素诱导心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的研究白细胞介素10(IL-10)对血管升压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖,流式细胞仪技术(FCM)测定细胞周期,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平.结果 (1)10-7 mol/L AVP作用24 h,CFs的吸光度(A490)为0.216±0.013,较对照组(0.132±0.006)显著增加(P<0.01).(2)IL-10呈浓度依赖性下调 AVP诱导的CFs的A490的增加,其10-8 g/mL IL-10干预组 CFs的A490(0.157±0.029)较AVP组显著降低(P<0.01).(3)AVP组CFs的S期百分率及增殖指数(12.30±0.71, 19.58±0.88)较对照组(4.22±0.48, 7.12±0.62)显著增加(P<0.01);而10-9 g/mL IL-10干预组,CFs的S期百分率及增殖指数(9.56±1.13, 13.86±1.28)较AVP组显著降低(P<0.01).(4)AVP组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平(1.45±0.06, 1.06±0.06)较对照组(1.03±0.05, 0.77±0.05)显著增加(P<0.01).而IL-10可浓度依赖性的下调AVP诱导的CFs的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其10-8 g/mL IL-10干预组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平(1.14±0.06, 0.88±0.02)显著低于AVP组(P<0.01).结论 IL-10具有抑制AVP诱导CFs增殖和胶原合成的作用,这可能对预防和逆转心脏重构有一定的价值.
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心钠素及内皮素对心肌细胞肥大及心脏成纤维细胞增殖的影响
目的观察心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的调节作用.方法采用体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的 ET-1、ANP单独或联合作用细胞24 h,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白合成,Bradford法测细胞总蛋白含量,RT-PCR法测心肌细胞心钠素ANP mRNA的表达,评价ET-1、ANP对心肌细胞和成纤维细胞的作用.结果对于心肌细胞,ET-1显著促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,呈剂量依赖性,ANP mRNA表达明显增加;对于心脏成纤维细胞,ET-1促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,以上作用可被ANP明显抑制.结论ET-1促进ANP分泌的同时也促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ANP反之抑制ET-1的促心肌肥厚作用.
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转化生长因子β1/Smad通路调控糜酶诱导心脏成纤维细胞胶原合成
背景心脏肥大细胞的糜酶参与心肌纤维化,但其作用机制尚不清楚.目的 探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响及其与转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的关系.方法 用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs,采用3H脯氨酸掺入法测定CFs的胶原合成,Western blot检测TGF-β1、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)及总的Smad2/3的蛋白表达水平.结果 糜酶以浓度依赖方式增加CFs的3H脯氨酸掺入率.15、30和60μg/L组3H脯氨酸掺入率分别为(520±75)、(684±62)和(769±58)计数/(min·孔),均高于对照组[(435±60)计数/(min·孔),P<0.05或P<0.01].在30μg/L糜酶作用下,TGF-β1及P-Smad2/3蛋白表达水平呈时间依赖性改变,3、6和12 h组均高于对照组(P<0.05或P<0.01);而Smad2/3蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).TGF-β1中和抗体和p-Smad2/3抑制剂预处理组3H脯氨酸掺入率均低于30μg/L糜酶组(P<0.01).结论 糜酶具有促进CFs胶原合成的作用,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路的活化有关.
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钙调神经磷酸酶调控精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用
目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路对精氨酸升压素(AVP)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的调控作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs,MTT比色法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,CaN活性通过分光光度计测定.结果 (1)CFs的 MTT比色法吸光度A490值随着AVP作用浓度的升高而增加,其中10-7 mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组A490值(分别为0.17±0.01和0.18±0.01)与空白对照组(0.11±0.01)比较有显著差异(P<0.01);不同浓度的AVP+CsA组A490值均较相应的AVP组降低,其中10-7mol/L AVP+CsA组和10-6 mol/L AVP+CsA组分别为0.13±0.01和0.15±0.01,与10-7mol/L AVP和10-6 mol/L AVP组比较显著降低,并有统计学意义(P<0.01).(2)10-7mol /L AVP 作用下CFs细胞周期S期百分率为17.86 ±3.18,与空白对照组(12.10±2.38)比较明显升高,并有统计学意义(P<0.01).10-7mol /L AVP +CsA组CFs细胞周期S期百分率(13.76±2.52)与10-7mol /L AVP组比较有显著差异(P<0.05).(3)10-7 mol/L AVP组CFs的CaN活性为0.30±0.06 kU/mg,与对照组(0.14±0.03 kU/mg)比较差异显著(P<0.01).结论 CaN的特异性抑制剂环孢素A(CsA)可抑制AVP诱导的CFs增殖,AVP可升高CFs内CaN活性,表明CaN信号通路在AVP诱导CFs增殖过程中起到了重要的调控作用.
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盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系
目的研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮(PIO)对培养的自发性高血压大鼠(SHR)和试验大鼠(Wistar)心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与一氧化氮(NO)的关系.方法采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs,四氮唑蓝比色法(MTT)测定CFs的增殖状况,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度.结果 (1)1×10-7、1×10-6、5×10 -6、1×10 -5 mol/L的PIO作用24 h,SHR和Wistar的吸收值(A490值)分别为SHR 0.19±0.01、0.18±0.01、0.16±0.01、0.16±0.02;Wistar 0.21±0.01、0.19±0.01、0.18±0.01、0.17±0.01,与各自对照组(SHR 0.22±0.01,Wistar 0.21±0.02)相比,差异非常显著(P<0.01).(2)5×10 -6 mol/L的PIO作用12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h后,SHR的A490值与同一时间点相比,差异非常显著(P<0.001);Wistar的A490值与同一时间点的对照组相比,差异非常显著(P<0.001).(3)5×10 -6 mol/L的PIO干预48小时后,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为111.2±12.4 μmol/L、221.7±35.3 μmol/L,与各自对照组(76.8±2.4 μmol/L、112.1±8.9 μmol/L)相比,差异非常显著(P<0.001).结论 PIO能够抑制SHR的CFs增殖,其效应可能是通过上调NO的表达来实现的.
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V1受体拮抗剂对精氨酸升压素诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响
目的探讨V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP对精氨酸升压素(AVP)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响. 方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏成纤维细胞(CFs),以3H-TdR掺入法测定CFs的DNA合成功能,MTT比色法测定CFs数目,并应用流式细胞仪进行CFs细胞周期分析. 结果①CFs的3H-TdR掺入率随着AVP干预浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP和10-6mol/L AVP组每5000个细胞的3H-TdR掺入率分别为(243±61)cpm和(328±68)cpm,均明显高于对照组3H-TdR掺入率(117±32)cpm(P<0.01);②MTT比色法吸光度(A490 nm)值随AVP浓度的增加而增高,其中10-7mol/L AVP、10-6mol/L AVP组的A490 nm值分别为0.24±0.01和0.29±0.02,均较对照组A490 nm值(0.16±0.01)显著增高(P<0.01);③10-7mol/L AVP组CFs细胞周期S期百分率显著高于对照组(30.20±0.88)% vs (26.86±1.06)%( P<0.01);④10-7mol/L AVP+10-7 mol/L [d(CH2)5-Tyr2(Me)]AVP组的每5000个细胞的3H-TdR掺入率、MTT比色法A490 nm值和S期百分率分别为(143±40)cpm、0.17±0.01和(25.02±0.51)%,均显著低于10-7mol/L AVP组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01). 结论 AVP可诱导CFs的DNA合成功能增强和细胞数目增加,其作用可被V1受体拮抗剂[d(CH2)5-Tyr2(Me)] AVP所阻断,表明V1受体可能介导了AVP促CFs增殖效应.
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内皮素对心脏细胞DNA和蛋白合成的作用
目的观察内皮素-1(ET-1)对心脏心肌细胞和成纤维细胞DNA和蛋白合成作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心脏心肌细胞和成纤维细胞,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定两种细胞DNA、蛋白合成,Bradford法测两种细胞总蛋白含量,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)法测心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达.结果对于心肌细胞,ET-1(10-9～10-7mol/L)显著促进3H-TdR掺入率、较对照组分别增加0.31±0.079(P＜0.01)、1.193±0.267(P＜0.001)、1.336±0.278(P＜0.001),3H-Leu掺入率增加0.223±0.058(P＜0.01)、1.054±0.202(P＜0.001)、1.074±0.204(P＜0.001),呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于成纤维细胞,ET-1(10-8 mol/L)促进3H-TdR掺入率,较对照组增加0.248±0.02(P＜0.05)、3H-Leu掺入率较对照组增加0.434±0.041(P＜0.01).结论 ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,且对心肌细胞的作用强于对成纤维细胞的作用.提示ET-1促心肌肥厚主要使促进心肌细胞肥大,对间质纤维化作用较弱.
