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缓激肽在血管紧张素(1～7)保护血管内皮细胞中的作用
目的 观察缓激肽(BK)在血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤、凋亡中的影响及可能作用机制.方法 体外培养HUVECs,随机分为6组:对照组,AngⅡ组,Ang(1～7)组,AngⅡ+Ang(1～7)组,HOE-140组和AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组.采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)漏出,流式细胞仪技术检测细胞凋亡,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的含量,免疫组化法结合图像分析测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 (1)与对照组比较,AngⅡ(0.1 μmol/L)孵育细胞24 h后显著增加HUVECs的LDH漏出[(231.5±74.4 vs 76.6±19.4)U/L,P＜0.01]、ET-1分泌[(97.6±15.7 vs 48.8±9.3)pg/mL,P＜0.01]、ICAM-1表达[0.070±0.001 vs 0.041±0.003,P＜0.01]和HUVECs凋亡率[24.8%±0.6%vs 1.4%±0.6%,P＜0.01];Ang(1～7)(1 μmol/L)明显抑制了AngⅡ的上述作用,同时还促进HUVECsNO的释放;(2)缓激肽B2受体拮抗剂HOE-140(1 μmol/L)明显减弱Ang(1～7)对抗AngⅡ的作用(P＜0.01);(3)单用Ang(1～7)、HOE-140对HUVECs无明显影响.结论 Ang(1～7)能有效抑制AngⅡ引起的HUVECs的损伤和凋亡,其作用至少部分是通过BK B2受体介导的.
关键词： 血管紧张素(1～7) 血管紧张素Ⅱ缓激肽 人脐静脉内皮细胞 凋亡 -
血管紧张素(1～7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶的关系
目的探讨血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与钙调神经磷酸酶(CaN)的关系.方法分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期,发色底物法测定细胞内CaN的活性.结果 (1)10-7 mol/L AVP干预24 h后,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较对照组(0.14±0.01)明显增高(P<0.01);给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7)和AVP共同干预后,CFs的吸光度值呈递减趋势,分别为0.22±0.01、0.21±0.01、0.18±0.01和0.16±0.01,均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(2)AVP刺激后, CFs 的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(分别为5.4±0.7和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);10-7 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同作用后S期百分率(8.5±0.7)和增殖指数(16.2±2.0)较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).(3)AVP组CFs内CaN活性(0.27±0.02 kU/mg)较对照组(0.12±0.01)kU/mg明显增加(P<0.01),给予10-9～10-6 mol/L Ang(1～7) 和AVP共同干预后,CaN活性分别为0.25±0.01、0.20±0.02、0.17±0.01和0.15±0.02(kU/mg),均较AVP组降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ang(1～7)能抑制AVP诱导CFs增殖,CaN活性降低可能是其分子生物学机制之一.
关键词： 血管紧张素(1～7) 血管加压素 心脏成纤维细胞 钙调神经磷酸酶 增殖 -
血管紧张素(1-7)对颈动脉去外膜后内膜和中膜增生的影响
目的 研究血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对自发性高血压大鼠(SHR)一侧颈动脉外膜去除后血管内膜增生的影响.方法 13周龄雄性SHR 24只去除右侧颈动脉外膜后,随机分为3组(每组8只):SHR对照组、Ang(1～7)组(25 μg/kg·h)和Ang(1～7)拮抗剂(Ang 779)组(25 μg/kg·h);8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组(WKY组).机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜,左侧作假手术对照.采用微渗泵植入技术经颈静脉给药2周,鼠尾袖法测量尾动脉收缩压(SBP),放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)浓度.取双侧颈动脉制成光镜标本,病理图像分析系统测定颈动脉管腔横截面积(LA)、内弹力层围绕面积(IELA)、外弹力层围绕面积(EELA),评价内膜和中膜增生状况.免疫组织化学方法测定双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT 1R)蛋白、蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)和胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)蛋白表达.结果 Ang (1～7)明显降低SBP(P＜0.01),与SHR对照组和Ang 779组去外膜侧颈动脉内膜增生比较,Ang (1～7)明显改善因去外膜后引起的血管内膜增殖(P＜0.01).虽然Ang (1～7)未能减少去外膜后颈动脉壁的Ang Ⅱ浓度,但能明显降低颈动脉AT1R蛋白表达(P＜0.01)和减少因去外膜后引起的管壁PKC-ζ及ERK1/2蛋白表达(P＜0.01).结论 Ang(1～7)可显著抑制SHR去外膜后颈动脉的内膜增生,这一作用可能是其通过下调颈动脉AT 1R和减少PKC-ζ及ERK1/2蛋白表达而实现的.
关键词： 血管紧张素(1～7) 大鼠 颈动脉 外膜 血管紧张素Ⅱ1型受体 -
血管紧张素(1～7)类似物AVE0991抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大
目的 探讨新合成的血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]类似物AVE0991对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心肌肥大的抑制作用.方法 在Ang Ⅱ(10-6mol/L)诱导培养的SD乳鼠心肌细胞中,应用AVE0991及Ang(1～7)受体拮抗剂A-779等干预细胞,通过测定心肌细胞蛋白质合成速率,蛋白质含量和细胞表面积等指标,观察心肌细胞肥大情况;并利用RT-PCR及Western blot测定AVE0991对重要增殖信号通路转化生长因子(TGF)β1/Smad2的影响.结果 AVE0991呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导培养的心肌细胞的蛋白质合成速率,并能减少AngⅡ诱导培养的心肌细胞的蛋白质含量和表面积;AVE0991通过明显下调Ang Ⅱ诱导TGFβ1/Smad2信号通路的表达.但AVE0991的以上效应可被Ang(1～7)受体拮抗剂A-779完全抑制.结论 非肽类化合物AVE0991能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这一生物学效应可能与其抑制TGFβ1/Smad2信号通路有关.
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血管紧张素（1～7）舒血管机制的研究
目的 探讨血管紧张素(1～7)［Ang(1～7)］对血管功能的作用及机制。方法 应用生理多导仪测定存在和去除内皮后，血管对血管紧张素的反应；用钙敏感指示剂Fura-2/AM检测血管平滑肌细胞（VSMC）内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）；RT-PCR检测 VSMC血管紧张素受体（ATR）mRNA表达。结果 Ang(1～7) 明显抑制AngⅡ对动脉环的收缩作用，在内皮完整的动脉环比去除内皮的动脉环作用更明显；Ang(1～7)同样明显抑制AngⅡ诱导的VSMC ［Ca2+］i上升幅度；AngⅡ能下调AT1R mRNA,而Ang(1～7)上调AT1R mRNA，AngⅡ和Ang(1～7)对AT2R mRNA影响不明显。结论 Ang(1～7) 通过作用于血管内皮及VSMC内钙信号发挥抑制血管平滑肌收缩的作用。
关键词： 血管紧张素(1～7) 动脉环 血管平滑肌细胞 Ca2+ -
血管紧张素(1～7)对鼠系膜细胞和OK细胞增殖的影响
目的观察血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对自发性高血压大鼠(SHR)肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞(OK细胞)增殖的影响.方法采用体外培养的SHR肾小球系膜细胞和OK细胞,通过3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察这两种细胞对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及Ang(1～7)增殖变化.结果 (1)Ang Ⅱ对SHR肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞DNA合成的刺激作用,随着浓度的升高(10-10～10-6mol/L)作用加强,且呈剂量依赖关系,而浓度进一步升高到10-5mol/L时,作用反而减弱.(2)当培养液中同时加入Ang Ⅱ和 Ang(1～7)时,随着Ang(1～7)浓度的升高,抗Ang Ⅱ增殖作用逐步增强.(3)当培养液中同时加入Ang Ⅱ和血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利拉(Benazeprilat)时,随着Benazeprilat浓度的升高,抗Ang Ⅱ增殖作用逐步增强.结论 (1)AngⅡ能刺激自发性高血压大鼠肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞增殖; (2)Ang(1～7)和Benazeprilat能抑制AngⅡ引起的细胞增殖作用,对肾脏细胞可能有直接保护作用; (3)它们的抑制作用呈剂量依赖关系.
关键词： 血管紧张素(1～7) 苯那普利拉 系膜细胞 OK细胞 增殖 -
缓激肽在血管紧张素(1～7)抑制心脏成纤维细胞增殖中的作用
目的探讨缓激肽(BK)在血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及其可能机制.方法将差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为5组:对照组、AngⅡ组、Ang(1～7)组、AngⅡ+Ang(1～7)组和AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组.以3H胸腺嘧啶掺入反映细胞增殖情况,通过硝酸还原酶法测定NO含量,放射免疫分析法测定cGMP含量.结果(1)与对照组比,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞36 h后可明显诱导CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,[100%vs 51.8%±1.8%,P＜0.01].(2)Ang(1～7)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,其Ang(1～7)10-6mol/L可使3H胸腺嘧啶掺入下降至57.9%±2.1%(P＜0.01).(3)与对照组比,AngⅡ组的NO和cGMP含量显著降低(P＜0.01),而Ang(1～7)10-5mol/L可显著增加NO和cGMP的含量,与AngⅡ组比,分别上升至177.2%±6.9%、242.3%±19.1%(P＜0.01).(4)缓激肽β2受体阻断剂HOE-140 10-8mol/L明显减弱了Ang(1～7)抑制CFs增殖和促进CFs释放NO与cGMP的作用,AngⅡ+Ang(1～7)组与AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组比,57.9%±2.1%、177.2%±6.9%、242.3%±19.1%分别转变为88.9%±4.2%、125.7%±8.2%、162.2%±14.7%(P＜0.01).结论Ang(1～7)可能通过与BK相互作用促进NO和cGMP的产生,从而抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖.
关键词： 缓激肽 缓激肽β2受体 血管紧张素(1～7) 血管紧张素Ⅱ 心脏成纤维细胞增殖 -
血管紧张素(1～7)在心血管中的作用
血管紧张素(1～7)的G蛋白耦联受体Mas的发现对其有了更进一步的认识.心血管系统是血管紧张素(1～7)生成和作用的重要部位.血管紧张素(1～7)具有扩张血管、降压、抑制细胞增殖和抗凝血等效应,能拮抗血管紧张素Ⅱ等物质的生物活性.血管紧张素Ⅰ和血管紧张素Ⅱ经过特异的肽链内切酶变为血管紧张素(1～7).在此,就血管紧张素(1～7)的形成及在心血管中的作用予以综述.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 肾素血管紧张素系统 血管紧张素(1～7) -
血管紧张素(1～7)受体mas稳定转染细胞株的构建及mas激活对于ERK1/2信号通路的调节
背景:近几年有关mas基因与心血管疾病的关系成为研究的热点,但有关血管紧张素(1～7)-mas轴在调节心血管功能及在心血管疾病发病过程中发挥作用的信号转导途径还不甚清楚.目的:实验拟构建血管紧张素(1～7)受体mas稳定转染细胞株及mas基因表达和活化对ERK MAPK信号通路的影响.设计、时间及地点:重复测量设计,实验于2006-07/2008-03在首都医科大学生物化学与分子生物学实验室完成.材料:人mas全长cDNA,原核表达载体pEGFP C2,菌株E.coli DH5 α,COS-7细胞均由s本实验室保存.方法:将mas cDNA克隆到真核表达载体pEGFP C2中,构建重组质粒pEGFP-mas.再将重组质粒转染COS-7细胞,筛选稳定表达细胞株.主要观察指标:经血管紧张素(1～7)刺激后,检测稳定转染mas的COS-7细胞中ERK磷酸化水平变化.结果:与对照组相比,稳定转染mas的COS-7细胞经血管紧张素(1～7)刺激后,ERK磷酸化水平显著升高(P＜0.05).p-ERK水平在10 min内达到高值,并且随着血管紧张素(1～7)浓度的增加(10-12～10-6mol/L),P-ERK水平逐渐升高.结论:成功构建mas稳定表达细胞模型,并显示出血管紧张素(1～7)受体mas活化可以引起下游ERK1/2信号通路的激活.
关键词： mAs G蛋白偶联受体 血管紧张素(1～7) 组织构建 -
血管紧张素转换酶2-血管紧张素(1～7)/Mas轴与离子泵的关系
血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)-血管紧张素(angiotensin,Ang)(1～7)是目前公认的肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)中具有生物活性的部件之一.Ang(1～7)在RAS中发挥着重要的作用,而ACE的同族体ACE2也为Ang(1～7)的合成提供了代谢途径,这种酶可以将Ang 2转换成Ang(1～7),而G蛋白耦合受体Mas又为Ang(1～7)提供了功能性亲和位点.ACE2-Ang(1～7)-Mas轴属于RAS系统中的一个内生性正向调节通路,其对心血管及肾脏疾病中的离子泵的影响受到了广泛的关注.本文就ACE2-Ang (1～7)-Mas轴在心血管及肾脏疾病中离子泵的作用及其作用机制作一简要的综述.
关键词： 肾素-血管紧张素系统 血管紧张素转换酶 血管紧张素(1～7) 离子泵 -
血管紧张素转换酶2与动脉粥样硬化的关系
血管紧张素转换酶2是一种能够代谢多种肽类底物的多效单羧肽酶,其主要功能是水解血管紧张素Ⅱ生成血管紧张素(1～7).血管紧张素(1～7)具有舒张血管、保护内皮细胞等作用,这些作用可以抑制动脉粥样硬化病变.近年来,血管紧张素转换酶2在动脉粥样硬化中所起的作用成为研究的热点,并取得了一些成果.
关键词： 血管紧张素转换酶2 血管紧张素(1～7) 动脉粥样硬化
