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镉诱导OK细胞凋亡
镉在人体的半衰期长达20～30年,长期职业或环境接触可导致镉在人体组织的大量蓄积.镉在肾脏的蓄积,会影响肾近曲小管的功能,表现为低分子量蛋白质、氨基酸、钙、葡萄糖、尿酸、磷酸盐和酶等从尿中大量排出,以及肾近曲小管的酸化[1,2].这些损害已被大量研究所证实,同时开始从分子生物水平得到一定认识,镉致细胞凋亡就是其中一个方面.有研究表明镉在体外实验中可致人T细胞(T cellline)[3]、猪肾细胞(LLC-PK1 cells)[4]、转化人肾细胞(293cells)[5]发生凋亡,少量整体实验如大鼠肾近曲小管细胞发生凋亡[6].有些体外实验显示很低剂量的镉(10～20μmol/L)即可诱导细胞凋亡[4,5].凋亡是一种生理性的细胞死亡方式,具有特殊的生化和形态特征,许多哺乳动物细胞会发生凋亡[7].尽管凋亡可表现出很多特征性的细胞改变,如核固缩、DNA断片、特殊基因表达等,但是至今没有一项技术足以明确说明凋亡[8].末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记方法(TdT-mediated dUTP Nick-END Labelling,TUNEL)是一种凋亡检测方法,简单、精确、快速、无放射性,可在原位单个细胞水平或对细胞悬液进行检测.在该检测系统中,对凋亡细胞DNA断片用荧光标记,然后用荧光显微镜或流式细胞仪(flow cytometry)进行检测[8～10].本次实验使用TUNEL方法、DNA凝胶电泳和细胞形态改变来检测镉诱导的OK细胞(一种建立好的具有肾近曲小管特征的肾上皮细胞株)凋亡,以帮助进一步认识凋亡以及镉导致的肾近曲小管功能障碍.
关键词： 镉 凋亡 TUNEL方法 OK细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳 -
血管紧张素(1～7)对鼠系膜细胞和OK细胞增殖的影响
目的观察血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对自发性高血压大鼠(SHR)肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞(OK细胞)增殖的影响.方法采用体外培养的SHR肾小球系膜细胞和OK细胞,通过3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察这两种细胞对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及Ang(1～7)增殖变化.结果 (1)Ang Ⅱ对SHR肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞DNA合成的刺激作用,随着浓度的升高(10-10～10-6mol/L)作用加强,且呈剂量依赖关系,而浓度进一步升高到10-5mol/L时,作用反而减弱.(2)当培养液中同时加入Ang Ⅱ和 Ang(1～7)时,随着Ang(1～7)浓度的升高,抗Ang Ⅱ增殖作用逐步增强.(3)当培养液中同时加入Ang Ⅱ和血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利拉(Benazeprilat)时,随着Benazeprilat浓度的升高,抗Ang Ⅱ增殖作用逐步增强.结论 (1)AngⅡ能刺激自发性高血压大鼠肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞增殖; (2)Ang(1～7)和Benazeprilat能抑制AngⅡ引起的细胞增殖作用,对肾脏细胞可能有直接保护作用; (3)它们的抑制作用呈剂量依赖关系.
关键词： 血管紧张素(1～7) 苯那普利拉 系膜细胞 OK细胞 增殖 -
血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂阻断肾素-血管紧张素系统对肾脏的保护作用
目的本文探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)-苯那普利(benazeprilat)与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)氯沙坦(losartan)对肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体的作用.观察benazeprilat及ARB缬沙坦(valsartan)能否抑制由AngⅡ、血小板衍生生长因子(PDGF)引起的自发性高血压大鼠(SHR)肾小球系膜细胞的增殖与肥大.同时观察benazeprilat对负鼠肾小管OK细胞(OK细胞)增殖的影响.方法(1) SHR和正常血压大鼠(WKY)服用benazeprilat及losartan后,用RT-PCR方法测定大鼠肾皮质AT1 mRNA表达,并用同位素125Ⅰ-AngⅡ测定AT1受体密度.(2)采用经典SHR系膜细胞以及OK细胞培养技术,细胞中加入各种因子和(或)药物,以3H-leucine或3H-thymidine掺入后的cpm值反映蛋白或DNA合成.结果:(1)SHR喂服benazeprilat后肾脏AT1mRNA和AT1受体密度无明显变化,而喂服losartan后肾脏AT1mRNA和AT1受体密度则明显降低.(2)系膜细胞在AngⅡ刺激后引起的增殖与肥大,均可被valsartan及benazeprilat抑制.在同一浓度下,valsartan的作用较benazeprilat强.同时benazeprilat能够抑制OK细胞的增殖.结论:(1)ARB能够下调AngⅡ受体密度而ACEI则无此作用.(2)ARB在抗系膜细胞增殖与肥大作用稍强于ACEI.而ACEI同时能够抑制负鼠肾小管OK细胞的增殖.ACEI与ARB均对肾脏有保护作用.
关键词： 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 血管紧张素转换酶抑制剂 血管紧张素Ⅱ 系膜细胞 OK细胞 -
受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管细胞的表达及定位
目的检测肾小管细胞膜大分子糖蛋白受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管(OK)细胞的表达及亚细胞分布.方法采用Western印迹法、免疫荧光双标记法及免疫细胞化学双标记法.结果受体Megalin及Cubilin在分离的OK细胞膜上有表达,荧光双标记显示两种受体十分相似地分布在细胞周边部,电镜下,标记金颗粒的两种受体相近地分布在细胞顶部胞质的细胞内吞系统.结论两种受体在OK细胞上的分布特征与两种受体在体内肾近端小管小皮细胞的分布相似,提示OK细胞可成为研究两种受体介导可能的、未知的配体细胞内吞功能的有效细胞株,二者可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用.
关键词： megalin cubilin OK细胞 Western印记法 免疫细胞化学技术 -
受体megalin和cubilin介导白蛋白吸收的免疫组织化学研究
目的及方法采用免疫荧光双标记技术对培养的opossum肾(OK)细胞膜受体megalin和cubilin的表达及其与荧光标记的白蛋白摄取的关系进行研究.结果不同荧光标记的受体megalin及cubilin同时表达在相同的OK细胞上,分布主要局限在细胞膜,而且形式相似.被摄取的荧光标记的白蛋白点状分布在OK细胞内.此外,有受体megalin和cubilin表达的细胞就有白蛋白的摄取;反之,既不表达受体megalin和cubilin的细胞,也没有白蛋白的摄取.结论这种白蛋白的摄取与受体megalin和cubilin表达的特征提示,两种大分子糖蛋白受体megalin和cubilin与白蛋白的摄取有密切相关性,很可能在肾小管重吸收白蛋白中起到相互作用.
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受体Megalin和Cubilin在培养的Opossum肾近端小管细胞的表达
目的及方法采用Westem印迹法及免疫细胞化学双标记法检测肾近端小管培养的OK细胞株上受体megalin及cubilin的表达及分布.结果受体megalin及cubilin在分离的OK细胞膜上有所表达,并且,应用me-galin及cubilin抗体的免疫细胞化学双标记法显示,它们分布在细胞内顶部胞质的细胞内吞系统,包括微绒毛根部的有被小凹、胞内的有被吞饮小泡、大泡、溶酶体及参与细胞膜再循环的顶部致密小管.结论这一分布特征提示,两种大分子糖蛋白受体与肾近端小管上皮细胞受体介导的细胞内吞功能有关.由于其分布极其接近,很可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用.
