首页 > 文献资料
-
细胞内吞受体megalin 和cubilin在胚胎期小鼠肾的表达
目的 研究细胞内吞受体megalin和cubilin在胚胎发生发育小鼠肾的表达,及其与肾小管发生发育的相关性. 方法 采用免疫组织化学方法 检测不同胚龄小鼠肾(每组5只)megalin和cubilin的表达.同时,结合透射电镜观察肾近端小管与细胞内吞功能相关的细胞器的发育变化. 结果 胚龄9.5d时,megalin和cubilin表达于中肾管及中肾小管上皮细胞游离面.胚龄11d至18d,两受体表达于输尿管芽上皮细胞游离面,在S小体期肾小管近腔面呈弱阳性表达,肾小管胞内吞体及溶酶体少见,微绒毛稀疏.随着近髓肾单位细胞内吞体及微绒毛发育成熟,两受体表达局限于近端小管近腔面及刷状缘. 结论 megalin和cubilin 在胚胎肾发生发育中,从表达在分化早期所有小管近腔面胞质,到局限于成熟期近端小管游离面刷状缘,提示两受体协同重吸收功能是随着近端小管上皮细胞的发育而逐渐形成的.
-
RNAi沉默Megalin基因对尿白蛋白激活肾小管上皮细胞的影响
目的 探讨Megalin基因对尿白蛋白刺激肾小管上皮细胞(HK-2)后释放趋化因子的影响.方法 构建长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株,用尿白蛋白刺激此细胞株,检测对照组和干扰组细胞释放MCP-1、RANTES、Fractalkine等趋化因子的表达变化.结果 与对照组相比,干扰组MCP-1、Fractalkine的表达有显著性下降,RANTES的表达没有明显变化.结论 Megalin受体在介导肾小管上皮细胞白蛋白内吞的同时,能刺激趋化因子的释放;Megalin受体表达下调能显著抑制趋化因子的释放从而缓解炎症刺激.
-
剪切应力增加致肾小管上皮细胞megalin/cubilin mRNA表达的变化及效应
目的 检测剪切应力作用下肾小管上皮细胞megalin/cubilin mRNA表达的变化,探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期肾小管间质病变的发生机制.方法 应用流室系统(flow chamber)提供0.5、1 Pa(5、10dyn/cm2)的剪切应力处理培养的肾小管上皮细胞,分别作用1、3、6h后,用RT-PCR法检测megalin/cubilin mRNA的表达.结果 剪切应力以大小、时间依赖性的方式下调肾小管上皮细胞megalin/cubilin mRNA的表达.结论 DN早期流体剪切应力的增加可下调肾小管上皮细胞megalin/cubilin mRNA的表达,从而减少了肾小管对蛋白质的重吸收.表明DN早期微量白蛋白尿的发生可能与肾小管间质的早期损伤有关.
-
缬沙坦通过上调肾皮质Megalin的表达减少自发性高血压大鼠肾小管性蛋白尿
目的:研究缬沙坦是否可通过上调近端肾小管多配体的胞吞受体Megalin的表达,从而减少自发性高血压大鼠(SHR)肾小管性蛋白尿.方法:选取14周龄雄性SHR72只,随机分为3组,每组24只,分组:缬沙坦组(50 mg·kg-1·d-1,SHR-V);氨氯地平组(10 mg · kg-1·d-1,SHR-A);空白对照组(SHR).灌胃法给药7周,用药前后均测定血压.7周后处死大鼠,取出肾组织,免疫印迹法(WB)测定各组大鼠肾皮质中Megalin的表达含量.结果:SHR-V与SHR-A组降低系统性高血压的程度相当.SHR-V组降低白蛋白尿作用明显优于SHR-A组(P=0.01).SHR-V与SHR-A、SHR组比较,可以显著减少肾小管性蛋白尿,这与SHR-V组Megalin表达上调相关(135±28％).结论:血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦具有非血压依赖的肾脏保护作用,与肾皮质Megalin表达上调密切相关.此外,肾小管衰竭是高血压患者发生蛋白尿的重要机制之一.
-
糖尿病肾病早期白蛋白尿与Megalin的表达变化
目的:通过链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠Megalin的表达变化,了解糖尿病肾病时肾小管重吸收白蛋白的能力与Megalin的关系.方法:将SD大鼠分为正常对照组(N组)和糖尿病肾病组(DN组).DN组以55 mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射1%STZ,N组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液.在实验的2、4、6周分别处死两组的5只大鼠,并测量大鼠的血糖、24 h尿量、24 h尿白蛋白量、24 h尿肌酐浓度、血清肌酐和尿素氮、体重和肾脏重量,计算肌酐清除率和肾脏肥大指数,应用免疫组化和RT-PCR技术观察各组大鼠2、4、6周的肾小管Megalin表达.结果:第2周DN组的Megalin表达水平与N组相比有显著下降(P＜0.05),与第6周比较DN组Megalin表达逐渐降低,且有统计学差异(P＜0.05).结论:STZ腹腔注射所致大鼠糖尿病肾病的24 h白蛋白尿增加与肾小管近端的Megalin表达呈显著负相关关系.Megalin表达的降低不是一过性,也不能自行恢复,不加干预会随着病程延长而逐渐加重.
-
稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建
目的:为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具.方法:分别用30,50,80,100 nmol/L siRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48 h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一步鉴定正确的序列.得到长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,免疫组化鉴定干扰有效,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株.结果与结论:成功筛选出有效干扰人Megalin基因的siRNA,通过慢病毒感染成功获得长期稳定下调人Megalin表达的肾小管上皮细胞株.
-
受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管细胞的表达及定位
目的检测肾小管细胞膜大分子糖蛋白受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管(OK)细胞的表达及亚细胞分布.方法采用Western印迹法、免疫荧光双标记法及免疫细胞化学双标记法.结果受体Megalin及Cubilin在分离的OK细胞膜上有表达,荧光双标记显示两种受体十分相似地分布在细胞周边部,电镜下,标记金颗粒的两种受体相近地分布在细胞顶部胞质的细胞内吞系统.结论两种受体在OK细胞上的分布特征与两种受体在体内肾近端小管小皮细胞的分布相似,提示OK细胞可成为研究两种受体介导可能的、未知的配体细胞内吞功能的有效细胞株,二者可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用.
关键词： megalin cubilin OK细胞 Western印记法 免疫细胞化学技术 -
受体megalin和cubilin介导白蛋白吸收的免疫组织化学研究
目的及方法采用免疫荧光双标记技术对培养的opossum肾(OK)细胞膜受体megalin和cubilin的表达及其与荧光标记的白蛋白摄取的关系进行研究.结果不同荧光标记的受体megalin及cubilin同时表达在相同的OK细胞上,分布主要局限在细胞膜,而且形式相似.被摄取的荧光标记的白蛋白点状分布在OK细胞内.此外,有受体megalin和cubilin表达的细胞就有白蛋白的摄取;反之,既不表达受体megalin和cubilin的细胞,也没有白蛋白的摄取.结论这种白蛋白的摄取与受体megalin和cubilin表达的特征提示,两种大分子糖蛋白受体megalin和cubilin与白蛋白的摄取有密切相关性,很可能在肾小管重吸收白蛋白中起到相互作用.
-
受体Megalin和Cubilin在培养的Opossum肾近端小管细胞的表达
目的及方法采用Westem印迹法及免疫细胞化学双标记法检测肾近端小管培养的OK细胞株上受体megalin及cubilin的表达及分布.结果受体megalin及cubilin在分离的OK细胞膜上有所表达,并且,应用me-galin及cubilin抗体的免疫细胞化学双标记法显示,它们分布在细胞内顶部胞质的细胞内吞系统,包括微绒毛根部的有被小凹、胞内的有被吞饮小泡、大泡、溶酶体及参与细胞膜再循环的顶部致密小管.结论这一分布特征提示,两种大分子糖蛋白受体与肾近端小管上皮细胞受体介导的细胞内吞功能有关.由于其分布极其接近,很可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用.
-
Megalin在胚胎期小鼠肾脏中的表达
目的 观察胞吞受体megalin在胚胎发育不同时期小鼠肾脏中的表达.方法 采用免疫组织化学技术及体视学方法检测胚龄9.5、11、14、16、18d小鼠肾脏megalin的表达.结果 Megalin在胚龄9.5d小鼠表达于中肾管上皮细胞游离面,胚龄11d表达于输尿管芽的上皮细胞游离面,胚龄14d megalin表达量逐渐增多,主要分布于输尿管芽的壶腹部和发育中的肾近端小管上皮细胞游离面及较成熟的近端小管刷状缘.胚龄16d至胚龄18d megalin主要表逸于近端小管的刷状缘,肾小球内也有微量表达.结论 Megalin在胚胎肾发生中的表达存在着时空顺序,可能与肾小管,乃至肾单位的分化及成熟有关.
-
成人肾病综合征患者肾小管 megalin 表达变化及其可能机制探讨
目的：检测成人不同病理类型肾病综合征患者肾小管 Megalin 表达的差异，进一步探讨肾病综合征患者蛋白尿形成和肾小管损伤的发生机制。方法选取我院确诊为原发性肾病综合征患者62例，按照肾脏病理分为微小病变组（MCD）、膜性肾病组（MN）、局灶节段硬化组（FSGS）。收集各病例组临床资料以及血清、尿液等临床指标，包括患者病程、起效时间、ALB、BUN、Scr、CH、TG、HB、24小时尿蛋白定量等；应用免疫组织化学方法检测各病例组肾小管 megalm 的表达；各病例组行肾脏病理常规染色，并根据肾小管损伤标准进行肾小管-间质损伤程度评分。分析肾小管 megalin 表达量与临床和病理指标的相关关系。结果MCD 组肾小管 megalin 表达量与对照组比较无统计学差异，而 MN 组、FSGS 组肾小管 megalin 表达均显著低于 MCD 组和对照组，以 FSGS 组降低为显著。各病理类型亚组肾小管 megalin 的表达水平与临床指标无显著相关关系。全组肾病综合征、MCD 亚组、MN 亚组 megalin 的表达水平均与肾小管损伤评分存在负相关关系。结论某些病理类型肾病综合征患者肾小管 megalin 表达降低可能与蛋白尿毒性有关，megalin 表达的下降反过来可能参与这些患者的尿蛋白形成。
-
肾小管重吸收白蛋白的分子机制及病理意义
正常人体由于肾小球的有限滤过以及肾小管重吸收功能,尿液中的白蛋白(albumin,Alb)含量极为有限.但当免疫或非免疫因素损害肾小球滤过屏障或者肾小管功能发生障碍时,尿中Alb排泄量会显著增加.研究发现,肾小管间质病变进展速度与尿蛋白含量有关,降低尿蛋白可延缓肾脏疾病进展[1].Alb作为肾小球滤液中重要的一种蛋白质,可以激活肾小管上皮细胞内核转录因子κB(NF-κB),诱导炎性浸润、细胞凋亡以及间质纤维化,进而导致肾小管萎缩和肾功能减退[2].本文旨在对近来有关肾小管重吸收Alb的研究作一综述.
-
巨蛋白的研究进展
巨蛋白Megalin是一种多配体受体结合蛋白, 属低密度脂蛋白受体家族(Low density lipoprotein receptor,LDLR)成员 ,主要表达于肾小球足细胞及肾小管上皮细胞,能与多种配体结合,具有防止出现蛋白尿,维持机体维生素代谢平衡等生理功能.其分子上存在病理性抗原决定簇,参与Heymann肾炎的发生发展.
-
益气活血法对高糖损伤NRK-52E细胞摄取蛋白质的影响
目的:以黄芪丹参药对为代表考察益气活血法对高糖损伤肾小管上皮细胞(NRK62E)摄取蛋白质功能的影响.方法:MTT法考察黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞增殖的影响,荧光显微镜及荧光分光光度计分析NRK-52E对FITC-BSA的摄取作用,免疫组化观察megalin表达.结果:益气活血法能剂量依赖性地减少高糖引起NRK-52E细胞数减少;高糖能导致NRK-52E细胞对FITC-BSA摄取减少,megalin表达减少,益气活血法能改善NRK-52E细胞对FITC-BSA的摄取,增加megMin表达.结论:益气活血法能保护高糖损伤NRK-52E细胞,并且通过增加megalin表达,减少高糖对NRK-52E摄取蛋白质功能的损伤.
-
益气活血法改善糖尿病肾病大鼠肾小管重吸收功能的研究
目的:观察益气活血药对黄芪丹参对糖尿病肾病模型大鼠尿蛋白、肾功能、肾小管重吸收的影响,并探讨其机制.方法:采用链脲佐菌素单次大剂量(55 mg/kg)腹腔注射,诱导大鼠糖尿病肾病(DN),造模成功后随机分成模型组、益气活血组(黄芪和丹参注射液给药组)、格列喹酮组,同时设置正常对照组.于给药第6周尾静脉注射FITC-BSA,取各组大鼠的尿液检测24 h尿蛋白量,血液测定血糖、血清尿素氮、血清肌酐、血清甘油三酯及血清总胆固醇；取肾脏制成组织匀浆测定LPO、SOD、GSH-Px和高级糖基化终产物(AGEs),肾脏石蜡切片用于PAS、HE及免疫组化染色.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、24 h尿蛋白量、血清肌酐、血清尿素氮、血清甘油三酯、血清总胆固醇均显著增加,肾组织中LPO和AGEs的含量显著增加(P＜0.01),GSH-Px和SOD的活性显著下降(P＜0.05).益气活血药对可显著降低DN大鼠24 h尿蛋白量(P＜0.01),显著降低血清肌酐、血清尿素氮,血清甘油三酯和血清总胆固醇的水平(P＜0.05),并可以降低DN大鼠肾组织中LPO和AGEs的含量(P＜0.05),升高GSH-Px的活性(P＜0.05).肾脏切片染色结果显示益气活血药对可显著改善糖尿病肾脏肾小管的病变,并提高肾小管对FITC-BSA的重吸收能力.免疫组化结果表明黄苠丹参合用可以增加肾小管上皮细胞megalin表达.结论:益气活血法治疗可以改善糖尿病肾病大鼠肾小管的病变,减少蛋白尿,改善肾小管重吸收功能,其机制可能与增加肾脏组织的抗氧化活性,增加肾小管上皮细胞megalin表达有关.
-
高糖与切应力对肾小管上皮细胞megalin及cubilin表达的影响及其意义
目的 观察高糖与切应力对肾小管上皮细胞白蛋白受体megalin、cubilin表达的影响并探讨其意义.方法 链尿菌素(STZ)腹腔注射SD雄性大鼠制作糖尿病肾病(DN)模型,以健康SD雄性大鼠为对照.于第2、4、6周分别检测尿白蛋白量(24 h);免疫组化法检测各组肾脏megalin、cubilin蛋白的表达.将体外培养的肾近端小管上皮细胞(NRK-52E)分为空白对照组、甘露醇组、高糖组,并以平行板流室系统提供0.5、1.0 Pa的切应力处理各组NRK-52E细胞,分别作用1、3、6 h.以RT-PCR法检测各组细胞megalin、cubilin mRNA表达.结果 对照组肾脏megalin、cubilin蛋白表达水平高于相应时间点DN组(P＜0.05).肾脏megalin、cubilin表达水平与尿白蛋白量(24 h)呈负相关r=-0.832及-0.815,均P＜0.05).高糖抑制NRK-52E细胞megalin、cubilin mRNA的表达(P＜0.05).切应力加载抑制细胞megalin、cubilin mRNA的表达,其抑制作用比单纯高糖更明显,且与切应力大小及作用时间有关(P＜0.05).结论 DN早期高滤过导致滤出液对肾近端小管上皮细胞的切应力增加,其与高糖协同作用可下调细胞megalin、cubilin mRNA的表达,减少肾小管对白蛋白的重吸收,是DN早期微量白蛋白尿发生的机制之一.
