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LSAB法在视网膜母细胞瘤研究中的应用
免疫细胞化学技术是利用免疫反应定位细胞和组织中的抗原成分的一门技术,已经成为基础和临床研究的重要手段.自20世纪80年代Hsu[1]等创立了ABC法以来,免疫组织化学染色技术在全世界都得到了广泛的应用.该法需要预先形成复合物而导致自身体积增大,行动缓慢,难以很快形成对组织的渗透;由于含有糖基,易与组织中含糖基的组织起反应,造成背景的染色;由于等电点高,可带较多的负电荷,易与组织中带正电荷的组织发生吸引而造成背景染色[2].
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LCT与ICC结合在胸腹水细胞学鉴别诊断中的应用
目的:探讨液基薄层细胞检测(LCT)技术与免疫细胞化学(ICC)技术在胸腹水细胞学鉴别诊断中的意义.方法:在87例胸腹水液基细胞涂片中应用免疫细胞化学技术检测癌胚抗原(CEA)、上皮细胞膜抗原(EMA)、间皮细胞(MC)抗体及波形蛋白(Vimentin)的表达并与HE染色比较.结果:腺癌中CEA、EMA、MC、Vimentin阳性表达率分别为88.2%、90.2%、5.9%和3.9%.增生性间皮细胞中CEA、EMA、MC、Vimentin阳性表达率分别为5.6%、2.8%、97.2%和88.9%.结论:免疫细胞化学技术可应用于胸腹水LCT涂片.选择一组特异的抗体(CEA、EMA、MC、Vimentin)并结合脱落细胞HE染色可以在转移性腺癌与增生性间皮细胞的鉴别诊断中起重要作用.
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培养细胞免疫细胞化学技术的特点与临床应用
培养细胞免疫化学技术作为一种跨领域的研究手段,是将免疫细胞化学技术与细胞培养技术密切结合的技术,可获得单纯从体内实验难以达到的效果.培养细胞免疫组织化学技术与组织切片的免疫组织化学技术基本原理和操作是相同的,但又有许多要特别注意的细节.
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脱落细胞免疫细胞化学技术
在脱落细胞学诊断中免疫细胞化学技术是一项很重要的内容,随着新的抗体在识别抗原的特异性和多价性上日益完善,这项技术在临床病理诊断中的应用也越来越广泛.但在常规的脱落细胞学检查中,常因细胞涂片免疫细胞化学染色不够理想而未能充分展示出其应有的优势.因此,建立免疫细胞化学质控标准(质量保证和质量控制)对提高脱落细胞诊断准确率具有重要意义.本研究室接受了英国国际免疫组织化学质量评估中心的细胞学免疫组织化学技术评估,以下将我们的一些工作积累和参加评估学习过程中的一些体会介绍给大家.
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英国国家免疫细胞化学外部质量评估方案及其乳腺病理应用模式
免疫细胞化学的外部质量评估方案是1985年由Mount Veron医院的Gerry Reynolds提出并建立.其目的不仅在于独立地评估免疫组织化学染色质量,同时也帮助实验室发展和改进免疫细胞化学技术.
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腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠成体肝干细胞中的表达
目的:研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP的成体肝干细胞.方法:采用细菌同源重组法构建CMW驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP,在293细胞中包装制备腺病毒,并用重组腺病毒感染体外培养的成体肝干细胞WB-F344,观察腺病毒携带的外源基因EGFP在WB-F344细胞中的表达,及分析病毒对肝干细胞的感染效率.进一步单克隆培养纯化建立稳定表达EGFP的细胞株(WBEGFP),并采用流式细胞技术、免疫细胞化学技术、诱导分化实验以观察其生物学特性.结果:成功构建腺病毒载体,并包装制备高滴度的重组腺病毒Ad-EGFP.重组腺病毒有效的感染WB-F344细胞,感染率约40-70%.建立WB-EGFP细胞株,持续传代8-9代均较稳定表达EGFP及肝干细胞表面标记,仍保持干细胞样的增生、分化等基本生物学特性.结论:腺病毒可高水平的介导外源基因表达于成体肝干细胞,是有效的基因转移系统.稳定表达EGFP的肝干细胞株观察直观、可连续传代,并保持干细胞的生物学特性,可用于体内外肝细胞研究中的追踪、鉴定.
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受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管细胞的表达及定位
目的检测肾小管细胞膜大分子糖蛋白受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管(OK)细胞的表达及亚细胞分布.方法采用Western印迹法、免疫荧光双标记法及免疫细胞化学双标记法.结果受体Megalin及Cubilin在分离的OK细胞膜上有表达,荧光双标记显示两种受体十分相似地分布在细胞周边部,电镜下,标记金颗粒的两种受体相近地分布在细胞顶部胞质的细胞内吞系统.结论两种受体在OK细胞上的分布特征与两种受体在体内肾近端小管小皮细胞的分布相似,提示OK细胞可成为研究两种受体介导可能的、未知的配体细胞内吞功能的有效细胞株,二者可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用.
关键词: megalin cubilin OK细胞 Western印记法 免疫细胞化学技术 -
应用逆转录聚合酶链反应技术检测大肠癌微转移及其临床意义
大肠癌的转移和复发是影响病人预后的重要因素,而肿瘤细胞在淋巴结、外周血、骨髓和腹腔中的微转移则是导致转移和复发的主要原因.因此,及时发现微转移不仅对大肠癌复发和预后的判断有重要意义,而且对指导临床治疗亦有重要价值.由于微转移的肿瘤细胞数较少,现有的病理形态学及免疫细胞化学技术很难取得理想的检测结果.近年来,由于逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术的应用,大大提高了肿瘤微转移检测的敏感性和特异性[1].本文就RT-PCR技术检测大肠癌微转移的研究近况作一综述.
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免疫细胞化学染色技术在浆膜腔积液涂片中的应用
对应用免疫细胞化学染色技术检测浆膜腔积液中癌细胞的方法进行了探讨.并谈了个人的体会.
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细胞块石蜡切片联合免疫细胞化学技术在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用
目的:探讨浆膜腔积液细胞沉渣石蜡切片联合免疫细胞化学染色技术在浆膜腔积液细胞学病理诊断中的应用价值。方法:对126例浆膜腔积液标本进行常规涂片、液基细胞检查及沉渣石蜡包埋、切片,并进行免疫细胞化学染色,应用甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1, TTF-1)、天门冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)、人绒毛蛋白(Villin)、尾侧型同源转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2, CDX-2)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、Pax-8、肾母细胞瘤蛋白(Wilms’ tumor protein, WT-1)、GATA-3、钙视网膜蛋白(Calretinin)等多种抗体联合检测,结合临床资料及随访结果进行综合分析诊断。结果:126例浆膜腔积液中,常规涂片阳性检出率为25.4%(32/126),不确定率10.3%(13/126);液基细胞学检测阳性率27.0%(34/126),不确定率11.1%(14/126);沉渣石蜡切片联合免疫细胞化学检测阳性率提高到38.9%(49/126),不确定率4.0%(5/126);综合诊断阳性率38.9%(49/126),不确定率3.2%(4/126)。沉渣石蜡切片联合免疫细胞化学阳性率明显高于常规涂片及液基细胞学检测(均P<0.05);沉渣石蜡切片联合免疫细胞化学不确定率低于常规涂片及液基细胞学检测,但与常规涂片比较差异无统计学意义(P=0.05),与液基细胞学比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞沉渣石蜡切片联合免疫细胞化学技术能够提高浆膜腔积液的阳性检出率,降低诊断不确定率,并能明确肿瘤组织来源,具有一定的临床应用价值。
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免疫细胞化学染色和RT-PCR技术在胸腹腔积液检测中的应用
我们利用胸、腹腔积液制作成细胞块,并进行免疫细胞化学染色和实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测,效果良好,介绍如下.1 资料和方法1.1病例来源收集2010年~2011年在南京军区福州总医院临床送检的胸、腹腔积液细胞学肿瘤阳性病例11例,其中肺腺癌7例,肺大细胞癌1例,卵巢癌3例.所有病例均制作细胞块,行HE、免疫化学CEA、Vimentin、TTF-1、CK5/6、Ki-67、CKH、CKL、Calretinin、CD56、Syn、CgA染色,8例肺癌病例行RT-PCR检测.
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免疫细胞化学技术在疑难浆膜腔积液病理诊断中的价值
目的 分析并评价免疫细胞化学技术在疑难浆膜腔积液病理诊断中的应用价值.方法 采用2个具有细胞特异性的抗体癌胚抗原(carcinomoembryonic antigen,CEA)抗体和钙视网膜蛋白抗体对胸腹腔积液细胞标本进行标记,采用免疫细胞化学技术对60份复杂胸腹腔积液标本进行检测分析.结果 CEA抗体在恶性肿瘤细胞组中表达较高,其中32份CEA单阳性标本均为腺癌;间皮细胞组钙视网膜蛋白抗体表达高于恶性肿瘤细胞组(P<0.05),在18份钙视网膜蛋白抗体单阳性中4份为恶性间皮瘤,余14份为反应性间皮细胞;CEA与钙视网膜蛋白抗体均呈阳性者6份,其中反应性间皮细胞4份,腺癌细胞2份;4份标本2种抗体均呈阴性,其中腺癌与低分化鳞癌各2份.结论 将浆膜腔积液脱落的细胞制备成合适的琼脂块,选择CEA与钙视网膜蛋白抗体进行标记,在恶性肿瘤细胞的鉴别与诊断方面具有理想效果.
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012 环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ1基因表达的调控初探
目的: 探讨环核苷酸(cAMP/cGMP)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1基因表达调节中的作用, 为心肌肥大的防治提供一定的理论依据. 方法: 将Wistar乳鼠无血清培养24 h的心肌细胞分为对照组、 cAMP组(8-BromocAMP 0.1 mmol/L)、 cGMP组[加入一氧化氮(NO)的供体硝普钠1 mmol/L, 借此升高心肌细胞内cGMP浓度], 并在30min、 3 h、 24 h、 48 h、 72 h等5个时相点检测如下指标: (1) 细胞生长代谢活性(MTT法); (2) bFGF和TGFβ1的mRNA表达(原位杂交技术)及其蛋白表达水平(免疫细胞化学技术). 结果: (1) 与对照组比较cAMP组细胞代谢活跃程度增加, 尤以72 h明显(P<0.05); cGMP组细胞代谢受抑制, 尤以48 h明显(P<0.05). (2) 与对照组比较, cAMP组主要分布在心肌细胞浆及细胞膜的bFGF mRNA及其蛋白和主要分布在胞浆的TGFβ1蛋白水平表达均降低, 尤其在24 h(P<0.05)和48 h(P<0.01); cGMP组bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达水平均降低, 尤其在24 h(P<0.05). (3) 3H-leu掺入实验提示cAMP使细胞内RNA及蛋白质合成增加, 而cGMP可抑制细胞内RNA及蛋白质合成; 3H-TdR掺入实验提示cAMP和cGMP对培养的心肌细胞数量无显著影响(P<0.05). 结论: cAMP浓度增高使培养的心肌细胞代谢活跃、 bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1表达明显增加; cGMP浓度增高却使培养的心肌细胞代谢抑制、 bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达下降, 从而提示环核苷酸在心肌细胞肥大信号调控中, 起着重要的作用.
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环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ1基因表达的调控初探
目的:探讨环核苷酸(cAMP/cGMP)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1基因表达调节中的作用,为心肌肥大的防治提供一定的理论依据.方法:将Wistar乳鼠无血清培养24 h的细胞分为对照组、cAMP组(8-Bromo-cAMP 0.1 mmol/L)、cGMP组[加入一氧化氮(NO)的供体-硝普钠1 mmol/L,借此升高心肌细胞内cGMP浓度],并在30 min、 3 h、 24 h、 48 h、 72 h等5个时相点检测如下指标:(1)细胞生长代谢活性(MTT法);(2)bFGF和TGFβ1的mRNA表达(原位杂交技术)及其蛋白表达水平(免疫细胞化学技术).结果:(1)与对照组比较cAMP组细胞代谢活跃程度增加,尤以72 h明显(P<0.05);cGMP组细胞代谢受抑制,尤以48 h明显(P<0.05).(2)与对照组比较,cAMP组主要分布在心肌细胞浆及细胞膜的bFGF mRNA及其蛋白和主要分布在胞浆的TGFβ1蛋白水平表达均增加,尤其在24 h(P<0.05)和48 h(P<0.01);cGMP组bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达水平均降低,尤其在24 h(P<0.05).(3)[3H]-Leu掺入实验提示cAMP使细胞内RNA及蛋白质合成增加,而cGMP可抑制细胞内RNA及蛋白质合成;[3H]-TdR掺入实验提示cAMP和cGMP对培养的心肌细胞数量无显著影响(P>0.05).结论:cAMP浓度增高使培养的心肌细胞代谢活跃、bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1表达明显增加;cGMP浓度增高却使培养的心肌细胞代谢抑制、bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达下降,从而提示环核苷酸在心肌细胞肥大信号调控中,起着重要的作用.
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免疫细胞化学染色在乳腺癌诊断中的应用价值及质量控制
目的:探讨乳腺癌患者癌细胞 ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki67表达的应用价值及质量控制。方法采用细针吸取细胞学涂片或术中细胞学印片获取标本,联合免疫细胞化学染色,研究53例乳腺癌患者癌细胞 ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki67的生物学表达,并与免疫组织化学染色进行对照分析。结果53例乳腺癌患者 ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki67的生物学表达分别为73.58%、58.49%、56.60%、68.63%、81.13%,ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki67阳性病例和阳性强度,免疫细胞化学染色与免疫组织化学染色之间差异均无统计学意义(P >0.05)。结论免疫细胞化学染色可替代免疫组织化学染色,在乳腺癌的术前诊断、治疗方案的选择、以及预后的判断具有重要的意义。全过程的质量控制是做好乳腺癌免疫细胞化学染色的关键。
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免疫细胞化学技术在转录因子激活研究中的应用
免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC),或称免疫组织化学,其主要原理是用标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察.该技术在信号转导研究中具有一些其它技术所不可替代的优势,现主要介绍该技术在转录因子(Transcription factors, TFs)激活研究中的应用及其特点.
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环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ1基因表达的调控初探
研究目的在于探讨环核苷酸(cAMP/cGMP)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1基因表达调节中的作用,为心肌肥大的防治提供一定的理论依据.将Wistar乳鼠无血清培养24h的细胞分为对照组、cAMP组(8-Bromo-cAMP 0.1mmol/L)、cGMP组[加入一氧化氮(NO)的供体-硝普钠1mmol/L,借此升高心肌细胞内cGMP浓度],并在30min、3h、24h、48h、72h等5个时相点检测如下指标:(1)细胞生长代谢活性(MTT法);(2)bFGF和TGFβ1的mRNA表达(原位杂交技术)及其蛋白表达水平(免疫细胞化学技术).结果表明:(1)与对照组比较cAMP组细胞代谢活跃程度增加,尤以72h明显(P<0.05);cGMP组细胞代谢受抑制,尤以48h明显(P<0.05).(2)与对照组比较,cAMP组主要分布在心肌细胞浆及细胞膜的bFGF mRNA及其蛋白和主要分布在胞浆的TGFβ1蛋白水平表达均增加,尤其在24h(P<0.05)和48h(P<0.01);cGMP组bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达水平均降低,尤其在24h(P<0.05).(3)3H-leu掺入实验提示cAMP使细胞内RNA及蛋白质合成增加.而cGMP可抑制细胞内RNA及蛋白质合成;3H-TdR掺入实验提示cAMP和cGMP对培养的心肌细胞数量无显著影响(P>0.05).从而提示,cAMP浓度增高使培养的心肌细胞代谢活跃、bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1表达明显增加;cGMP浓度增高却使培养的心肌细胞代谢抑制、bFGF mRNA及其蛋白和TGFβ1蛋白表达下降,故环核苷酸在心肌细胞肥大信号调控中,起着重要的作用.
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子宫腺肌病病灶细胞的培养与鉴定
目的:原代培养及鉴定子宫腺肌病病灶细胞,为研究子宫腺肌病发病机制与药效学提供新的理想实验模型。方法采用胶原酶消化法对人子宫腺肌病细胞进行原代培养,并采用免疫细胞化学技术鉴定。结果成功培养了6例子宫腺肌病细胞并均经免疫细胞化学法鉴定证实,成功率为75%;第1代与第8代细胞的生长曲线基本一致。结论胶原酶消化法培养的子宫腺肌病细胞性能稳定,后续研究可选择3~6代细胞作为药物干预模型,细胞传代后4~5天加药物干预,选择24小时作为药效学作用的检测时间点。
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真空负压ABC法在瘢痕成纤维细胞胶原检测中的应用
创伤修复过程中以胶原为主的细胞外基质过度沉积可形成病理性瘢痕,引起体表畸形和功能障碍,其防治一直是修复重建外科的难题[1].如何准确、快速地显示成纤维细胞内前胶原蛋白并定量检测,是研究其形成机制的关键.现在多选用免疫细胞化学技术.蔡俊杰等[2]把真空负压应用于免疫组化,在组织切片染色时,解决了4℃冰箱中孵育过夜、微波技术及振荡器振洗等方法所遇到的一些问题.但它能否应用于成纤维细胞抗原检测,尚未见报道.为了拓宽瘢痕成纤维细胞生物学效应的研究方法,笔者对这一问题进行了探讨.