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蓬乱蛋白2对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响
目的:探讨蓬乱蛋白2(Dvl2)对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响.方法:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理心肌细胞48 h,Western Blot检测Dvl2的表达.用重组腺病毒Ad-GFP和Ad-Dvl2分别感染大鼠原代心肌细胞24h后用Ang Ⅱ处理48 h,利用免疫荧光技术检测心肌细胞面积,免疫印迹实验检测心肌肥大标志物β-MHC和相关信号通路.结果:AngⅡ处理引起Dvl2表达增加;与对照组相比,Ad-Dvl2感染显著增强了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和β-MHC表达增加,而Dvl2过表达引起蛋白激酶B(AKT)磷酸化的增加.结论:Dvl2能促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与激活AKT信号通路相关.
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miR-218对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的影响
探讨miR-218对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大的影响.方法:Ang Ⅱ处理心肌细胞48 h,qPCR检测心房利钠肽(ANF)、miR-218和心肌锚定重复蛋白(Ankrd1)的表达.分别用mimic miR-218和inhibitormiR-218转染原代心肌细胞24 h,随后用Ang Ⅱ处理48 h,利用免疫荧光染色技术检测心肌细胞面积.利用双荧光素酶报告基因技术检测miR-218对Ankrd1 3'UTR的调控,Western Blot检测Ankrd1的表达.结果:Ang Ⅱ处理引起心肌细胞中miR-218表达下调;与对照组相比,mimic miR-218显著抑制了Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,而inhibitor miR-218促进了Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大.Ang Ⅱ处理引起Ankrd1表达增加,miR-218能靶向抑制Ankrd1的表达.结论:miR-218能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与靶向抑制Ankrd1的表达相关.
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心肌细胞肥大病理生理研究进展
综述近年来心肌细胞肥大发生的机制,包括心肌细胞肥大的刺激因素及相关信号传导途径等.
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益气活血药对心梗大鼠心肌细胞肥大和HDAC4-MEF2 C的影响
目的 观察益气活血药对心梗大鼠心肌细胞肥大和组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylases4,HDAC4)-肌细胞增强因子(myocyte enhancer facter 2C,MEF2C)的影响,探讨益气活血药影响心肌细胞肥大的机制.方法 结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、培哚普利组、益气活血组,另设假手术组只穿线不结扎,每组大鼠15只.术后两天灌胃给药,以7、28天为观测点.小动物超声检测各组大鼠心脏结构和功能的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,用Western blot法检测大鼠心肌梗死边缘区HDAC4及其磷酸化蛋白p-HDAC4的表达,用RT-PCR法检测MEF2C mRNA的表达.结果 模型组大鼠与假手术组相比,心脏左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴率(left ventricular fractional shortening,LVFS)显著降低(P<0.01),左室收缩末期内径(left ventricular internal dimension systole,LVIDs)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组LVEF、LVFS均显著升高(P<0.05,P<0.01);术后28天,益气活血组LVIDs、LVIDd显著低于模型组(P<0.01).与假手术组比较,模型组和用药组的心肌细胞的横截面面积明显增大(P<0.01);与模型组比较,用药组的心肌细胞的横截面积降低(P<0.01,P<0.05).模型组大鼠HDAC4表达显著高于假手术组(P<0.01),用药组与模型组相比有所降低但差异无统计学意义.模型组大鼠p-HDAC4蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),7天时,用药组大鼠表达量显著低于模型组(P<0.01);28天时,益气活血组与模型组相比有所降低(P<0.05).模型组大鼠MEF2C mRNA均高于假手术组(P<0.01),用药组与模型组相比MEF2C mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05).结论 益气活血药可能通过抑制HDAC4磷酸化影响HDAC4-MEF2C通路异常病理信号传导减轻心梗大鼠心肌细胞肥大水平.
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当归补血汤通过PI3K/Akt通路对Ang Ⅱ诱导肥大心肌细胞的保护作用
目的:研究当归补血汤对肥大心肌细胞的保护作用及其与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/一氧化氮(NO)信号转导通路的关系.方法:体外培养H9C2心肌细胞,采用α-肌动蛋白(α-actin)抗体进行免疫组化法鉴定心肌细胞;用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大模型,通过BCA蛋白测定法测定心肌细胞总蛋白含量,比较空白组和模型组蛋白含量的不同,以验证AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型;取同代生长状态良好的细胞分为空白组,模型组,LY294002阻断剂组和10％含药血清组,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组心肌细胞p-Akt,Akt,p-eNOS,eNOS等信号通路的相关蛋白表达,硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO浓度.结果:免疫组化法鉴定细胞,棕黄色细密颗粒位于细胞浆,其鉴定结果符合心肌细胞特征;BCA测定细胞蛋白,模型组较空白组蛋白表达增加(P＜0.05),AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的模型建立;Western blot结果显示模型组较空白组p-Akt,Akt,eNOS蛋白表达减少(P＜0.05);含药血清组较模型组p-Akt,Akt,eNOS蛋白表达增加(P＜0.05),LY294002阻断剂组可消减含药血清的作用.结论:当归补血汤含药血清对AngⅡ诱导心肌细胞肥大起保护作用,其机制之一可能是通过调控心肌细胞PI3 K/Akt信号通路实现的.
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潜阳解毒通络饮对AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大原癌基因c-fos、c-myc mRNA的影响
目的:研究潜阳解毒通络饮合剂对大鼠心肌细胞肥大及c-fos、c-myc mRNA的影响.方法:采用血清药理学方法,体外培养大鼠心肌细胞系,分为正常对照组、模型组、潜阳解毒通络方组、缬沙坦组、吡格列酮组.并采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测大鼠心肌细胞增殖抑制情况.逆转录聚合酶链反应法检测c-fos、c-mycmRNA的表达.透射电镜观察细胞超微结构.结果:血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用细胞12h后,与空白组比较,c-fos、c-myc mRNA表达明显增加(P＜0.05),心肌细胞增殖(P＜0.05).与模型组比较,潜阳解毒通络饮干预后,大鼠心肌细胞系增殖受到抑制(P＜0.05),c-fos、c-myc mRNA表达显著下调(P＜0.05).电镜观察大鼠心肌细胞超微结构的结果表明潜阳解毒通络饮能够使线粒体和内质网扩张降低、减少溶酶体数量.结论:潜阳解毒通络饮有抑制或减少AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大的作用.是通过下调c-fos、c-myc mRNA的表达.
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月见草油抑制培养心肌细胞肥大的机理研究
目的:探讨月见草油抑制培养心肌细胞肥大的作用机理.方法:胰岛素样生长因子一Ⅰ(IGF-Ⅰ)诱发培养心肌细胞肥大,采用DNA、RNA定量检测、细胞面积测定及3H-脯氨酸掺入量的检测,在细胞水平观察月见草油抑制心肌细胞肥大的过程.结果:月见草油可使IGF-Ⅰ诱发致培养的心肌细胞肥大时DNA、RNA含量减低,细胞面积缩小(均P＜0.05),成纤维细胞胶原合成率降低(P＜0.05).结论:月见草油通过抑制培养心肌细胞DNA、RNA的合成及成纤维细胞胶原蛋白的合成,完成对IGF-Ⅰ诱发培养心肌细胞肥大的抑制.
关键词： 月见草油 心肌细胞肥大 胰岛素样生长因子-Ⅰ -
Ang Ⅱ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响
目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fog,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响.方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6 mol·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+缬沙坦(10-mol·L-1)组,丹参酮ⅡA(10-1g·L-1)组,缬沙坦(10-6mol·L-1)组.相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]一亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fog,c-jun mRNA的表达.结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05).采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c.fog,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大.
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粉防已碱对血管紧张素II诱导心肌肥大及p-ERK1/2表达的影响
目的:观察粉防已碱(tetrandrine, Tet)对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大及p-ERK1/2表达及活性的影响.方法:培养新生大鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率、细胞图像分析系统测量细胞体积、考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;以ERK免疫沉淀活性试剂盒测定ERK活性,Western-blot测定p-ERK1/2表达.结果:Tet能显著抑制Ang II诱导的心肌细胞搏动频率、体积、总蛋白含量、蛋白合成速率的上升;对p-ERK1/2表达及活性具有剂量依赖性的抑制作用.结论:Tet可以明显抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与降低p-ERK1/2表达及活性有关.
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睾酮诱导大鼠心肌细胞肥大反应并上调ERK1/2蛋白表达
目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在睾酮对大鼠心肌肥大中的作用.方法 用差速贴壁法分离及纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析~3H-亮氨酸(~3H-Leu)掺入,IBAS图像分析心肌细胞表面积,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平.结果 生理浓度的T作用于大鼠心肌细胞24 h后,细胞蛋白质含量、3~H-Leu掺入和细胞表面积均增加,其中以10~(-8) mol/L作用强.雄激素受体拮抗剂氟他胺(Flu)10~(-5) mol/L预处理2 h可抑制T诱导的心肌细胞蛋白质含虽的增加,而Flu单独作用对心肌细胞蛋白质含量无影响.ERK1/2信号通路的特异性抑制剂PD98059 50μmol/L预处理2 h,可抑制T诱导的心肌细胞~3H-Leu掺入的增加;10~(-8) mol/L T作用24 h使心肌细胞的ERK1/2的蛋白表达显著增加;10~(-5) mol/L Flu预处理2 h可逆转T诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达的增加.结论 生理浓度的T可以诱导心肌细胞肥大反应,该作用可能由ERK1/2信号通路介导.T通过雄激素受体(AR)上调ERK1/2蛋白表达.
关键词： 睾酮 心肌细胞肥大 细胞外信号调节激酶1/2 信号传导 -
促红细胞生成素抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大及其可能的信号通路
目的 观察促红细胞生成素(EPO)对新生大鼠心肌细胞肥大中信号通路蛋白表达的影响.方法 用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,10-6mol/L)诱导心肌细胞肥大,分别以EPO(2×104U/L)或/和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580(15 μmol/L)进行干预,检测心肌细胞表面积、蛋白合成、胚胎基因ANF及β-MHC表达,Real-time-Q-PCR检测转化生长因子β(TGF-β)1及P38MAPK mRNA表达;Western blot法检测TGF-β1、TGF-β激活性激酶1(TAK1)、phospho-TAK1、P38MAPK和phospho-P38MAPK蛋白的表达.结果 EPO能有效抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大(P＜0.05),抑制TGF-β1、TAK1、phospho-TAK1、P38MAPK和phospho-P38MAPK表达(P＜0.05);SB203580能增强EPO抑制心肌细胞肥大的作用.结论 EPO能减轻AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其可能与TGF-β1-TAK1-P38 MAPK信号通路有关.
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miR-1和miR-133 a对大鼠肥大心肌细胞L-型钙通道Cavβ2和α1 C亚基的调控作用
目的：研究miR-1和miR-133a在大鼠心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基（ Cavβ2）和α1C亚基的调控作用。方法异丙肾上腺素（ ISO ）诱导大鼠心肌细胞肥大；在线数据库microCosm 和Targetscan 预测miR-1和miR-133a的靶基因；分别构建含有Cavβ23′UTR或α1C 3′UTR的重组质粒，与miR-1或miR-133a共转染HEK293细胞，验证Cavβ2亚基是miR-1的靶基因，α1C亚基是miR-133a的靶基因；用Western blot 法检测心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达；用siRNA干扰Cavβ2和α1C表达，明确Cavβ2和α1C在心肌细胞肥大中的作用。结果1） Cavβ2为miR-1的潜在靶基因，α1C为miR-133a的潜在靶基因。2）分别将miR-1和Cavβ23′UTR，miR-133a和α1C 3′UTR共转染HEK293细胞，荧光素酶荧光值均显著降低（ P＜0.05， P＜0.01）。3）分别转染miR-1 mimic、miR-133 a mimic上调miR-1、miR-133a的表达后，心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达均明显下降（P＜0.01， P＜0.05）。4）用RNAi下调Cavβ2和α1C表达可明显抑制心肌细胞表面积（P＜0.01），ANP和β-MHC mRNA表达增加（P＜0.05）。结论Cavβ2亚基是miR-1的靶基因，α1 C亚基是miR-133 a的靶基因。 miR-1和miR-133 a可能通过负性调控L-型钙通道Cavβ2和α1C蛋白表达，抑制心肌细胞肥大。
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心肌素与心血管疾病的研究进展
心肌素(myocardin)是2001年发现的在心血管组织特异表达的转录辅助因子,心肌素与血清效应因子(SRF)共同控制着心肌和平滑肌细胞特异基因的表达,其活性的改变与人类主要心血管疾病如动脉粥样硬化、心肌肥大、高血压的发生发展关系非常密切.本文就心肌素分子结构、表达调控以及与心血管疾病关系的研究进展作一综述.
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奥帕曲拉抑制内皮素-1诱导新生大鼠心肌细胞肥大
许多研究证明心力衰竭及心肌缺血时循环中的内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)的浓度升高,终导致心肌细胞肥大以及心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成[1-2].本实验室曾报道奥帕曲拉(Omapatrilat,OMA)呈浓度依赖性抑制ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成,此作用部分通过B2受体介导[2],但OMA对心肌肥大及其机制目前尚未见报道.本研究探讨OMA抗心肌肥大的作用及其是否与NO/cGMP及PKC调控有关.
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尾加压素Ⅱ抑制大鼠心肌细胞L型钙电流
尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)是目前发现的哺乳动物体内强的缩血管物质,其缩血管效应比内皮素-1强10余倍[1].它具有收缩血管、促心肌细胞肥大和血管细胞增殖、抑制心功能等生物学效应,在高血压、动脉粥样硬化、心血管重塑、心力衰竭等多种心血管疾病的发生发展中可能具有重要意义.
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17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响
目的观测17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对肾上腺素(PE)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制.方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,[3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达,半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-骨骼肌肌动蛋白(α-skA)和心房肽(ANP)的mRNA表达.结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加;17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达;17β-雌二醇降低β-MHC、α-skA的mRNA表达,但增加ANP mRNA表达.结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达,逆转收缩蛋白基因(β-MHC和α-skA)向胚胎型转化及促进ANP mRNA表达有关.
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钙信号机制在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用
目的探讨钙依赖的信号转导途径在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用.方法用NPY刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)的特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.应用3H-Leu掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子, 观察不同作用时限内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果①心肌细胞3H-Leu掺入量测定:与对照组相比,NPY10nM组3H-Leu掺入量有所增高,但与对照组比无显著差异,而NPY100nM 组心肌细胞3H-Leu掺入量较对照组明显增高(p<0.05).CsA组和对照组相比无显著差异.②加入100nmol/L NPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量均无显著差异.经100nmol/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(p<0.001,p<0.001).结论 NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用.较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙Ca2+浓度增加,这可能是活化CaN信号途径的始动环节.
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丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大
目的 在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡ,TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡA,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响.方法 采用3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos mRNA的表达.结果 TSN能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞蛋白质合成速率的显著增加(P＜0.05)及心肌细胞原癌基因c-fos mRNA表达的增强(P＜0.05),其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦(Valsartan,Val)相似.结论 TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这与其抑制了原癌基因c-fos的表达有关.
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丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大c-fos和c-jun mRNA表达的影响
目的 在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA(tanshinone Ⅱ,TSN)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ A,Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大的影响.方法 采用相差显微镜测量细胞大小,测定心肌细胞3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos和c-jun mRNA的表达,MTF法检测细胞活力.结果 培养的心肌细胞中加入TSN(5～80μmol/L),24 h后没有产生明显的细胞毒性.TSN能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞增大、蛋白质合成速率的显著增加及心肌细胞原癌基因c-fos和c-jun mRNA表达的增强.结论 TSN可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,这可能与其抑制了原癌基因c-fos和c-jun的表达有关.
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大鼠出生后 miR -23a 在心脏中的表达变化研究
目的：探讨大鼠出生后不同时间点心脏组织中 miR -23a 的表达变化，为阐明哺乳动物出生后心脏发育的调节机制提供线索。方法分离不同年龄（胚胎19 d、出生后1 d、7 d、2周、3周、4周、8周）大鼠心脏组织，利用 Taq-Man qPCR 检测 microRNA（miRNA）表达水平；比较不同年龄心脏组织中 miR -23a 等 miRNA 的表达变化。结果胚胎19 d、出生后1 d 和7 d，miR -23a 表达稳定；出生后2周 miR -23a 表达水平显著上调，达到胚胎19 d 的3.6倍，并且在出生后3周（7.7倍）、4周（4.6倍）、8周（5.1倍）都维持高水平表达状态。结论出生后心脏组织生长方式由心肌细胞增殖为主向心肌细胞肥大的过程中，miR -23a 很可能发挥了重要作用。
