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促红细胞生成素抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大及其可能的信号通路
目的 观察促红细胞生成素(EPO)对新生大鼠心肌细胞肥大中信号通路蛋白表达的影响.方法 用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,10-6mol/L)诱导心肌细胞肥大,分别以EPO(2×104U/L)或/和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580(15 μmol/L)进行干预,检测心肌细胞表面积、蛋白合成、胚胎基因ANF及β-MHC表达,Real-time-Q-PCR检测转化生长因子β(TGF-β)1及P38MAPK mRNA表达;Western blot法检测TGF-β1、TGF-β激活性激酶1(TAK1)、phospho-TAK1、P38MAPK和phospho-P38MAPK蛋白的表达.结果 EPO能有效抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大(P＜0.05),抑制TGF-β1、TAK1、phospho-TAK1、P38MAPK和phospho-P38MAPK表达(P＜0.05);SB203580能增强EPO抑制心肌细胞肥大的作用.结论 EPO能减轻AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其可能与TGF-β1-TAK1-P38 MAPK信号通路有关.
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PD98059对急性淋巴细胞白血病细胞MAPK信号通路的抑制作用
本研究检测阻断Ras/Erk信号通路对原代人类急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达的影响.筛选PD98059作用的佳有效浓度和时间,采用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测PD98059作用于原代ALL细胞前后和正常人原代细胞的目的基因的表达水平.结果表明:与正常人原代细胞相比,处理前原代ALL细胞c-fos、TAK1 mRNA的相对表达升高(P值分别为0.014和0.017).经PD98059处理后原代ALL细胞中c-fos、c-jun、TAK1 mRNA的相对表达情况为:c-fos、c-jun mRNA 7个样本均低表达,TAK1 mRNA 5个样本低表达,2个样本高表达;较处理前c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达明显下降(P值均为0.018).处理后原代ALL细胞与正常人原代细胞相比,c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达无统计学差异.结论:原代ALL细胞的c-fos和TAK1基因的活性增高,阻断ALL细胞的Ras/Erk信号通路可导致重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达明显下降.
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TRAF6,TAK1和TGF-β基因在弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗前后外周血单个核细胞中的表达
本研究检测弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)患者外周血单个核细胞中TRAF6、TAK1及TGF-β基因在化疗前后的表达变化,探讨化疗对TRAF6/TAK1信号通路活性的影响.采用Ct值比较法,通过SYBR Green Ⅱ实时定量PCR检测38例DLBCL患者化疗前及化疗2周期后外周血单个核细胞(PBMNC)中TRAF6、TAK1及TGF-β在mRNA的表达水平,并以12例健康人PBMNC作为对照.结果表明:DLBCL患者治疗前后PBMNC中TRAF6、TAK1和TGF-β mRNA表达水平均高于正常人.治疗前患者TRAF6及TAK1基因表达水平与正常人相比未发现统计学差异(P＞0.05),治疗后这两基因的表达明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.05);在此同时治疗后与治疗前相比,这两基因的表达水平也具明显统计学差异(P＜0.05),且这两基因的表达水平呈明显正相关,而TGF-β基因治疗后较治疗前明显下降,差异具统计学差异(P＜0.05).结论:DLBCL患者化疗后TRAF6/TAK1信号通路的活性明显增高,而TGF-β基因治疗后则较治疗前明显下降.
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TAK1蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的 检测TAK1蛋白在胰腺癌中的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化Envision二步法检测50例胰腺癌、5例慢性胰腺炎及5例正常胰腺组织中TAK1蛋白的表达情况,并分析其表达与临床病理特征及预后的关系.结果 TAK1蛋白在胰腺癌组织阳性率为100.0％,强阳性率为66.0％;慢性胰腺炎组织阳性率60.0％,强阳性率40.0％;正常胰腺组织阳性率0％.胰腺癌组织TAK1表达显著高于正常胰腺组织,差异有统计学意义(P=0.01).淋巴结转移与否,TAK1强表达有显著性差异(P=0.02),但TAK1强表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤大小、远处转移、临床分期无显著相关(P＞0.05).TAK1强阳性与弱阳性表达胰腺癌患者的生存率比较,无显著性差异(P=0.60).结论 TAK1蛋白在胰腺癌中表达上调,与其淋巴结转移相关.
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硫辛酰胺对糖尿病大鼠肾组织中TAK1活性和SnoN蛋白稳定性的影响
目的 观察硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)对糖尿病(diabetes Mellitus,DM)大鼠肾组织中转化生长因子β激活激酶1(TGFβ-activated-kinase1,TAK1)活性和核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)蛋白稳定性的影响,探讨硫辛酰胺抗肾脏纤维化的作用及其可能机制.方法 复制糖尿病(DM)大鼠模型,分为对照组NC(normalcontrol,NC)、DM组及ALM治疗组,实验6周后处死全部大鼠,测定相应生化指标,观察肾组织病理改变;免疫组化和Western blot检测TAK1、p-TAK1 (Thr184/187) (phosphoryladon-TGF β-activated-kinase1 (Thr184/187),p-TAK1(Thr184/187)、SonN、转化生长因子-β 1(trans-forminggrowth factor-β 1,TGF-β 1)、胶原Ⅳ(collagen-Ⅳ)的蛋白水平;免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测SnoN泛素化水平.结果 (1)与NC组相比,DM组24h尿蛋白(urinary protein,UP)、血糖(blood glucose,BG)、甘油三酯triglyceride (TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)显著增高;ALM组以上指标较DM组显著降低.(2)苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)、Masson染色结果显示,DM组大鼠出现肾纤维化改变,ALM组肾纤维化病变明显改善.(3)与NC组相比,DM组大鼠肾组织TGF-β 1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)表达及SnoN泛素化水平增加,但SnoN蛋白水平降低;而与DM组相比,ALM组大鼠肾组织TGF-β1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)蛋白表达及SnoN泛素化水平降低,而SnoN蛋白水平有所恢复.结论 糖尿病大鼠肾组织中TAK1蛋白表达和活化水平均增加,可能通过介导SnoN磷酸化后被泛素化并降解,使TGF-β1致纤维化效应级联放大,促进DN的发生发展;而硫辛酰胺治疗后可通过减少TAK1的表达和磷酸化、降低SnoN泛素化水平,使得SnoN蛋白水平恢复而发挥抗肾脏纤维化效应.
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TAK1基因沉默对TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达的影响
目的:观察转化生长因子β激活激酶1(TAK1)基因沉默对肿瘤坏死因子a(TNF-a)诱导的滑膜细胞中促炎介质白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)表达的影响,以探讨TAK1在类风湿关节炎(RA)发病中的作用.方法:采取脂质体转染方法将TAK1特异性的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照RNA(scRNA)导入类风湿关节炎的滑膜成纤维细胞株MH7A细胞,然后分别用20 ng/ml TNF-a刺激后,检测细胞内IL-6、IL-8 mRNA的表达和培养上清中IL-6和IL-8分泌情况以及p38、ERK、JNK、p65磷酸化的水平和抑制性蛋白IκBα的变化情况.结果:siRNA-TAK1转染72 h后滑膜细胞中TAK mRNA和蛋白表达的平均抑制率分别为75％和55％.siRNA-TAK1转染下调TNF-a诱导状态下IL-6和IL8的表达,并能抑制p38、JNK、p65磷酸化和增加IκBα水平.结论:TAK1基因沉默能抑制TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达,可能与其抑制JNK和p38MAPK的活化及NF-κB的活化有关.
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沉默TAK1表达对三氧化二砷诱导Kasumi-1细胞凋亡的影响
目的 利用RNA干扰技术研究沉默转化生长因子β激活激酶(TAK1)对三氧化二砷(As2O3)诱导的急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响.方法 以伴t(8;21)的AML细胞株Kasumi-1为对象,用CCK-8法检测As2O3对Kasumi-1细胞的增殖抑制作用；Western blot方法检测As2O3作用不同时间后Kasumi-1细胞磷酸化c-Jun N端激酶(P-JNK)的表达；以TAK1特异的siRNA转染Kasumi-1细胞后用As2O3处理细胞作为实验组,同时设立对照组,检测P-JNK表达水平,比较不同处理条件下细胞凋亡率、集落形成率.结果 不同浓度As2O3作用于Kasumi-1细胞后,细胞增殖抑制率呈浓度依赖性增高,半数抑制浓度为3.5 μmol/L;As2O3作用Kasumi-1细胞不同时间后,P-JNK表达均明显增强,以30 min强；未作任何处理的Kasumi-1细胞、TAK1特异siRNA单纯转染的Kasumi-1细胞、As2O3单独处理的Kasumi-1细胞、TAK1 siRNA转染联合As2O3处理的Kasumi-1细胞凋亡率分别为(5.02±1.13)％、(6.18±0.28)％、(48.33±2.70)％、(86.07±2.21)％,集落形成率分别为(73.83±2.78)％、(76.03±1.46)％、(55.07±1.50)％、(22.20±1.15)％,单纯TAK1siRNA转染组细胞凋亡率与Kasumi-1细胞未处理组比较差异无统计学意义(P=0.052),其余各组凋亡率比较差异有统计学意义(P=0.000)；单纯TAK1siRNA转染的Kasumi-1细胞集落形成率与未处理组比较差异无统计学意义(P =0.179),但与其余各组集落形成率比较差异有统计学意义(P =0.000).结论 沉默TAK1基因表达可增强As2O3对Kasumi-1细胞增殖抑制及诱导凋亡作用,其机制可能通过TAK1下游传导信号JNK途径.
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TLR4及TAK1表达与急性脑梗死炎性反应机制相关性研究
目的:探讨急性脑梗死患者外周血中Toll样受体4(TLR4)及转化生长因子激活激酶1(TAKI)表达的变化及其与炎性反应机制的相关性.方法:对50例急性脑梗死患者进行临床特征分析、外周血白细胞计数、CRP水平、NIHSS评分、脑梗死灶容积计算及血清TLR4及TAKI的含量检测,分析梗死灶容积与上述指标的相关性.结果:急性脑梗死患者血糖水平、CRP水平、白细胞计数、NIHSS评分、梗死灶容积均较健康对照组高,差异比较均有统计学意义(P＜0.05);急性脑梗死整个发病过程中血清中TLR4与TAK1含量均较健康对照组高,以疾病发病高峰期明显;脑梗死灶容积与糖尿病史、CRP水平、白细胞计数及NIHSS评分有相关性,其中TLR4与脑梗死灶容积有独立相关性.结论:TLR4及TAKI可能主要是通过介导炎性反应在脑梗死中发挥作用,其中TLR4与脑梗死容积有独立相关性,可作为脑梗死的治疗靶点.
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金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用
目的 通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径.方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达.结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4、TAK1蛋白表达明显升高(P＜0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4、TAK1表达明显下调(P＜0.01);金欣组蛋白表达量低,与利巴韦林组相比,P＜0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P＜0.01.结论 金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的.
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转化生长因子-β激活激酶1抑制剂对AGEs诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞活化作用及机制
目的：应用转化生长因子-β激活激酶1( TGF-β acti-vated kinase-1,TAK1)抑制剂(5Z-7-oxozeaenol,OZ)作用于晚期糖基化终末产物( adavnaced glyeation end porudets,AGEs)诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞( bone marrow-derived macro-phages,BMMs),探讨TAK1信号通路在AGEs诱导的BMMs活化中作用及机制。方法获取C57小鼠的BMMs,运用流式细胞术鉴定BMMs纯度。检测TAK1抑制剂在不同浓度下对AGEs培养巨噬细胞活力的影响,激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测巨噬细胞M1亚型；RT-PCR检测各组细胞中 MCP-1与 TNF-α mRNA 的表达；Western blot 法检测TAK1、MAPK及NF-κB通路蛋白的表达。结果 AGEs刺激能增加M1型巨噬细胞百分比,TAK1抑制剂可抑制AGEs诱导下巨噬细胞向M1表型活化；与正常对照组比较,AGEs刺激不仅上调 BMMs 中 MCP-1、TNF-α mRNA 的表达( P <0．01),而且p-TAK1、TAB1、p-JNK、p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白表达也明显增加( P <0．05)；通过 TAK1抑制剂下调 p-TAK1表达的同时 AGEs 培养 BMMs 的 TAB1、p-JNK、p-p38MAPK、NF-κBp65及TNF-α、MCP-1表达均明显降低(P<0．05)。结论 AGEs能诱导BMMs向M1表型活化,TAK1抑制剂可能通过 TAK1/MAPKs、MAPKs/NF-κB 途径抑制AGEs对巨噬细胞的激活和炎症因子的表达。
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TAK1抑制剂对高糖环境巨噬细胞和系膜细胞相互作用的影响及机制
目的 探讨高糖环境下转化生长因子β激活激酶l(TAK1)抑制剂5Z-7-oxozeaenol在巨噬细胞和系膜细胞相互关系中的作用.方法 巨噬细胞和系膜细胞共培养、巨噬细胞单培养、系膜细胞单培养3种培养方式分别分为:抑制剂对照组、甘露醇对照组、正常对照组、高糖组、高糖+不同浓度(30、100、300nmol/L)抑制剂组.采用Western blot法检测单培养巨噬细胞p-TAK1、TAK1结合蛋白(TAB1)、NF-KBp65蛋白表达变化,免疫荧光检测TAK1抑制剂对NF-KBp65亚基核转位的影响.采用ELISA法检测单培养和共培养各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、单核细胞趋化因子(MCP)-1、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)含量变化,光镜下观察共培养对巨噬细胞迁移能力影响.结果 与对照组比较,高糖刺激巨噬细胞p-TAK1、TAB1、NF-KB p65蛋白表达均明显上调(P＜0.05),高糖组共培养和单培养细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1、ColⅣ、FN均显著高于对照组(P＜0.05),共培养细胞上清液中各种细胞因子含量较单培养升高更明显(P＜0.05),与高糖组比较,TAK1抑制剂呈浓度依赖性降低各项指标表达(P＜0.05).300 nmol/L抑制剂明显降低巨噬细胞迁移数目(P＜0.05).结论 高糖环境下,巨噬细胞与系膜细胞之间存在相互影响,这种作用能促进炎症因子(TNF-α、IL-1β、MCP-1)和细胞外基质成分(ColⅣ、FN)产生增加,而TAK1抑制剂能通过干预NF-κB p65核转位,抑制巨噬细胞迁移,减少炎症因子和细胞外基质成分的分泌,发挥抗炎、抗纤维化效应,从而起到肾脏保护作用.
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ADAMTS-4与TAK1在骨关节炎软骨组织中表达的相关性研究
目的探讨带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4( ADAMTS-4)与转化生长因子β激活激酶1(TAK1)在骨关节炎(OA)软骨组织中的相关性表达。方法采用病例对照研究,分别利用免疫组织化学法和Western blot法检测ADAMTS-4、TAK1在OA组及正常对照组软骨组织中的表达情况,同时研究二者在OA中表达的相关性。结果 ADAMTS-4和TAK1在OA组表达均明显高于正常对照组( P<0.01)；二者在OA软骨组织中的表达呈正相关(r=0.469,P<0.05)。结论 ADAMTS-4与OA软骨病变的发生发展密切相关,活化的TAK1可能致OA软骨组织中ADAMTS-4的高表达。 TAK1可以作为 OA 治疗的新靶点。
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食管癌组织中TAK1和TAB1的表达及与临床预后的相关性
目的 探讨食管癌组织中转化生长因子激活激酶1(TAK1)和转化生长因子β活化激酶结合蛋白1(TAB1)在食管癌组织中的表达相关性,并分析其与临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组织化学染色法检测TAK1和TAB1蛋白在84例食管癌组织、配对的癌旁组织中的表达;根据TAK1高/低表达、TAB1高/低表达、TAK1及TAB1共表达与否等将其分为三种表达方式,并分析其表达方式与临床病理特征的相关性;采用生物信息学数据库分析TAK1和TAB1基因表达之间的相关性;采用Kaplan-Meier方法进行无瘤时间生存分析.结果 TAK1和TAB1在食管癌组织中的高表达率分别为65.5%(55/84)和52.4%(44/84),且两者的表达及共表达均与食管癌浸润深度、淋巴结转移、病理TNM分期相关(P<0.05).TAK1与TAB1的表达量呈正相关性(P<0.05),高表达TAK1或共表达TAK1/TAB1提示患者无瘤生存期缩短.结论 TAK1和TAB1影响食管癌的疾病进展及预后,联合检测两者表达可能作为食管癌新的预后指标和治疗靶点.
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靶向NF-κB信号通路的胰腺癌治疗研究进展
胰腺癌是一种胰腺原发恶性肿瘤疾病.由于其早期的症状较少,患者确诊时往往病情已较为严重,并且预后较差,1年及5年生存率都较低,是威胁人类健康的重大疾病.NF-κB(核因子κB)是广泛表达于各类动物细胞中的转录因子,在免疫应激中扮演重要角色,其异常表达可导致免疫系统异常疾病及肿瘤的发生.本文对NF-κB信号在胰腺肿瘤治疗中的应用与前景作一综述.
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丙泊酚对肾小管上皮细胞系缺血再灌注损伤后纤维化和TAK1的影响
目的 探讨丙泊酚对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺血再灌注损伤后纤维化的作用及转化生长因子β激活激酶(TAK1)在其中的可能作用机制.方法 采用随机数字表法将HK-2细胞分为6组(n=36):空白对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(IRP组)、脂肪乳剂组(IRF组)、TAK1过表达组(IRPT组)、TAK1过表达阴性病毒对照组(IRPTI组).采用抗霉素A耗竭HK-2细胞ATP后更换正常培养液恢复补充代谢底物的方法制备ATP耗竭再恢复损伤模型模拟体内细胞缺血再灌注损伤状态.C组正常培养,不作任何处理;IR组:正常培养的HK-2细胞更换为含10 μmol/L抗霉素A及1μmol/L钙离子通道载体A23187的无血清DMEM培养基孵育1h,PBS清洗之后再换成正常含血清培养基继续培养12、24、48 h;IRP组于ATP耗竭前1h,正常培养基中加入丙泊酚(终浓度20 μmol/L)预孵育1h;IRPT组于正常培养基中加入丙泊酚(终浓度20 μmol/L)及TAK1慢病毒(滴度为2×107TU/mL)预孵育1 h;IRF组正常培养基中加入10％脂肪乳剂预孵育1 h;IRPTI组正常培养基中加入丙泊酚(终浓度20 μmol/L)及TAK1阴性慢病毒预孵育1h,其余处理均同IR组.于ATP再恢复12 h时,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法测定细胞活力;于ATP再恢复12、24和48 h时,采用Western blot法测定TAK1的表达水平,于ATP再恢复48 h时Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维粘连蛋白(FN)、胶原蛋白1(COL 1)的表达水平.结果 与C组比较,IR组细胞凋亡率增加,细胞活力降低,ATP再恢复后TAK1、COL1、α-SMA和FN表达均上调(P＜0.05);与IR组比较,IRP组细胞凋亡率减少,细胞活力增强,ATP再恢复后TAK1、COL1、α-SMA和FN表达均下调(P＜0.05);与IRP组比较,IRPT组细胞凋亡率增加,细胞活力降低,再恢复后TAK1、COL1、α-SMA和FN表达均上调(P＜0.05).结论 丙泊酚预处理可减轻ATP耗竭再恢复诱导的HK-2细胞纤维化,其机制可能是通过下调TAK1表达,进而抑制了早期细胞凋亡,从而减轻了HK-2细胞纤维化程度.
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TAK1对大鼠海马神经元细胞缺氧复氧后JNK信号通路和细胞凋亡的影响
目的：探讨TAK1对大鼠海马神经元缺氧复氧后JNK信号通路和细胞凋亡的影响。方法新生（出生＜24 h） SD大鼠，雌雄不拘，体质量5～6 g，原代培养海马神经元，接种于培养孔或培养皿中。采用随机数字表法，将其随机分为4组，每组48孔和12皿，正常对照组（ C组）：不予任何处理；缺氧复氧组（ HR组）：缺氧4 h复氧24 h；TAK1抑制剂组（ T组）、DMSO组：分别于缺氧处理前给予TAK1特异性抑制剂5Z－7－oxozeaenol 1μg／mL和等量DMSO溶液后行缺氧复氧。各组缺氧复氧处理结束后1 h，测定神经元活力、凋亡率、cleaved Caspase －3和Bax蛋白的表达水平，测定JNK磷酸化水平。结果与C组比较，HR组和DMSO组的海马神经元活力降低，细胞凋亡率升高，cleaved Caspase－3和Bax蛋白表达上调，JNK磷酸化水平明显升高（ P＜0．05）；与HR组比较，T组海马神经元活力增强，细胞凋亡率降低，cleaved Caspase －3和Bax蛋白表达下调，JNK磷酸化水平降低（P＜0．05）。结论 TAK1可能通过激活JNK信号通路介导的细胞凋亡参与大鼠海马神经元缺氧复氧后的损伤机制。
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丙泊酚对小鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及TAK1在其中的作用
目的：探讨丙泊酚预处理对小鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及转化生长因子β激活激酶（TAK1）在其中可能的作用机制。方法健康雄性8～12周龄昆明小鼠84只随机分为7组（n＝12），空白对照组（ C组）、假手术对照组（ S组）、缺血再灌注组（ IR组）、缺血再灌注＋丙泊酚处理组（ IRP组）、缺血再灌注＋脂肪乳剂组（ IRF组）、缺血再灌注＋丙泊酚＋TAK1过表达病毒组（ IRPT组）、缺血再灌注＋丙泊酚＋TAK1阴性病毒对照组（ IRPTI组）。 IR组夹闭小鼠双侧肾动脉30 min后重新恢复血供，C组不作任何处理，S组仅分离双侧肾动脉， IRP组于缺血损伤前30 min予丙泊酚处理，IRPT组于缺血损伤前30 min予丙泊酚及TAK1过表达慢病毒处理， IRF组于缺血损伤前30 min予脂肪乳剂处理，IRPTI组于缺血损伤前30 min予丙泊酚及TAK1阴性慢病毒处理，其余处理均同IR组。 I／R后2 d，HE染色观察肾脏病理改变，半定量法统计肾小管病理改变评分，检测小鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平，Western－blot法检测TAK1蛋白的表达。结果与C组比较，IR组HE染色可观察到肾损害，小鼠肾功能BUN与Cr水平明显升高，TAK1表达上调（P＜0.05）；与IR组比较，IRP组HE染色肾损害程度减轻，小鼠肾功能BUN与Cr水平降低，TAK1表达下调（P＜0.05）；与IRP组比较，IRPT组HE染色肾损害程度增加，小鼠肾功能BUN与Cr水平增高，TAK1表达上调（ P＜0.05）。结论丙泊酚可减轻小鼠急性肾缺血再灌注所致的肾损伤，其机制可能是通过下调TAK1的活化从而达到肾保护作用。
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转化生长因子β激活酶1在食管癌中的表达及其临床意义
目的：探讨转化生长因子β激活酶1（TAK1）在人食管癌组织中的表达及临床意义。方法：收集2002年9月至2008年2月在我院接受手术治疗的食管癌患者80例，所有患者术后经病理结果证实，通过免疫组织化学方法检测TAK1蛋白在食管癌及其癌旁组织中的表达，并探讨TAK1表达量与临床病理特征及患者预后的相关性。结果：TAK1在食管癌组织中阳性表达率为80％，明显高于癌旁正常组织中的阳性表达率11．25％；TAK1的阳性率与食管癌患者的年龄、性别、分化程度及肿瘤大小无关（P＞0．05），而与临床分期和淋巴结转移呈正相关性（P＜0．05）。此外，研究还发现TAK1的表达量与患者的5年生存率呈反比，高表达TAK1的患者5年生存率显著低于低表达的患者（P＝0．0085）。结论：TAK1可能是食管癌发病机制中的重要参与者，靶向TAK1的治疗有可能改善食管癌患者的预后。
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结直肠癌中K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性研究
目的 分析K-ras基因突变、转化生长因子激酶1(TAK1)蛋白和MAP4K2蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系,并分析K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性.方法 应用DNA测序法检测76例结直肠癌样本中K-ras基因突变情况,应用免疫组化法检测样本中TAK1和MAP4K2蛋白表达情况.结果 76例结直肠癌中,K-ras基因突变率为32.89％(25例),K-ras基因突变与肿瘤分化程度有关(P＜0.05),与浸润深度、是否有淋巴结转移无关;TAK1阳性率为48.68％,MAP4K2阳性率为46.05％,TAK1蛋白表达和MAP4K2蛋白表达均与肿瘤分化程度、是否有淋巴结转移有关(P＜0.05),与浸润深度无关.在76例结直肠癌中,K-ras基因突变与TAK1蛋白表达、MAP4K2蛋白表达均无相关性(P＞0.05),TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间无相关性;在25例K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关(r=0.402,P＜0.028).结论 K-ras基因突变、TAK1和MAP4K2蛋白表达均与结直肠癌的肿瘤分化程度有关,与浸润深度无关;在K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关.
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活化型TAK1转基因小鼠的建立及TAK1对牙釉质发育影响的初步研究
目的:建立人活化型TAK1(caTAK1)转基因小鼠,初步研究TAK1对釉质发育的影响.方法:克隆小鼠釉原蛋白(Amelogenin,Amelx)启动子及人TAK1的全长基因,并利用缺失突变原理扩增caTAK1基因;运用Gateway技术将caTAK1基因插入Amelx启动子下游构建转基因表达载体,并通过显微注射法建立caTAK1转基因小鼠;用PCR扩增对转基因小鼠的基因型进行鉴定,RT-PCR检测外源性TAK1基因在转基因小鼠颌骨中的表达,并运用X线片、体视显微镜及微型CT对转基因小鼠磨牙釉质的矿化程度和病理性磨损程度进行观察.结果:成功构建了caTAK1转基因表达载体并制备转基因小鼠;转入的人caTAK1基因在小鼠颌骨组织中特异性表达;活化型TAK1转基因小鼠磨牙釉质的矿化程度较野生型小鼠差,1月龄时,两种小鼠磨牙釉质表面的磨损程度无明显差别,而6月龄时,与野生型小鼠相比,活化型TAK1转基因小鼠磨牙釉质有严重磨损.结论:TAK1在牙齿釉质发育过程中具有重要作用.
