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硫辛酰胺对糖尿病大鼠肾组织中TAK1活性和SnoN蛋白稳定性的影响
目的 观察硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)对糖尿病(diabetes Mellitus,DM)大鼠肾组织中转化生长因子β激活激酶1(TGFβ-activated-kinase1,TAK1)活性和核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)蛋白稳定性的影响,探讨硫辛酰胺抗肾脏纤维化的作用及其可能机制.方法 复制糖尿病(DM)大鼠模型,分为对照组NC(normalcontrol,NC)、DM组及ALM治疗组,实验6周后处死全部大鼠,测定相应生化指标,观察肾组织病理改变;免疫组化和Western blot检测TAK1、p-TAK1 (Thr184/187) (phosphoryladon-TGF β-activated-kinase1 (Thr184/187),p-TAK1(Thr184/187)、SonN、转化生长因子-β 1(trans-forminggrowth factor-β 1,TGF-β 1)、胶原Ⅳ(collagen-Ⅳ)的蛋白水平;免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测SnoN泛素化水平.结果 (1)与NC组相比,DM组24h尿蛋白(urinary protein,UP)、血糖(blood glucose,BG)、甘油三酯triglyceride (TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)显著增高;ALM组以上指标较DM组显著降低.(2)苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)、Masson染色结果显示,DM组大鼠出现肾纤维化改变,ALM组肾纤维化病变明显改善.(3)与NC组相比,DM组大鼠肾组织TGF-β 1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)表达及SnoN泛素化水平增加,但SnoN蛋白水平降低;而与DM组相比,ALM组大鼠肾组织TGF-β1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)蛋白表达及SnoN泛素化水平降低,而SnoN蛋白水平有所恢复.结论 糖尿病大鼠肾组织中TAK1蛋白表达和活化水平均增加,可能通过介导SnoN磷酸化后被泛素化并降解,使TGF-β1致纤维化效应级联放大,促进DN的发生发展;而硫辛酰胺治疗后可通过减少TAK1的表达和磷酸化、降低SnoN泛素化水平,使得SnoN蛋白水平恢复而发挥抗肾脏纤维化效应.
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NQO1酶与苯中毒及相关疾病遗传易感性的关系
NQO1是依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶[NAD(P)H:quinone oxido陀ductase NQO1:EC1.6.99.2]的简称,又称为DT-硫辛酰胺脱氢酶(DT-diaphorase),是一种黄素酶.
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一氧化氮合酶在门静脉高压大鼠胰腺的分布
一氧化氮(NO)与消化道疾病的关系日益受到重视.我们采用依赖还原性辅酶Ⅱ硫辛酰胺脱氢酶(NADPH-diaphorase,NADPH-d)免疫组织化学方法和神经元性一氧化氮合酶(NOS)免疫组织化学法对正常和门静脉高压大鼠胰腺组织NOS的分布进行研究.
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锌对胆碱能成神经细胞瘤SN56细胞的影响
锌是脑细胞正常发育和功能的必要微量元素.但是,锌过量会对脑产生一些细胞毒性效应.本试验的目的是想探寻锌的细胞毒性效应在量上与乙酰辅酶A代谢变化是否有关.锌的水平达到0.20 mmol/L时对丙酮酸盐脱氢酶(PDH)活性产生浓度依赖性抑制,PDH与台盼蓝阳性部分的增长相关,与培养细胞数量的下降相关(r=0.96,P=0.000 1).当细胞长期暴露在锌中达到0.15 mmol/L时,胆碱乙酰基转移酶和顺乌头酸酶的活性下降,细胞质内的乙酰辅酶A和整个细胞的ATP水平分别为38%、57%、35%和62%,但是没有引起线粒体乙酰辅酶A水平及糖酵解和三羧酸循环中其他酵素活性的改变.当同时加入锌至培养细胞,或其匀浆内,DL-α硫辛酰胺可减弱这一慢性或急性抑制效应.在慢性锌处理的细胞匀浆中,硫辛酰胺可克服PDH而不是顺乌头酸酶的抑制作用.得到的数据表明,锌的急性暂时性升高对PDH、顺乌头酸酶的活性和乙酰辅酶A的代谢产生可逆性抑制作用,当时间延长,则导致不可逆的酶失活,出现细胞活力下降和继发的胆碱能表型的抑制.
