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川芎嗪对肾间质纤维化模型大鼠Smad7和SnoN蛋白表达的影响
目的:探讨川芎嗪(tetramothylpyrazine,TMP)对单侧输尿管梗阻(unilatcral ureteral obstruction,UUO)所致大鼠肾间质纤维化的作用及机制.方法:雄性SD大鼠18只,随机分为3组:假手术组、模型组以及TMP组,每组6只.采用单侧输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化模型.川芎嗪(40mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗3周后取梗阻侧肾组织,分别进行HE和Masson染色,观察肾组织病理改变和胶原沉积的变化;采用放射免疫分析法检测Ⅲ型前胶原含量;应用酶联免疫吸附(ELIsA)法检测肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平;采用Western blotting检测肾组织中Smad7和Smad转录共抑制因子SnoN蛋白表达水平的变化.结果:与假手术组比较,镜下可见模型组大鼠肾小管萎缩,管腔扩张,肾间质中大量胶原纤维沉积,肾间质明显增宽;Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量显著增加;Smad7,SnoN蛋白表达水平显著下调.TMP组与模型组比较,肾组织病理改变明显改善,Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量明显降低,Smad7,SnoN蛋白表达水平明显上调.结论:川芎嗪具有显著抗肾间质纤维化的作用,其机制与降低肾组织中促纤维化细胞因子TGF-β1含量,同时恢复Smad逆向调控因子Smad7和SnoN蛋白表达水平有关.
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尿毒清颗粒调控TGF-β1/SnoN/Smads信号通路改善肾衰竭模型鼠肾间质纤维化的作用和机制
为了初步阐明尿毒清颗粒(uremic clearance granule,UCG)在体内调控转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/SnoN/Smads信号通路而改善肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的作用和机制,将15只大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组.采用腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾衰竭模型.造模后,3组大鼠分别给予UCG悬浊液或蒸馏水,共3周,其间,检测大鼠体重、24 h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,Upro);给药3周后,处死全部大鼠,抽取血液,摘除双肾,称重,观察肾脏外观和肾组织形态特征,检测血清生化指标和肾组织TGF-β1,SnoN,磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)以及Smad7蛋白表达量.结果表明,经UCG干预后,模型鼠一般情况,肾脏外观、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿酸(uric acid,UA)、白蛋白(albumin,Alb)、Upro以及肾组织形态均得到不同程度的改善;UCG还可以下调模型鼠肾组织TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达水平,上调SnoN,Smad7蛋白表达水平.总之,UCG可能在体内多靶点地调控TGF-β1/SnoN/Smad信号通路,从而,减少细胞外基质(extracellu-lar matrix,ECM)合成,延缓肾衰竭进展.
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小檗碱对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用
目的:研究小檗碱(BBR)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨BBR对DN大鼠早期肾脏损伤的作用及其可能机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、BBR低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)治疗组及阳性对照(依那普利1 mg· kg-1)治疗组,灌胃给药,每日1次,5周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24h尿微量白蛋白(24 hUmAlb)；光镜观察肾组织形态学的改变；免疫组织化学检测肾组织TGF-β1,SnoN,Smad2/3与Smad7蛋白表达；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1 mRNA表达.结果:与模型组比较,BBR各治疗组大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro及24 hUmAlb水平显著降低；肾组织形态学异常改善；TGF-β1蛋白及mRNA和Smad2/3蛋白表达显著减少,SnoN和Smad7蛋白表达显著增加.结论:BBR可通过Smad信号通路来维持DN肾组织TGF-β1/SnoN表达的动态平衡,从而改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN的发生与发展.
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MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化
目的 探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制.方法 体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10 μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组.Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(αt-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1 A1)的表达;RT-PCR和Westernblot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-β Ⅰ型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1 A1蛋白表达(P＜0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P＜0.05).TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P＜0.05).TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P＜0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P＜0.05).结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化.
关键词： 泛素-蛋白酶体抑制剂 成纤维细胞 转化生长因子β1 Smad7 SnoN -
蛋白酶体抑制剂MG132抑制糖尿病肾脏疾病机制的研究
目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132是否抑制糖尿病肾脏疾病(DKD)的发展及其可能的机 制.方法STZ复制糖尿病大鼠,随机分为糖尿病组(DM组,n = 9)、MG132治疗组(MG132组,n = 9),MG132组从第9周起予MG 132[0. 1 mg/(kg · d)]腹腔注射治疗糖尿病大鼠.同时设对照(Con组, n=9)组,检测生化指标,观察肾组织病理改变;Western blot检测肾组织SnoN、第10号染色体缺失的磷 酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 与Con组比较,DM组血糖[(5. 85±0. 86) vs (17. 49±1. 21)mmol/L,P=0. 00]、尿微量白蛋白/尿肌酐 比值(UACR)[(1. 11±0. 29) vs (16. 36±3. 06)mg/mmol,P=0. 00]、肾脏指数(KW/BW)[(6. 32±0. 49) vs (14. 54±1. 49 )mg/g,P=0. 00]明显增加,且肾小管间质纤维化病变明显,α-SMA[(0. 18±0. 03) vs (0. 33±0. 02),P=0. 002)增多,而 SnoN[(0. 87±0. 10) vs (0. 32±0. 11),P=0. 007)、PTEN[(2. 06± 0. 09) vs (1. 26士0. 06),P=0. 00]、E-cadherin[(l. 32±0. 06) vs (0. 50±0. 03),P=0. 00]减少;MG132 治疗后,UACR[(6. 74±3. 47)mg/mmol,P=0. 003]、KW/BW[(12. 43±1. 11)mg/g,P=0. 01]降低,纤维 化病变减轻,α-SMA[(0. 19±0. 05),P=0. 003]减少,SnoN[(0. 55士0. 09),P = 0. 033]、PTEN[(1. 73± 0. 15),P=0. 002]、E-cadherin[(1. 11±0. 10),P=0. 00]蛋白的表达增加.结论 MG132可能通过恢 复SnoN、PTEN蛋白水平抑制DKD的发展.
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硫辛酸对糖尿病肾脏疾病大鼠肾脏组织氧化应激和SnoN蛋白表达影响的研究
目的 探讨硫辛酸(ALA)对DKD大鼠肾脏的氧化应激和SnoN蛋白表达的影响.方法 24只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(T1DM)和ALA干预组(ALA),每组各8只,T1DM组和ALA组建立T1DM模型,模型建立成功2周后,ALA组给予ALA灌胃,NC组与T1DM组予同剂量生理盐水灌胃,于实验8周后处死大鼠,检测相应生化指标和氧化应激水平;Masson染色观察肾脏组织形态结构和阳性染色变化;RT-qPCR检测SnoN mRNA的表达;Western blot检测大鼠肾脏组织中SnoN、Smad泛素化调节因子2(Smurf2)蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测SnoN泛素化降解程度.结果 与NC组比较,T1DM组FPG[(5.58±1.02)vs(26.78±1.63)mmol/L]、Scr[(13.75±1.66)vs(34.00±2.78)μmol/L]、24 h尿蛋白(24 h UAlb)[(2.99±0.45)vs(20.74±1.07)mg/24 h]、丙二醛(MDA)含量[(2.16±0.19)vs(5.82±0.89)nmol/mg]、SnoN mRNA水平[(1.00±0.28)vs(3.33±0.29)]、Smurf2蛋白水平[(0.42±0.08)vs(1.79±0.27)]及SnoN泛素化降解升高(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性[(88.53±9.76)vs(33.41±7.11)U/mg]、过氧化氢酶(CAT)活性[(34.60±4.51)vs(14.36±2.29)U/mg]、SnoN蛋白表达水平[(2.64±0.53)vs(0.35±0.11)]降低(P<0.05),且T1DM组伴肾脏病变发生.与T1DM组比较,ALA组FPG[(26.78±1.63)vs(26.63±2.45)mmol/L,P>0.05]差异无统计学意义,Scr[(34.00±2.78)vs(22.57±1.57)μmol/L]、24 h UAlb[(20.74±1.07)vs(15.95±0.56)mg/24 h]、MDA[(5.82±0.89)vs(3.39±0.38)nmol/mg]、Smurf2蛋白水平[(1.79±0.27)vs(1.09±0.17)]及SnoN泛素化降解降低(P<0.05),T-SOD活性[(33.41±7.11)vs(50.99±7.52)U/mg]、CAT活性[(14.36±2.29)vs(27.30±3.17)U/mg]、SnoN蛋白水平[(0.35±0.11)vs(1.04±0.13)]升高(P<0.05),SnoN mRNA水平[(3.33±0.29)vs(3.13±0.20)]差异无统计学意义(P>0.05),且ALA组伴肾脏病变减轻.结论 ALA通过增强T1DM大鼠肾脏的抗氧化能力,减少Smurf2所介导SnoN的泛素化,恢复SnoN蛋白的表达,对DKD大鼠肾脏起保护作用.
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2型糖尿病大鼠肾组织Smurf2和SnoN表达的变化及生物学意义
目的 研究Smad泛素化调节因子2(Smurf2)和核转录共抑制因子(SnoN)在T2DM大鼠肾组织中表达的动态变化及意义.方法 建立T2DM模型,于成模8、12和16周处死.免疫组化和Western blot测肾组织Smurf2、SnoN、Ttal和Smad2蛋白的表达;RT-PCR测肾皮质SnoN mRNA.结果 DM大鼠肾组织Smurf2蛋白表达增多(P<0.01),而SnoN蛋白的表达随病程进展逐渐减少(P<0.05),两者呈显著负相关(r=-0.71,P<0.01);SnoN mRNA在各组肾组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 T2DM肾病发病过程中,Smurf2蛋白的表达增加可能参与了SnoN蛋白的降解过程.
关键词： Smad泛素化调节因子2 SnoN 糖尿病 2型 -
DHA预防百草枯诱导大鼠肺组织Smad7和SnoN表达的降低
目的 观察百草枯(paraquate,PQ)对大鼠肺组织中Smad7和SnoN蛋白表达的影响和DHA的干预作用.方法 体重200～220g的SPF级雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、模型组、DHA干预组和DHA对照组,每组10只.DHA干预组和DHA对照组,分别经灌胃给予DHA(500mg/kg.bw),正常对照组和模型组给予等体积玉米油,给予DHA第8日,DHA干预组和模型组一次性经灌胃给予50mg/kg.bw PQ染毒,正常对照组和DHA对照组均给予等体积生理盐水.PQ染毒后,持续给予DHA,于染毒后第35日,处死动物,取出肺组织,制备组织匀浆,测定还原性谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,同时制备肺组织切片,免疫组织化学方法观察肺组织中Smad7及SnoN 蛋白表达情况.结果 各组肺组织中GSH含量无显著差异(P＞0.05)；与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织中Smad7,SnoN蛋白表达水平显著下降(P＜0.01,P＜0.01)；DHA干预组大鼠肺组织中Smad7,SnoN蛋白表达水平明显高于模型组(P＜0.01,P＜0.05),与正常对照组无显著差别(P＞0.05).结论 DHA能够逆转PQ诱导肺纤维化负向调节因子Smad7和SnoN的减少,对PQ导致的肺组织损伤具有一定的预防性保护作用.
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硫辛酰胺对糖尿病大鼠肾组织中TAK1活性和SnoN蛋白稳定性的影响
目的 观察硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)对糖尿病(diabetes Mellitus,DM)大鼠肾组织中转化生长因子β激活激酶1(TGFβ-activated-kinase1,TAK1)活性和核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)蛋白稳定性的影响,探讨硫辛酰胺抗肾脏纤维化的作用及其可能机制.方法 复制糖尿病(DM)大鼠模型,分为对照组NC(normalcontrol,NC)、DM组及ALM治疗组,实验6周后处死全部大鼠,测定相应生化指标,观察肾组织病理改变;免疫组化和Western blot检测TAK1、p-TAK1 (Thr184/187) (phosphoryladon-TGF β-activated-kinase1 (Thr184/187),p-TAK1(Thr184/187)、SonN、转化生长因子-β 1(trans-forminggrowth factor-β 1,TGF-β 1)、胶原Ⅳ(collagen-Ⅳ)的蛋白水平;免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测SnoN泛素化水平.结果 (1)与NC组相比,DM组24h尿蛋白(urinary protein,UP)、血糖(blood glucose,BG)、甘油三酯triglyceride (TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)显著增高;ALM组以上指标较DM组显著降低.(2)苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)、Masson染色结果显示,DM组大鼠出现肾纤维化改变,ALM组肾纤维化病变明显改善.(3)与NC组相比,DM组大鼠肾组织TGF-β 1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)表达及SnoN泛素化水平增加,但SnoN蛋白水平降低;而与DM组相比,ALM组大鼠肾组织TGF-β1、Collagen Ⅰ、TAK1、p-TAK1 (Thr184/187)蛋白表达及SnoN泛素化水平降低,而SnoN蛋白水平有所恢复.结论 糖尿病大鼠肾组织中TAK1蛋白表达和活化水平均增加,可能通过介导SnoN磷酸化后被泛素化并降解,使TGF-β1致纤维化效应级联放大,促进DN的发生发展;而硫辛酰胺治疗后可通过减少TAK1的表达和磷酸化、降低SnoN泛素化水平,使得SnoN蛋白水平恢复而发挥抗肾脏纤维化效应.
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SnoN基因在三阴性乳腺癌中的表达及对其体外增殖能力的影响
目的 研究三阴性乳腺癌灶与癌旁组织中SnoN的表达变化,并利用小干扰RNA技术沉默SnoN基因的表达,观察SnoN低表达对于三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖及凋亡的变化.方法 通过免疫组化实验分别测定三阴性乳腺癌灶及癌旁组织中SnoN的表达变化;将MDA-MB-231细胞分为SnoN siRNA组、controlsiRNA组、None组,脂质体法将SnoN siRNA、control siRNA分别转染入对应组中,None组只加入等量的转染试剂,采用Western blot检测3组MDA-MB-231乳腺癌细胞SnoN蛋白表达的变化;CCK-8检测3组细胞增殖能力的改变,说明其与三阴性乳腺癌之间的关系.结果 免疫组化结果显示,三阴性乳腺癌灶中SnoN的表达明显高于癌旁组织,采用SiRNA沉默SnoN基因后,Western blot检测结果显示,SnoN siRNA组的蛋白表达水平与control siRNA组、None组比较显著下降(P<0.01);CCK-8检测结果表明SnoN siRNA组在转染后48、72、96 h后MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖能力显著低于相同时间点的2个对照组(P<0.01).结论 SnoN在与三阴性乳腺癌组织中高表达,沉默SnoN基因能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖,推测SnoN可能影响三阴性乳腺癌的发生和进展,也为临床上对三阴性乳腺癌的诊治提供新的靶点及思路.
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Smad核转录共抑因子在人近端小管上皮细胞转分化中的表达及作用
目的:观察Smad核转录共抑因子(SnoN)在TGF-β1致人近端小管上皮细胞转分化过程中的表达,探讨SnoN蛋白对TGF-β1所致的小管上皮细胞转分化的作用.方法:体外培养的人近端小管上皮细胞(HK-2),随机分为正常对照组、TGF-β1(5 ng/ml)组和TGF-β1(5 ng/ml)+MG-132(5 μmol/ml)组.Western-blot检测细胞中SnoN蛋白水平的改变和Smad2/3磷酸化水平的改变;半定量RT-PCR方法观察细胞中SnoN mRNA表达的改变.免疫荧光检测间充质细胞标记物α-SMA的表达.结果:Western-blot的结果显示:(1)TGF-β1作用于细胞,SnoN蛋白表达迅速减少,10 min为对照组的38%,并呈时间依赖进行性减少,60 min较0 min降低89%(P<0.01),24 h有所恢复但仍较0 min明显降低(P<0.01);TGF-β1+MG-132组中SnoN蛋白表达与对照组差异无统计学意义,与TGF-β1组相比,SnoN蛋白水平明显上调.(2)半定量RT-PCR显示:TGF-β1作用于细胞后,与SnoN蛋白表达不同,SnoN mRNA迅速升高,60 min其表达增高近1倍(与0 min比较,P<0.01);TGF-β1+MG-132组中SnoNmRNA的表达与TGF-β1组差异无统计学意义.(3) TGF-β1诱导细胞10 min即可引发Smad2/3磷酸化(与0 min比较,P<0.01),随着作用时间的延长,细胞中磷酸化的Smad2/3蛋白表达水平逐渐升高,TGF-β1+MG-132组中,Smad2/3磷酸化蛋白的表达减少80 %(P<0.01).(4)TGF-β1作用于细胞24 h后免疫荧光检测到重新表达的α-SMA,TGF-β1+MG-132组α-SMA的表达被抑制.结论:TGF-β1可诱导SnoN mRNA表达上调,但SnoN蛋白的表达遭遇泛素系统的降解显著减少,SnoN蛋白水平的下调可能是TGF-β1导致小管上皮细胞纤维化作用的必要条件.
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SnoN的基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用
SnoN是一种核转录共抑制因子,在细胞核和细胞浆中均能阻断TGFβ1/Smad信号转导,是该信号通路的重要负调控因子之一.SnoN在肝纤维化发生发展中的作用已有研究报道,并日益引起人们的关注.因此,本文回顾了有关SnoN方面的研究进展,对其基本特征、生物学功能及其在肝纤维化中的作用作一综述.
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磷酸化Smad3对糖尿病大鼠肾组织SnoN表达的影响
目的 探讨磷酸化Smad3(p-Smad3)在糖尿病(DM)大鼠肾组织SnoN蛋白表达的影响.方法 链脲佐菌素诱发大鼠DM模型,分为DM2、4、8、12、16和24 w组(n=6),每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6).生化方法测血糖和24 h尿蛋白;PAS染色观察肾组织病理学改变;免疫组化检测肾组织SnoN、Smad2/3和E3泛素连接酶APC10蛋白的表达;Western印迹方法动态观察肾皮质SnoN、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad2/3蛋白的表达;RT-PCR检测SnoN mRNA.结果 DM各组大鼠血糖和24 h尿蛋白较正常对照组均显著升高; SnoN和Smad2/3阳性染色主要见于肾小管上皮细胞,DM 2 w起 Smad2/3和 p-Smad3蛋白表达多于正常对照组,DM 4 w起 SnoN蛋白少于正常对照组;各DM组肾组织TGF-β1、Smad2/3和APC10 蛋白表达均多于正常对照组;DM各组SnoN mRNA与正常组相比差异无统计学意义.结论 糖尿病肾病发病过程中p-Smad3可能与APC一起介导了SnoN蛋白的泛素化降解过程.
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SnoN蛋白对心肌纤维化的影响
心肌纤维化是心血管系统疾病发展到一定阶段的共同病理变化,是心脏功能减退、恶性心律失常发生发展的基础.转化生长因子-β1(TGF-β1)是促进心肌纤维化的重要细胞因子,而核转录共抑制因子SnoN能通过Smads蛋白抑制TGF-β1信号通路,从而抑制心肌纤维化的发生发展.
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小鼠肾组织中SnoN蛋白表达水平与肾小管上皮细胞转分化的关系
目的:通过观察正常和单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾组织中转录共抑制因子SnoN表达水平的变化,探讨SnoN在肾小管上皮细胞转分化的作用.方法:采用结扎雄性CD-1小鼠左侧输尿管的方法建立UUO动物模型.设假手术小鼠为正常对照组.应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)水平,酸水解-比色法测定肾组织内胶原的含量.借助蛋白印迹技术,检测肾组织中SnoN和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的变化.以人肾小管上皮细胞(HKC)为体外研究对象,观察TGF-β1对其SnoN表达的直接作用.结果:与假手术组小鼠相比,UUO小鼠术后3天肾组织中SnoN蛋白的表达量即明显降低,术后7天时进一步降为对照组的16%.同时,UUO小鼠肾组织TGF-β1水平、α-SMA蛋白表达量,及其胶原的含量亦随着病程的增加而显著增加.相关分析结果表明,SnoN的减少程度与肾组织内TGF-β1水平、α-SMA的表达和胶原的聚积密切相关(P＜0.01).此外,HKC细胞培养实验结果表明,TGF-β1减低该细胞表达SnoN蛋白的作用先于α-SMA蛋白的变化.结论:肾脏SnoN表达水平与肾纤维化密切相关,可能通过干扰TGF-β1所致的小管上皮细胞转分化作用影响肾组织的纤维化过程.
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PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖
目的:探讨前列腺素E<,2>(prostaglandin E<,2>,PGE<,2>)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制.方法:用PGE<,2>、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化.结果:10 μmol/L PGE<,2>处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10 μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10 μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05).细胞增殖能力也上升了4.4%(P<0.05);用500 μmol/L cAMP拟似物dbcAMP处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平较对照组上升了90.1%(P<0.05);而PKA抑制剂H89阻断Forskolin的作用后,SnoN蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较Forskolin处理组分别下降了9.1%、14.1%,20 μmol/L H89处理CCLP1细胞后,细胞增殖能力较对照组下降了45.7%(P<0.05).结论:PGE<,2>可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞SnoN的表达,从而促进CCLJP1细胞的增殖.
关键词： 胆管上皮癌 PGE2 EP2受体 SnoN cAMP-PKA-CREB -
下调SnoN基因表达对HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的 通过小干扰RNA(siRNA)下调人肝癌HepG2细胞中SnoN基因的表达,探讨SnoN对HepG2细胞增殖、凋亡等生物学功能的影响及其意义.方法 设计并化学合成3条靶向SnoN的siRNA序列,采用阳离子脂质体瞬时转染的方法将干扰序列转染至HepG2细胞内,采用RT-PCR和Western blot方法,检测转染后的抑制效果并筛选出一条抑制效果好的干扰序列,然后采用CCK-8法和流式细胞术检测SnoN基因表达下调后HepG2细胞增殖、凋亡的变化.结果 3条siRNA均对SnoN的表达有抑制作用,以siRNA-C抑制效果好.下调SnoN基因表达后,HepG2细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05).结论 靶向SnoN的siRNA可有效抑制SnoN基因的表达,进而使HepG2细胞的生长受到抑制、细胞凋亡增加,表明SnoN基因可能与肝癌细胞的增殖与凋亡有关.
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α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能的机制
目的 观察α-硫辛酸(ALA)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 复制糖尿病大鼠模型,分为糖尿病组(DM组)、糖尿病硫辛酸组(ALA组),并设置正常对照组(NC组).实验6周后处死全部大鼠,测定相应生化指标和相关氧化应激指标;HE、Masson染色观察肾组织的形态变化;免疫组织化学和Western blot检测大鼠肾组织中核转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子(TGF-β1)、Collagen I、Collagen IV表达水平.结果 ①DM组大鼠肾重/体重、血糖、血总胆固醇、三酰甘油、24 h尿蛋白均高于NC组,ALA组除了血糖外以上其余指标均低于DM组.②DM组总抗氧化物酶活性(T-AOC)、总超氧化物歧化酶活性(T-SOD)、过氧化氢酶活性(CAT)低于NC组,丙二醛含量(MDA)增多;ALA组T-AOC、T-SOD、CAT活性高于DM组,MDA含量降低.③病理检查显示,DM组大鼠出现肾纤维化改变,ALA组肾纤维化病变明显改善.④免疫组织化学和Western blot结果显示:与NC组相比,DM组大鼠SnoN蛋白水平降低,TGF-β1、Collagen I和Collagen IV增高;与DM组相比,ALA组SnoN蛋白水平升高,TGF-β1、Collagen I和Collagen IV降低.结论 α-硫辛酸可以增强DM大鼠肾脏的抗氧化能力,上调SnoN蛋白的表达,从而抑制TGF-β1信号通路而减少细胞外基质沉积,对糖尿病大鼠肾脏起到保护作用.
关键词： 糖尿病肾病 TGF-β1信号通路 SnoN 氧化应激 α-硫辛酸 -
人增生性瘢痕成纤维细胞中SnoN的表达及其参与增生性瘢痕形成的机制
目的 探讨人增生性瘢痕Fb中SnoN的表达及其参与增生性瘢痕形成的机制. 方法 收集笔者单位2013年1-10月收治的8例烧伤后瘢痕增生需行手术治疗患者的增生性瘢痕组织及其手术切除的全层皮肤供皮区的正常皮肤组织.组织块培养法分离人增生性瘢痕Fb和正常皮肤Fb,并进行传代培养,取第3～5代细胞进行以下实验.(1)取增生性瘢痕Fb和正常皮肤Fb,蛋白质印迹法检测2种细胞中SnoN的蛋白表达.(2)另取增生性瘢痕Fb和正常皮肤Fb,RT-PCR法检测2种细胞中SnoN mRNA表达.(3)另取增生性瘢痕Fb和正常皮肤Fb,加入10 ng/mL TGF-1刺激30 min和1、2、6h后,同前检测未刺激及刺激后2种细胞中SnoN的蛋白及mRNA表达.对数据行单因素方差分析、独立样本￡检验. 结果 (1)增生性瘢痕Fb中SnoN的蛋白表达量为0.020±0.003,明显低于正常皮肤Fb的0.032±0.005(t =7.19,P＜0.05).(2)增生性瘢痕Fb中SnoNmRNA表达量为0.407±0.157,与正常皮肤Fb的0.339±0.095无明显差异(t=-1.29,P＞0.05).(3)正常皮肤Fb中SnoN蛋白表达量在TGF-β1刺激下呈时间依赖性增高,刺激30 min和1、2、6h,细胞中SnoN蛋白表达量均明显高于未刺激细胞(t值为2.27 ～27.89,P值均小于0.05).增生性瘢痕Fb中SnoN蛋白表达量在TGF-β1刺激下呈时间依赖性降低,刺激30 min和1、2、6h,细胞中SnoN蛋白表达量均明显低于未刺激细胞(t值为10.80 ～13.85,P值均小于0.05).(4)正常皮肤Fb和增生性瘢痕Fb中SnoN mRNA表达量在TGF-p1刺激下均呈时间依赖性增高,2种细胞刺激30 min和1、2、6h,其SnoN mRNA表达量均明显高于未刺激细胞(t值为18.16 ～58.22,P值均小于0.05). 结论 增生性瘢痕Fb中SnoN蛋白表达减少,导致其对TGF-β1信号抑制作用减弱,从而放大了TGF-β1信号,可能参与了增生性瘢痕的形成.
