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复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用
目的:研究复方黄连胶囊(CRCC)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨CRCC对DN大鼠早期肾损伤的作用及其可能机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常组、模型组、消渴丸组(0.8 g· kg-1)、依那普利组(1 mg·kg-1)与CRCC低、中、高剂量组(生药含量分别为1.09,2.18,4.36 g·kg-1),灌胃给药,每天1次,5周后生化指标检测空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胰岛素(Ins)、24h尿蛋白(24 h Upro)及24h尿微量白蛋白(24 h UmAlb);光镜观察肾组织形态学的改变;免疫组化法检测肾组织TGF-β1,BMP-7,Smad2/3,Smad1/5及Smad7蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1和BMP-7 mRNA表达.结果:与模型组比较,各CRCC治疗组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro和24 h UmAlb水平,改善肾组织病理形态学异常,TGF-β1与Smad2/3蛋白表达减少,BMP-7,Smad1/5与Smad7蛋白表达增加,TGF-β1 mRNA表达减少,但BMP-7 mRNA表达未增加.结论:CRCC可改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与通过Smad信号通路调控DN肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡有关.
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小檗碱对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用
目的:研究小檗碱(BBR)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨BBR对DN大鼠早期肾脏损伤的作用及其可能机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、BBR低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)治疗组及阳性对照(依那普利1 mg· kg-1)治疗组,灌胃给药,每日1次,5周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24h尿微量白蛋白(24 hUmAlb)；光镜观察肾组织形态学的改变；免疫组织化学检测肾组织TGF-β1,SnoN,Smad2/3与Smad7蛋白表达；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1 mRNA表达.结果:与模型组比较,BBR各治疗组大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro及24 hUmAlb水平显著降低；肾组织形态学异常改善；TGF-β1蛋白及mRNA和Smad2/3蛋白表达显著减少,SnoN和Smad7蛋白表达显著增加.结论:BBR可通过Smad信号通路来维持DN肾组织TGF-β1/SnoN表达的动态平衡,从而改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN的发生与发展.
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Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用
目的 研究Smad信号通路在BMP-2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制.方法 从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导向心肌定向分化.Western blotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化.RT-PCR检测诱导前后细胞内GATA-4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达.结果 BMP-2诱导后15 min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30 min～1 h表达明显增加,1 h后开始降低,4 h呈低表达.BMP-2诱导后15 min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30 min胞质和胞核均见表达,1 h主要在胞核内表达.BMP-2诱导后2周,细胞明显表达GATA-4和cTnT mRNA.诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态.用SB203580抑制Smad信号后,GATA-4和cTnT mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显.结论 Smad信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用.
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Smad蛋白抑制剂SIS3对细粒棘球蚴原头节的作用研究
目的 研究Smad蛋白抑制剂SIS3对体外细粒棘球蚴原头节的影响. 方法 建立体外细粒棘球蚴培养体系,以不同浓度(12.5、25、50和100μmol/L)、不同作用时间(24、48、72和96 h)对原头节进行药物(Smad蛋白抑制剂SIS3)干预试验,伊红染色和扫描及透射电镜观察不同浓度药物干预过程中原头节活力及虫体超微结构的变化. 结果 SIS3干预48 h,50和100 μmol/L SIS3组与空白对照组原头节活力显著下降;作用96 h,50和100 μmol/L SIS3组原头节活力分别下降(10.06±2.79)％和(19.49±2.63)％.随着药物浓度的增加,扫描电镜观察原头节体表绒毛排列紊乱,吸盘结构变形,顶突小钩脱落;透射电镜观察药物组原头节表层微毛减少或消失,合胞体带变薄,胞浆空泡化,虫体内部出现脂滴等. 结论 Smad信号通路抑制剂SIS3对体外细粒棘球蚴有抑制作用,为治疗细粒棘球蚴病提供了理论基础.
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张力性刺激对人髓核细胞表达软骨层间蛋白的调控及机制
目的:探索张力性刺激对人椎间盘髓核细胞分泌软骨层间蛋白(cartilage intermediate layer protein,CILP)的影响及其机制.方法:选取2016年6月在我院因创伤性骨折行L4/5椎间盘摘除及相邻椎体融合手术的1例38岁男性患者的髓核组织作为细胞来源,术前MRI示该节段椎间盘组织改良Pfimnann分级为Ⅱ级,分离培养其中的髓核细胞并传代至第3代,进行力学实验.使用Flexcell 5000系统通过电脑控制气压变化来使载有细胞的塑料膜发生形变,进而对膜载体上的细胞给予不同强度、时长的张力性力学加载.实验组分为4组,均以10％的拉伸量为刺激强度,给予不同时长(6h、12h、24h、48h)的刺激,空白对照组不给予任何刺激.利用RT-qPCR技术检测各组CILP的基因表达量,选出表达变化为明显的一组,以该组的刺激时长为限,再将实验组分为3组,分别给予不同刺激强度(5％、10％、20％)的张力刺激,空白对照组不给予任何刺激,利用RT-qPCR技术检测各组CILP的基因表达.选取相比较于对照组CILP增长效应明显的力学强度和时长作为刺激条件,测定髓核细胞在该实验条件下smad3的磷酸化程度,并对髓核细胞预先给予smad3磷酸化的特异性抑制剂SIS3处理后再置于同一力学条件下,以RT-qPCR检测CILP的基因表达量,以此观察smad信号通路是否介导了张力性刺激对于髓核细胞CILP表达的调控.实验结果使用配对t检验以及单因素方差分析进行组间比较.结果:RT-qPCR结果显示,相较于空白对照组,不同刺激时长的10％张力性刺激均明显下调了CILP的表达,其中在刺激48h后对CILP的抑制效应达到大(P＜0.05);5％的张力性刺激48h后髓核细胞的CILP基因相对表达量与对照组比较无统计学差异(D0.05),10％的张力刺激48h明显降低CILP的表达(P＜0.05),20％的张力刺激48h显著提高CILP表达量(R0.05)且smad3的磷酸化水平相对于空白对照组明显增高;相对于只给予20％张力刺激的对照组,先给予SIS3预处理再给予相同力学刺激的实验组的CILP表达水平显著下调(P＜0.05).结论:张力性刺激调控髓核细胞的CILP表达,调控效应随着刺激时长和刺激强度的变化而不同;smad信号通路参与高强度的张力性刺激对CILP的上调效应.
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ICU重症感染患者病原菌耐药性分析对Smad通路蛋白影响研究
目的 探讨医院ICU重症感染患者病原菌耐药性及对Smad通路蛋白的影响,为临床治疗提供参考.方法 选取医院2012年5月-2014年8月诊治的190例ICU重症感染患者设为感染组,以医院ICU180例未感染患者为未感染组,同期180名健康体检者为对照组;分析感染患者感染病原菌分布及耐药性,对比3组患者血清中Smad通路蛋白的水平变化.结果 190例医院ICU重症感染患者标本分离出病原菌200株,其中革兰阳性菌85株占42.5％,革兰阴性菌115株占57.5％;革兰阳性菌对红霉素、头孢西丁、青霉素、四环素及阿莫西林耐药性较强,但对万古霉素较敏感;革兰阴性菌对头孢唑林、头孢呋辛、头孢西丁及哌拉西林和庆大霉素耐药性较强,但对亚胺培南均较敏感;感染组患者血清中Smad1、Smad2及Smad3水平明显高于健康对照组和未感染组患者,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 医院ICU重症感染患者耐药菌感染多发,且感染后患者血清中Smad蛋白水平明显升高.
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小儿泌尿外科长期置管患儿病原菌分布与对Smad通路蛋白的影响研究
目的 对小儿泌尿外科长期置管患儿病原菌分布及对Smad通路蛋白的影响进行研究,为临床治疗提供参考.方法 对医院2010年3月-2014年3月诊治的120例小儿泌尿外科长期置管患儿的临床资料进行分析,应用全自动微生物鉴定仪对病原菌进行鉴定,以同期健康体检儿童260名为对照组,小儿泌尿外科长期置管后未感染患儿260例为未感染组,酶联免疫吸附测定法分析血清中Smad1、Smad2和Smad3蛋白的表达;采用WHONE5.5软件和SPSS19.0软件对数据进行统计分析.结果 感染患儿共分离出病原菌120株,其中革兰阳性菌65株占54.2％,以表皮葡萄球菌、G型溶血型链球菌和酿脓链球菌为主,革兰阴性菌55株占45.8％,以阴沟肠杆菌和铜绿假单胞菌为主;小儿泌尿外科长期置管患儿感染后引起血清中Smad1、Smad2和Smad3蛋白表达升高,且感染组患儿的表达明显高于对照组和未感染组患儿,差异均有统计学意义(P＜0.05);小儿泌尿外科长期置管感染后引起患儿血清中TGFβ、VEGF及白细胞介素1蛋白表达升高,且感染组患儿的表达明显高于对照组和未感染组患儿,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小儿泌尿外科长期置管患儿容易受到病原菌感染,且患儿感染后血清中TGFβ-Smad通路蛋白表达明显升高.
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硫化氢下调TGF-β1/Smad2/3通路对大鼠心肌细胞胶原合成的影响
目的 探讨气体分子硫化氢(H2S)对大鼠心肌细胞胶原合成的调节作用及可能机制.方法 将大鼠心肌细胞H9C2随机分为4组:正常对照组(加入DMEM培养基)、硫氢化钠(NaSH)组(加入终浓度为2×10-4mol/L的H2S供体NaHS培养)、TGF-β组(加入终浓度为10ng/ml TGF-β1培养)、TGF-β+ NaHS组(用含2×10-4mol/L NaHS的DMEM培养基培养30min,再加入10ng/ml TGF-β1培养).培养1h后,采用Western blotting检测心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平,培养72h后采用免疫荧光染色法观察心肌细胞的Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果 与正常对照组比较,NaHS组心肌细胞p-Smad2和pSmad3蛋白表达水平无明显差异,而TGF-β组心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达明显增多,且Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强.与TGF-β组比较,TGF-β+NaHS组心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达明显下降,Ⅰ型胶原蛋白表达明显减弱.结论 H2S可抑制心肌细胞胶原合成,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad2/3信号转导通路有关.
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γ射线对肺成纤维细胞中Smad通路信号转导的影响及其意义
目的 检测不同剂量γ射线照射对肺成纤维细胞中Smad通路信号转导的影响并探讨其意义.方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用3,5和8 Gyγ射线照射,通过免疫组织化学、免疫印迹和免疫共沉淀等方法检测照射后Smad3,4和7蛋白的表达部位和表达水平的变化及Smad3与Smad4相互作用的变化. 结果:3,5和8 Gyγ射线照射后,Smad3,4和7蛋白表达水平无显著改变,Smad3与Smad4复合物的形成增加,部分大鼠肺成纤维细胞中Smad3和Smad4主要表达于细胞核. 结论:一定剂量的γ射线能促进大鼠肺成纤维细胞中Smad3与Smad4的相互结合及核转位,对Smad通路具有活化作用.
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亚油酸调控HepG2细胞PAI-1基因表达的机制研究
目的:探讨亚油酸对HepG2细胞PAI-1基因表达的影响和调控机制.方法:不同浓度亚油酸刺激HepG2细胞,RT-PCR法检测PAI-1 mRNA水平.构建四个含PAI-1启动子序列从-804至+17间系列缺失体片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞,初步确定位于PAI-1启动子序列-804至+17之间的Smad3/4结合元件(SBE)具有调控作用,采用重叠PCR法对该元件进行定点突变并构建相应重组质粒,转染HepG2细胞.Western Blot法检测亚油酸诱导下HepG2细胞中Smad3和smad4的蛋白表达水平.结果:①50μmol/L及100μmol/L亚油酸可显著增加PAI-1 mRNA的表达,100 μmol/L亚油酸可明显上调PAI-1的转录活性.②亚油酸诱导下,PAI-1启动子-734/-731处SBE缺失后,PAI-1荧光素酶活性显著降低.③亚油酸可以显著增加HepG2细胞中Smad13和smad4的蛋白表达.结论:亚油酸可从转录水平上调HepG2细胞中PAI-1基因的表达,PAI-1启动子上的Smad3/4结合元件即SBE参与亚油酸对HepG2细胞PAI-1基因的转录调控,这一过程涉及到smads蛋白及其介导的Smad信号转导通路.
关键词： 亚油酸 纤溶酶原激活物抑制剂-1 HepG2细胞 Smad信号通路 -
积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响
目的:通过细胞转基因技术,获得稳定表达转化生长因子β1(TGF-β1)的系膜细胞(MC)克隆,观察积雪草(CA)对Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白1V表达及Smad 2/3磷酸化的影响.方法:采用脂质体的方法将TGF-β1表达质粒转入MC细胞,采用G418筛选并建立稳定表达TGF-β1的细胞株.将MC细胞株分为3组:对照组(未转染TGF-β1的MC+ RPMI 1640+ 10％正常大鼠血清),TGF-β1转染组(稳定表达TGF-β1的MC+ RPMI 1640+10％正常大鼠血清),积雪草(CA)组:稳定表达TCF-β1的MC+RPMI 1640+ 10％含高浓度CA的大鼠血清.实验重复5次ELISA法检测各组培养上清中TGF-β1和胶原Ⅳ的含量;RT-PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、Smad7的mRNA表达水平;Western印迹法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、p-Smad 2/3、Smad 7、胶原Ⅳ的蛋白质水平.结果:TGF-β1转染组细胞上清液中的TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平显著升高,积雪草能显著降低TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平;TGF-β1转染组细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平均显著升高,而CA可显著降低MC细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平;TGF-β1转染组细胞中的Smad 7mRNA水平显著降低,而CA能使Smad 7的mRNA水平显著升高.结论:稳定表达TGF-β1的MC细胞能激活TGF-β1/Smad信号通路,并引起胶原蛋白Ⅳ表达增加,而CA通过抑制此通路的激活,进而抑制胶原蛋白Ⅳ的表达而减缓糖尿病肾病(DN)的发生.
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Smad信号通路在糖尿病肾病的作用
糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重和常见的慢性并发症之一,是终末期肾衰竭的主要原因之一,发病机制目前尚不清楚.转化生长因子-β(TGF-β)在DN发病中的作用不容忽视.
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骨形态发生蛋白-9诱导牙周膜干细胞成骨分化及信号通路的研究进展
牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells， PDLSCs）是牙周膜中一种具有自我增殖与多向分化潜能的干细胞，已证实其运用于牙周组织工程可显著增强牙周组织的形成和修复能力。骨形态发生蛋白（ bone morphogenetic proteins， BMPs）是转化生长因子-β（ transforming growth factor-β， TGF-β）超家族成员，BMP9作为BMPs家族强的成骨生长因子之一，已证实其在与PDLSCs相互作用中通过BMP-Smad蛋白和BMP-丝裂原活化蛋白激酶2条途径诱导PDLSCs成骨分化。这些结论对于治疗牙周疾病、抑制骨破坏疾病的进展、以及阐明成骨原因等有着重要意义。文中就BMP9对PDLSCs在成骨分化中作用和功能的影响以及信号通路方面的新研究作一综述。
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杨梅素阻断转化生长因子-β诱导的心脏成纤维细胞活化增殖和分泌
目的 有关杨梅素能否抑制心脏成纤维细胞的激活和功能进而抑制心肌纤维化的报道不多.文章探讨杨梅素对心脏成纤维细胞活化增殖和分泌功能的影响,以及可能的分子机制. 方法 分离培养SD大鼠乳鼠成纤维细胞,采用转化生长因子(TGF-β)刺激诱导成纤维细胞的活化增殖和分泌.采用不同浓度的杨梅素(1,3,10,30,100 μmol/L)孵育成纤维细胞24 h,观察其对心脏成纤维细胞活化,增殖和分泌的影响;采用CKK8试剂盒检测细胞增殖活性;采用RT-PCR检测促纤维化因子的转录水平;采用免疫荧光染色检测α-SMA蛋白的表达;采用免疫印迹检测可能的信号蛋白的改变. 结果 免疫荧光结果显示:与对照组比较,TGF-β组、30 μmol/L杨梅素+TGF-β组、100 μmol/L杨梅素+TGF-β组成纤维细胞α-SMA表达的荧光亮度明显增强(P<0.05);与TGF-β组比较,30 μmol/L杨梅素+TGF-β组、100 μmol/L杨梅素+TGF-β组α-SMA表达的荧光亮度减弱(P<0.05). RT-PCR结果显示:TGF-β组、30 μmol/L杨梅素+TGF-β组、100 μmol/L杨梅素+TGF-β组刺激成纤维细胞48h,成纤维细胞I型胶原、III型胶原、纤维连接蛋白和结缔组织生长因子表达的转录水平明显高于对照组(P<0.05);而30μmol/L杨梅素+TGF-β和100μmol/L杨梅素+TGF-β组细胞中上述促纤维化因子的转录水平均低于TGF-β组(P<0.05).免疫印迹结果显示:与对照组比较,TGF-β组、30 μmol/L杨梅素+TGF-β组、100 μmol/L杨梅素+TGF-β组成纤维细胞smad2、smad3的磷酸化水平升高(P<0.05),TGF-β组smad4表达增加(P<0.05);与TGF-β组smad2、smad3磷酸化水平和smad4表达(3.24±0.01、3.65±0.01、0.69±0.01)比较,30μmol/L杨梅素+TGF-β组(2.11±0.02、2.98±0.03、0.45±0.03)和100μmol/L杨梅素+TGF-β组(1.98±0.02、1.56±0.028、0.41±0.02)均明显降低(P<0.05). 结论 杨梅素可以通过抑制smad信号通路阻断TGF-β诱导的成纤维细胞活化增殖和分泌.
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TGF-β/Smad、p38MAPK及JNK/SAPK信号通路在糖尿病肾病发生发展中作用机制的研究进展
糖尿病肾病(DKD)是糖尿病常见的微血管并发症,由细胞因子介导的相关信号传导通路在DKD损伤过程中发挥显著作用,其中TGF-β/Smad、p38MAPK、JNK/SAPK是DKD发生发展过程中重要的信号分子.TGF-β/Smad是诱导足细胞凋亡、损伤,介导肾小球硬化及肾间质纤维化的经典信号通路.p38MAPK、JNK/SAPK信号通路可以通过氧化应激、触发炎症因子及活化炎症途径等过程,参与足细损伤,导致肾脏功能性及器质性改变,引起蛋白尿和肾小球硬化.
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参松养心胶囊对心肌梗死模型小鼠心脏重构的影响
目的：探讨参松养心胶囊对小鼠心肌梗死后心脏重构的影响及其可能的分子机制。方法 C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为假手术组( n＝10),模型对照组( n＝20)和参松养心组( n＝20)。模型对照组和参松养心组采用冠状动脉左前降支结扎建立心肌梗死模型,从手术后第2天起参松养心组灌胃参松养心胶囊内容物400 mg.kg－1,观察小鼠死亡率；4周后超声心动图检测小鼠心脏功能；病理染色检测小鼠心肌梗死面积；反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)检测小鼠心肌重构标志物及纤维化相关蛋白的表达水平；Western blotting筛选可能的分子机制。结果与模型对照组比较,参松养心胶囊能显著降低心肌梗死后小鼠死亡率(P<0.05),同时减少小鼠心肌梗死面积(P<0.05)。参松养心组心脏重构标志物的mRNA表达量明显减少,而且纤维化相关蛋白的表达(Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、结缔组织生长因子、转化生长因子β)显著低于模型对照组；Western blotting结果显示参松养心胶囊明显降低smad 3的激活,降低smad 4的表达。结论参松养心胶囊能改善心肌梗死后的心脏重构,其机制可能是通过阻断smad信号通路而发挥作用。
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TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化
目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用.方法:用不同浓度(0,10,25,50,100 ng/ml)IL-17刺激A549细胞48 h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达.将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17 (100 ng/ml)组、IL-17+SB431542组.48 h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达.结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50 ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/mlIL-17组时表达上调;TGF-β1在25 ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关.与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加.结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化.
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全反式维甲酸对转化生长因子β1诱导肾小球系膜细胞环氧化酶2表达及Smad信号通路的影响
转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.
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大鼠肾草酸钙结石致肾脏损伤的Smad通路参与作用研究
目的:对大鼠肾草酸钙结石致肾脏损伤的Smad通路参与作用进行研究,为临床治疗提供参考.方法:清洁级SD大鼠随机分为3组:对照组、肾草酸钙结石模型组和转化生长因子(TGF) β-Smad通路抑制剂吡非尼酮组.乙二醇+α羟基维生素D3为诱石剂复制肾草酸钙结石模型,吡非尼酮组大鼠给予吡非尼酮灌胃治疗,分析3组大鼠血清中肌酐、尿素氮及24 h尿草酸和肾组织钙水平,荧光定量PCR法检测肾脏组织中Bax/Bcl2蛋白和Caspase3蛋白表达,检测肾脏组织中TGFβ、Smad1、Smad2和Smad3蛋白表达.结果:与对照组大鼠相比,模型组大鼠血清中肌酐、尿素氮及24 h尿草酸水平明显升高(P＜0.01),Bax蛋白和Caspase3蛋白mRNA明显升高而Bcl2水平明显降低(P＜0.01),且TGFβ、Smad1、Smad2和Smad3蛋白表达明显增强(P＜0.01),而吡非尼酮能够有效的恢复上述指标的异常.结论:激活的TGFβ-Smad信号转导通路参与了大鼠肾草酸钙结石损伤病理学过程.
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Smad信号通路在骨形成蛋白9促进牙囊干细胞成骨向分化中的研究
目的 探索骨形成蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)在诱导大鼠牙囊干细胞(rat dental follicle stem cells,rDFCs)成骨向分化过程中的Smad信号通路调控机制.方法 重组腺病毒骨形成蛋白9 (recombinant adenoviruses expressing BMP9,Ad-BMP9)转染纯化的第3代rDFCs后,Realtime qPCR、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性检测观察BMP9调节rDFCs早期及中晚期成骨能力,茜素红S染色检测钙盐沉积,Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平.结果 BMP9促进rDFCs成骨因子表达:成骨转录因子Runx2、成骨细胞特异性转录因子Osterix、ALP及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在BMP9刺激组较空白组均明显升高(P＜0.05),钙盐沉积及钙结节形成也明显多于空白组,且BMP9促进了Smad1/5/8蛋白磷酸化水平升高.结论 BMP9通过激活Smad信号通路,提高Smad1/5/8蛋白磷酸化水平从而促进早中晚期成骨因子及碱性磷酸酶表达,促进了rDFCs成骨向分化.
