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地骨皮煎煮液对多囊卵巢大鼠胰岛素信号传导途径中PI3K/PKB分子表达的影响
实验主要观察地骨皮煎煮液对多囊卵巢模型(PCOS)大鼠胰岛素信号传导途径中PI3K,PKB分子表达的影响.大鼠按Poretsky方法建立PCOS模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、二甲双胍片组(0.45 g·kg-1)、地骨皮高、低剂量组(10,2.5 g·kg-1).各组大鼠分别灌胃相应的药物14 d;另外设置空白对照组,给予生理盐水.给药14 d后大鼠通过阴道涂片观察发情周期,并测定体重,血清中睾酮(T)和空腹胰岛素(FINS)水平及卵巢组织PI3K,PKB的mRNA及其磷酸化蛋白水平.结果可见,与正常组比较,模型组大鼠排卵周期不规则,体重增加明显,血清T及空腹FINS水平显著提高;同时卵巢组织PI3K,PKB的mRNA及其磷酸化蛋白表达水平显著下降.地骨皮干预后能维持PCOS大鼠动情周期、降低大鼠体重增加,显著提高卵巢组织中PI3K及PKB的mRNA及其磷酸化蛋白表达水平,且呈现明显的剂量依赖关系.西药二甲双胍片也有较好的治疗作用.地骨皮能缓解PCOS大鼠体重增加,降低血清激素水平,对PCOS大鼠一定程度上具有恢复排卵作用,其机制可能与PI3K/PKB通路有关.
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PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用
目的 探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用.方法 体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性.结果 与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异(P＞0.05);Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降(P＜0.01),PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调(P＜0.01),而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调(P＜0.01),MPF活性明显下降(P＜0.01).结论 甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响.
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高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响
目的:探讨高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响.方法:40只8周龄SD大鼠适应训练后,随机分为低住安静组(LC)、低住低练组(LoLo)、高住安静组(HC)和高住低练组(HiLo).高住组每天低氧暴露12 h(氧浓度13.6％,相当于海拔3500 m),低练组进行35 n/min、1 h/d、5d/周、共4周的跑台训练.采用实时荧光定量PCR检测大鼠腓肠肌PI3K、PKB、mTOR mRNA表达,以双因素方差分析进行统计.结果:低氧和运动均显著提高大鼠骨骼肌PI3K和PKB mRNA表达(P＜0.01),但低氧和运动无显著交互作用(P＞0.05)；运动显著提高大鼠骨骼肌mTOR mRNA表达(P＜0.01),低氧却显著降低mTOR mRNA表达(P＜0.01),且低氧和运动有交互作用,显著降低mTOR mRNA表达(P＜0.01).结论:低氧和运动促进PI3K和PKB基因表达,低氧抑制而运动促进mTOR基因表达；HiLo训练促进PI3K和PKB基因表达,却抑制mTOR基因表达.不同条件下PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达水平不一致.
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海地瓜岩藻多糖硫酸酯促进胰岛素抵抗小鼠肝糖原合成及作用机制
目的：研究海地瓜岩藻聚糖硫酸酯（Fucoidan isolated fromAcaudina molpadioides，Am-FUC）对胰岛素抵抗小鼠肝糖原合成的影响。方法以高脂高糖饲料饲喂雄性C57BL/6J小鼠，建立胰岛素抵抗小鼠模型。模型小鼠饲喂Am-FUC 19w后，检测其空腹血糖、葡萄糖耐受性、胰岛素水平、肝糖原含量及糖代谢关键酶活力。采用qRT-PCR法进一步研究小鼠肝糖原合成通路PKB/GSK-3β中关键基因mRNA表达。结果 Am-FUC能显著降低模型小鼠空腹血糖水平，改善葡萄糖耐受量，提高肝糖原含量；增加肝脏中己糖激酶（hexokinase, HK）和丙酮酸激酶（pyruvate kinase, PK）等糖原合成相关酶活力，降低糖原磷酸化酶（glycogen phosphorylase, GP）和葡萄糖-6-磷酸酶（glucose -6- phosphatase, G6Pase）等糖异生关键酶活力；显著上调肝脏中IR（insulin receptor,）、IRS-2（insulin receptor substrate-2）、PI3K （phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase,）、AKT（Protein Kinase B,）、GS（glycogen synthase）的mRNA及磷酸化蛋白的表达，抑制糖原合成负调节基因GSK-3β（glycogen synthase kinase-3β）的mRNA及磷酸化蛋白的表达。结论Am-FUC能显著促进模型小鼠合成肝糖原，改善胰岛素抵抗，其作用机制与调控肝脏中糖代谢关键酶活力及PI3K/AKT/GSK-3β糖原合成通路有关。
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葛根芩连汤对糖尿病大鼠早期视网膜病变影响的实验研究
[目的]探讨葛根芩连汤对糖尿病大鼠早期视网膜病变的治疗作用。[方法]选取45只Wistar大鼠，链脲佐菌素（STZ）腹腔注射，制作糖尿病模型，糖尿病模型建立后随机分为DM组（糖尿病组）、DM＋NS组（糖尿病生理盐水注射组）和实验组（DM＋葛根芩连汤组）。模型建立后，DM组不做任何处理，实验组给予葛根芩连汤8.2 g/kg，DM＋NS组注射等体积的生理盐水。对糖尿病大鼠的空腹血糖、血浆胰岛素、体质量、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白（HDL-C）的含量进行检测，以观察葛根芩连汤降糖降脂功效；通过免疫印迹（Westem blot）法检测视网膜蛋白激酶B（PKB）以及炎性相关因子———细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达情况；利用苏木-伊红（HE）染色观察各组大鼠的超微结构；采用TUNEL法检测凋亡相关蛋白C-myc的凋亡指数。[结果]与DM组和DM＋NS组比较，实验组大鼠空腹血糖明显降低、体质量明显增加，差异有统计学意义（P﹤0.05）；与DM组和DM＋NS组比较，实验组大鼠血胰岛素含量增加，组间比较差异有统计学意义（P﹤0.05）；与DM组和DM＋NS组比较，实验组大鼠TG明显降低而HDL-C明显升高（P﹤0.05）。通过Westem blot检测可见与DM组和DM＋NS组比较，实验组大鼠PKB的表达明显增加、ICAM-1的表达明显下降，差异有统计学意义（P﹤0.05）；光镜下HE染色观察到各组超微结构：DM组可见核固缩、浓染，核膜内陷，染色质边集，凋亡小体出现，实验组变化明显减轻（P﹤0.05）；与DM组和DM＋NS组比较，实验组中凋亡相关蛋白C-myc明显减少（P﹤0.05）。[结论]葛根芩连汤能够改善大鼠空腹血糖、血浆胰岛素及体质量等的变化，具有较好的降糖降脂作用，能通过增加PKB的表达及抑制糖尿病大鼠视网膜病变的炎症反应减轻或延缓糖尿病的发生和发展。
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再生障碍性贫血患者血清对脐血CD34~+细胞凋亡的影响
多项研究证实,再生障碍性贫血(AA)患者骨髓造血干细胞的数量减少与其过度凋亡有关,我们在过去的研究中曾证实,AA患者血清可诱导CD34~+细胞凋亡~([1]).Akt,又称蛋白激酶B(PKB),与多种细胞活动、物质代谢调节,尤其是与抑制细胞凋亡、促进细胞生存有密切关系~([2]),而Akt磷酸化后被激活是其发挥各种生物效应的重要前提.
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PI3K/PKB信号传导通路与子宫内膜癌研究进展
磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号通路是许多生长因子、细胞因子等的下游信号传导通路,通过抑制细胞凋亡,促进细胞生长、增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管生成而与肿瘤发生发展密切相关.许多与子宫内膜癌相关的因素通过PI3K/PKB通路参与肿瘤发生发展,这为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供了新思路.
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温胆汤、化瘀温胆汤对糖耐量低减大鼠PI3K通路作用的研究
目的：利用免疫组化法研究温胆汤、化瘀温胆汤对糖耐量低减（ IGT ）大鼠脂肪中PI3 K、PKB、GSK－3β蛋白表达的影响。方法：40只SD大鼠随机分为空白对照组、IGT模型组、温胆汤组和化瘀温胆汤组，喂养24周后，取脂肪采用免疫组化法测定PI3 K、PKB、GSK－3β蛋白含量。结果：与空白对照组比较，IGT组PI3K、PKB蛋白含量显著降低（P＜0．05），GSK－3β蛋白含量显著升高（P＜0．05）。与IGT组比较，温胆汤、化瘀温胆汤均可显著升高PI3 K、PKB蛋白含量（ P＜0．05），降低GSK－3β蛋白含量（ P＜0．05）。结论：温胆汤、化瘀温胆汤可以不同程度的作用于IGT大鼠脂肪的PI3K通路。
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丹皮酚对乳腺癌小鼠肿瘤组织PKB与PKC表达的影响
目的:探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对小鼠乳腺癌细胞中蛋白激酶B(PKB)与PKC表达的影响.方法:建立小鼠乳腺癌移植瘤摸型,随机分成丹皮酚低剂量组(Pae L组)、丹皮酚高剂量组(Pae H组)、环磷耽胺阳性药物对照组(CTX组)以及摸型对照组(Control组)4组.兔疫组化法检验PKB与PKC在乳腺癌肿瘤组织中的表达分布.结果:和摸型对照组相比,丹皮酚低、高剂量组PKB和PKC的表达比率明显降低(P<0.05).结论:丹皮酚的抗乳腺肿瘤作用与PKB和PKC的表达降低有关.
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活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织Nrf2、PKB表达的影响
目的 探讨活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠的保肝降脂作用及该药方在治疗过程中可能的作用机制.方法 将健康雄性SD大鼠60只随机分为6组,即正常组,模型组,活血降脂保肝汤低、中、高剂量组,强肝片组.除正常组外,其余各组给予高脂饮食.于第12周末采集血清标本检测各组大鼠天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(A LT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,以及观察大鼠肝组织病理变化、核因子相关因子-2(Ⅳrf2)、蛋白激酶B (PKB)的表达情况.结果 与正常组比较,模型组TC、TG、ALT、AST均显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组TC、TG、ALT、AST水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01);免疫组化检测结果显示:与正常组比较,模型组Nrf2表达水平升高,PKB表达水平降低,差异无统计学意义;与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组Ⅳrf2、PKB表达显著增强,差异有统计学意义(P＜0.01),并以中药高剂量组尤为明显.大鼠肝脏病理切片显示活血降脂保肝汤可明显减轻肝细胞肿胀、脂肪变性及炎症细胞浸润.结论 活血降脂保肝汤具有调节脂质代谢紊乱,有效逆转非酒精性脂肪肝模型大鼠肝组织脂肪变性的程度,改善大鼠血脂、肝功能,并上调组织中Ⅳrf2、PKB表达的作用.这可能是其防治非酒精性脂肪肝病的作用机制之一.
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雌激素对人乳腺癌细胞株MCF7增殖的促进作用
目的:观察雌二醇对乳腺癌细胞增殖的促进作用和可能的机制.方法:经不同浓度的雌二醇处理乳腺癌细胞株MCF7后,用MTT比色试验观察雌二醇对MCF7增殖活性的影响,免疫印迹法测量多种与细胞周期、抑癌、增殖、凋亡相关的蛋白质.结果:经MTT比色试验检测,雌二醇能增加MCF7细胞株的增殖活性, 细胞周期素-D1明显增加.但雌二醇对抑癌基因PTEN的蛋白表达没有明显影响,以及对具有抗细胞凋亡作用的PKB蛋白量也无明显作用.结论:雌二醇可促进乳腺癌细胞的增殖,可能通过细胞周期素-D1介导的分子机制,而不涉及PKB抗凋亡作用.
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茶多酚对卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制研究
目的：研究茶多酚（EGCG）对人卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制。方法用EGCG处理SKOV3细胞，Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II及蛋白激酶B（PKB）信号通路相应蛋白表达变化。结果 EGCG处理SKOV3细胞后，自噬相关蛋白LC3-II表达上调，并呈一定的时间浓度依赖性。EGCG处理SKOV3细胞后，AKT的磷酸化水平下调，AKT激活剂胰岛素样生长因子1（IGF-1）预处理后，自噬相关蛋白LC3-II高表达被抑制。结论 EGCG通过AKT介导的信号通路诱导SKOV3细胞自噬水平升高。
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解决直接压片工艺中裂片问题新方法的探讨
目的：探讨解决直接压片工艺中裂片问题的新方法。方法解析裂片的原因，从理论和实际论述硬脂酸镁外喷装置（ PKBⅡ）用于解决裂片问题的可行性。结果实践表明，采用PKB装置，解决了裂片问题且不影响终处方，可以保证片剂的重量、硬度等质量指标。结论找到了解决直接压片工艺中裂片问题的新方法。
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促红细胞生成素对大鼠全脑缺血再灌注后海马蛋白激酶B表达的影响
目的观察促红细胞生成素(EPO)对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区蛋白激酶B表达的影响,进一步探讨EPO脑保护作用的机制.方法采用改良的Pulsinelli四血管阻断方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为4组:正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组.各组动物分别于缺血15min再灌注6h、24h、48h、72h、7d断头取脑.鼠脑灌注及固定后制作石蜡切片,HE染色观察海马的病理变化,用TUNEL方法检测海马CA1区神经细胞凋亡,免疫组织化学SP法观察磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)表达.另外再取24只大鼠分为4组:正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组,应用Y型迷宫法对缺血再灌注7 d的大鼠进行缺血后学习和记忆功能的测定.结果 (1)TUNEL染色:假手术组48 h、72h可见个别阳性细胞.缺血再灌注组于再灌注24h可见少量阳性细胞;再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少.EPO治疗组TUNEL阳性细胞在各时间点明显少于缺血再灌注组[(948.6±91.0)个vs(502.7±97.3)个,P＜0.01].(2)认知功能变化:全脑缺血再灌注后7 d大鼠学习能力降低,尝试次数明显增多(P＜0.01).EPO治疗组尝试次数减少,有显著性差异(P＜0.01).学习能力测试后24h记忆功能测定,结果发现缺血再灌注组成绩明显低下,EPO处理组可改善缺血造成的大鼠记忆功能障碍[(20.06±3.85)s vs(12.93±3.04)s,P＜0.01].(3)p-PKB免疫组化染色:缺血再灌注组于再灌注6h即出现p-PKB明显表达增高,72h达高峰,7 d明显下降.EPO治疗组于再灌注6h、48h、72h、7 d,p-PKB蛋白表达较缺血再灌注组增高[(25.42±3.86)vs(11.64±2.13),P＜0.01].(4)相关分析:TUNEL阳性细胞与p-PKB蛋白表达则呈负相关,而大鼠学习能力与海马CA1区存活神经细胞数呈正相关趋势.结论 EPO能减少大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经细胞的坏死和凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤后大鼠学习、记忆功能障碍.EPO可能通过增强海马神经细胞p-PKB的表达,发挥神经细胞保护作用.
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腺病毒介导的Akt1基因转染大鼠胰岛对其生存的影响
Akt亦称蛋白激酶B(ptotein kinaseB,PKB)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员,在细胞存活、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等活动中扮演着关键角色[1].Akt1是Akt蛋白3种主要亚型之一.
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PKC、PKB通过p21CIP1/WAF1蛋白对小鼠受精卵G2期向M期转换的影响
目的:探讨在小鼠受精卵中,PKC及PKB是如何通过p21CIP1/WAF1蛋白影响小鼠受精卵G2/M的转换.方法:以小鼠受精卵为材料,通过Western blot及免疫荧光的方法,检测经PKC及PKB抑制剂处理后的p21蛋白表达及定位.结果:经PKC抑制剂(PMA)处理后的小鼠G2期受精卵中p21蛋白表达增加,而经PKB抑制剂(LY294002)处理后的p21蛋白表达没有变化,但是其在亚细胞的定位发生了改变.结论:PKC通过改变p21蛋白表达,影响小鼠受精卵G2/M转换.而PKB通过改变p21蛋白在小鼠受精卵中的亚细胞定位,影响受精卵G2/M转换.
