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甲基叔丁基醚对原癌基因和功能基因表达的影响
甲基叔丁基醚(MTBE)是一种新型的汽油添加剂,被用来提高汽油燃烧效率,减少汽车尾气中有害物质的排放.MTBE具有一定的动物致癌性,但其机制目前并不清楚.本研究采用免疫组织化学方法,检测了MTBE对体外培养的NIH3T3细胞中cmyc和p21蛋白表达的影响;采用点杂交方法,从RNA水平检测了MTBE亚慢性染毒大鼠肝组织中原癌基因cmyc基因和功能基因GST-P基因的表达情况.免疫组化结果显示,MTBE可诱导cmyc基因的高表达,对p21蛋白的表达未见明显影响.点杂交结果显示,MTBE可明显诱导大鼠肝组织中cmyc基因的高表达,而对GST-P基因的表达未见明显影响.上述结果提示,MTBE可诱导细胞中cmyc基因表达活性增高,可能是其动物致癌性的机制之一.
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P21蛋白和XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用
目的 研究P21蛋白和凋亡相关基因XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用及其分子机制.方法 应用MTT法检测细胞系的增殖作用,流式细胞仪、透射电镜检测细胞周期和凋亡;用流式细胞术、Western blot和RT-PCR检测P21蛋白、XIAP蛋白及P21和XIAP mRNA的表达.结果 美伐他汀呈剂量和时间依赖性对A549增殖产生抑制;并诱导A549细胞G0/G1期阻滞和凋亡.美伐他汀对P21 mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降.美伐他汀作用后XIAP mRNA及XIAP蛋白的表达均下降.加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用.结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径抑制A549细胞增殖并诱导凋亡,使细胞周期进程阻滞于G0/G1期,XIAP参与美伐他汀诱导A549细胞凋亡的基因调控.美伐他汀靶向HMG-CoA还原酶,抑制P21蛋白异戊二烯化、阻止P21蛋白与细胞膜的结合,不影响P21总蛋白的表达.
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蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究
本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用.流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用.结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用.结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性.
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汉防己甲素联合柔红霉素对K562/A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响
本研究旨在探讨汉防己甲素(TET)对人慢性髓系白血痛(CML)急性红白血病细胞株K562/A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P-gP)及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础.K562/A02细胞实验分组为:①单用柔红霉素(DNR)对照组;②DNR+TET0.5 mg/L组;③DNR+TET1.0 mg/L组;④DNR+TET 2.0 mg/L组.采用Western blot法检测实验各组K562/A02细胞P21的表达.采用流式细胞仪(FCM)检测实验各组细胞P-gP的表达,采用半定量PCR(RT-PCR)测定细胞MDRI基因mRNA表达水平.结果表明:K562/A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P-gP蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低.K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562/A02细胞中mdr1基因高表达,随着TET浓度的增加K562/A02细胞mdr1基因表达不断降低.结论:TET强对K562/A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdr1及P-gP的表达有关.
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活性氧影响鼠骨髓造血干细胞凋亡的机制研究
本研究探讨外周血造血干细胞移植中暴露于较高氧浓度环境下的外周血造血干细胞(PBHSC)内的异常增高的活性氧(reactive oxygen species,ROS)对其生物学功能造成损伤的机制.通过模拟骨髓平均氧浓度(5％O2)、静脉平均氧浓度(12％ O2)、动脉平均氧浓度(20％ O2)来培养骨髓造血干细胞(BMHSC),采用荧光探针检测细胞内ROS水平；流式细胞术分析不同细胞周期的细胞比例；Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡情况；利用PCR技术检测细胞ATM基因表达；利用Western blot方法检测P21蛋白的表达.结果发现:与5％ O2对照组比较,12％ O2、20％O2组、氧浓度连续变化的5％-12％-20％O2组进入G1期、S期、G2/M期的细胞比例显著增加(P＜0.01)；细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)；同步检测的ATM基因表达量明显低于对照组(P＜0.01)；P21蛋白表达量明显高于对照组(P＜0.01).结论:ROS通过ATM基因表达抑制和细胞周期蛋白P21活化,导致BMHSC的凋亡.
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维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响
目的:研究维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响,以期探讨其抑癌机制.方法:四甲基谷氮咪盐(methyl-thiazolyltetrazolium,MTT)比色法检测MART-10对BxPC-3细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期,观察细胞的生长情况;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测BxPC-3细胞中survivin mRNA的表达;Western blot法检测BxPC-3细胞中c-myc蛋白和P21蛋白的表达.结果:MTT结果显示,MART-10可显著抑制人胰腺癌BxPC-3细胞的生长,其抑制50％细胞生长的给药浓度(IC50)为10-7 mmol/L;流式细胞术结果显示,癌细胞在MART-10的作用下,G0/G1期的细胞比例上升而S期的细胞比例则下降;RT-PCR及Western blot结果表明,随着MART-10作用时间的延长及给药浓度的增加,胰腺癌BxPC-3细胞中survivin mRNA和c-myc蛋白的表达量逐渐减低,而P21蛋白的表达量则逐渐增强.结论:维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长具有显著抑制作用,其作用的机制可能与其调节survivin、c-myc及P21的表达有关.
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胃粘膜不典型增生与胃癌关系的探讨
目的:探讨胃粘膜不典型增生与胃癌生长方式的关系.方法:37例胃良性病变标本,42例胃癌标本行粘液化学染色,胃癌单克隆抗体MG7、ras癌基因蛋白p21、突变型抑癌基因蛋白p53免疫组化染色.结果:胃粘膜不典型增生与胃癌在粘液分泌方面无明显差异,提示胃粘膜不典型增生可根据其形态分为两种类型(Ⅰ型和Ⅱ型).43例不典型增生中,中、重度不典型增生MG7抗原表达明显增强;p21蛋白阳性率39.4%,均为中、重度不典型增生;p53蛋白阳性率9.7%,均为重度不典型增生.结论:胃粘膜不典型增生发生发展过程中p21蛋白与p53蛋白起着重要的协同作用.Ⅰ型不典型增生与膨胀型胃癌有关.Ⅱ型不典型增生与浸润型胃癌有关.
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环格列酮抑制人肺癌A549细胞增殖活性的实验研究
目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂环格列酮对人肺癌细胞株A549体内外生长的影响,探讨其可能机制.方法培养A549细胞,加入不同浓度的环格列酮,采用MTT方法检测A549细胞生长情况,用流式细胞仪进行细胞周期分析;Western blot 检测环格列酮对PPARγ蛋白表达的影响.建立裸鼠肺癌动物模型,随机将其分为:对照组(A组,10只)和环格列酮注射组(B组,10只).B组隔天注射环格列酮100 μl(100 μmol/L),连续15次,A组注射100 μl生理盐水,1个月后切除瘤灶、并称瘤重,计算其抑瘤率.标本采用免疫组化检测细胞周期素D1(cyclin D1)的表达,同时采用Western blot检测细胞周期素依赖性激酶抑制子p21蛋白的表达.结果 (1)环格列酮体外抑制A549细胞生长,并呈现明显时间和剂量依赖性.(2)经环格列酮处理后的PPARγ蛋白表达增加.(3)经环格列酮治疗后,A组的瘤重为(2.79± 0.33) g,B组的瘤重为(1.51±0.40) g,B组的抑瘤率达47.0%,A组的cyclin D1较B组明显增高,A组的p21蛋白表达水平较B组明显降低.结论环格列酮能抑制肺癌A549细胞的恶性增殖,呈明显的时间及剂量依赖性,并诱导其分化,其机制与PPARγ干预细胞周期的调控有关.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 环格列酮 细胞周期素D1 p21蛋白 肺肿瘤 -
大鼠全脑缺血再灌流后脑组织P53及P21蛋白的表达
目的探讨大鼠全脑缺血再灌流后P53、P21蛋白的表达及其与迟发性神经元死亡(DND)的关系.方法在4血管闭塞法全脑缺血模型上,采用HE及LSAB染色法,观察脑组织病理改变,检测脑组织P53、P21蛋白的表达,以及蛋白合成抑制剂放线菌酮对其的影响.结果全脑缺血15 min再灌流后,脑组织P53、P21蛋白表达增加,且两者分布接近.海马结构、丘脑、下丘脑等白质区(再灌流后6 h)较皮层、海马的神经细胞核(24 h)先检测到P53、P21蛋白,72 h表达达高峰.并且以缺血损伤严重的海马CA1区P53、P21蛋白表达为强.另外,放线菌酮可抑制脑组织P53、P21蛋白的表达,并对DND具有一定的保护作用.结论全脑缺血再灌流损伤后,脑组织P53、P21蛋白表达增加,放线菌酮可抑制其表达,并对DND起保护作用,提示P53、P21蛋白参与了全脑缺血后DND的凋亡机制,并对其起促进作用.
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关键词：
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辐射对Jurkat细胞P21蛋白及ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响
目的 探讨电离辐射对Jurkat细胞P21蛋白和ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响.方法 采用流式细胞术(FCM),检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞中P21蛋白表达的变化.采用实时定量PCR技术,分别检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后4和24 hd'鼠胸腺及脾细胞中p21基因表达的变化.结果 不同剂量X射线照射后12和24 h,Jurkat细胞中P21蛋白表达在0.5～4.0 Gy范围内均随剂量的增大而升高(t=-24.23～-3.96,P<0.05),6 Gy时均出现表达下降(t=-11.19、-14.50,P<0.05);与假照射组相比,在0～6.0 Gy照射后4和24 h,小鼠胸腺及脾细胞中p21基因的相对表达量均随剂量增大逐渐增加(t=-29.96～8.80,P<0.05);并于6.0 Gy时达高(t=-11.84～-3.42,P<0.05),仅胸腺细胞1 Gy照射后4 h除外(t=-3.42,P>0.05).结论 x射线能诱导P21蛋白及基因表达增加,并在一定剂量范围内存在良好的剂量-效应关系.
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人参皂苷Rg1对细胞衰老过程中p21,cyclin E和CDK2表达的影响
目的探讨p21、细胞周期蛋白E(cyclin E)和周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在人参皂苷Rg1对抗三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导WI-38细胞衰老过程中的可能作用.方法细胞超微结构、流式细胞分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞,蛋白印迹法检测p21,cyclin E和CDK2蛋白的表达.结果Rg1预处理可明显减弱t-BHP对WI-38细胞衰老的诱导作用,同时p21表达水平明显降低,cyclin E和CDK2表达水平增加.结论人参皂苷Rg1对抗三丁基过氧化氢对细胞衰老的诱导作用可能与其改变p21,cyclin E和CDK2的表达水平有关.
关键词： 人参皂苷Rg1 p21蛋白 细胞周期蛋白E 周期蛋白依赖性蛋白激酶2 衰老 -
探讨胃癌组织中p21和CD44的表达及临床意义
目的 通过检测胃癌组织中p21和CD44的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的相关性及临床意义.方法 采用免疫组化方法检测p21和CD44蛋白,在72例研究对象中的表达情况,并且应用SPSS 18.0软件进行分析结果.结果 男性胃癌组织中p21蛋白表达阳性率(55.0％)明显高于女性胃癌组织(31.3％).CD44蛋白表达与胃癌患者的性别和癌组织的分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.01).p21蛋白表达与CD44的表达呈明显负相关(P＜0.05).结论 在正常胃黏膜、胃癌组织中,检测到p21蛋白表达依次减少,而CD44蛋白表达增高,提示p21蛋白和CD44蛋白的表达与胃癌的发生发展有关.
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冰己抑瘤丸对胶质瘤患者化疗敏感性及P21、VEGF表达的影响
目的 探讨冰己抑瘤丸对胶质瘤患者化疗敏感性及P21、VEGF表达的影响.方法 将90例确诊为神经脑胶质瘤的患者随机分为A组(冰己抑瘤丸+替莫唑胺)30例、B组(汉防己+替莫唑胺)30例、C组(安慰剂+替莫唑胺)30例.对比3组总有效率、化疗敏感率及毒副反应发生率.分析治疗前后3组P21、VEGF表达水平的变化.结果 A组总有效率、化疗敏感率高于B、C组(P＜0.05),毒副反应发生率低于B、C组(P＜0.05).A组治疗后P21、VEGF表达水平显著低于B、C组(P＜0.05).结论 冰己抑瘤丸可提高胶质瘤患者化疗敏感性及治疗效果,抑制P21、VEGF表达水平,促进患者预后.
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p21结构功能与研究新进展
细胞周期是由周期依赖激酶(CDK)和细胞周期蛋白共同作用而完成.尤其是G1>期过渡到S期受细胞周期负调节因子家族周期蛋白依赖激酶抑制因子(CDKI)的调节,p21可以和p53共同构成细胞周期G1>检查站,因DNA损伤后不经过修复则无法通过,减少受损DNA的复制和积累,从而发挥抑癌作用.当p21、Cyclin、CDK,PCNA四聚体的功能受到抑制,则使增殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变.p21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关.
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低氘水抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的研究
目的 探讨培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 用含不同氘浓度的培养基培养Hela细胞,分为150×10-6、100×10-6、75×10-6和50×10-6共4组,其中,氘浓度为150×10-6的培养基为对照组,其他为实验组;用四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测随着培养基中氘浓度下降,Hela细胞增殖和迁移侵袭力的变化;流式细胞术检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞周期的影响;蛋白免疫印迹和免疫组化实验检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞肿瘤相关蛋白p21、Na+/K+-ATPase表达的影响.结果 MTT实验结果显示,随着培养基中氘浓度的降低Hela细胞增殖得到明显的抑制,其中氘浓度为50×10-6的培养基抑制效果明显,相同条件下与对照组相比在72 h抑制率达到39.54％(P＜ 0.01);划痕实验可观察到Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中细胞迁移能力得到明显抑制(P＜ 0.05);Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中培养24 h后,流式细胞术检测S期明显低于对照组(P＜0.01);Hela细胞肿瘤相关蛋白p21在氘浓度为100×10-6、75×10-6和50×10-6的培养基中的表达与对照组比较,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).结论 培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力有明显的抑制作用.
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Krupple样转录因子6蛋白在口腔癌组织中的表达及其与p21蛋白的关系
目的 探讨Krupple样转录因子6(KLF6)蛋白在口腔癌中的表达及其与p21蛋白的关系.方法 采用免疫组化法,对2007年9月～2012年9月入住益阳医学高等专学校附属医院的50例口腔癌组织、50例口腔癌旁组织及50例正常口腔组织的KLF6蛋白、p21蛋白进行检测,分析两种蛋白在上述组织的表达情况以及两种蛋白的相关性.结果 KLF6及p21表达在浸润深度方面,差异均有统计学意义(P＜0.05),但在年龄、性别、肿瘤大小、Dukes'分期及淋巴转移等方面差异无统计学意义(P＞ 0.05);口腔癌组织中KLF6与p21蛋白阳性表达率分别为88.00％及74.00％;癌旁组织分别为58.00％及40.00％;正常口腔组织分别为0.00％、0.00％.三组KLF6及p21阳性表达率相比,差异有高度统计学意义(P＜0.001);口腔癌组织中KLF6与p21具有正相关性(r=0.568,P＜0.01).结论 KLF6与p21蛋白在口腔癌的发生与发展中可能具有非常重要的作用,且两者在口腔癌组织中呈现正相关关系.
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膀胱移行细胞癌中p21和cyclin D1的表达及意义
目的:探讨抑癌基因p21与癌基因cyclin D1在膀胱移行细胞中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学S-P染色方法检测66例膀胱移行细胞癌组织中P21,cyclin D1蛋白的表达情况.结果:P21、cyclin D1蛋白在膀胱移行癌I,Ⅱ,Ⅲ级中的阳性率分别为31.8%,62.5%;71.8%,80.8%;46.7%,83.3%.在Tis-T1期,T2～4期中的阳性表达分别为41.6%,83.3%,73.3%,30.0%.结论:P21与cyclinD1蛋白在膀胱移行的细胞癌中发挥重要作用,且呈负相关.
关键词： p21蛋白 Cyclin D1蛋白 膀胱移行细胞癌 免疫组织化学 -
直肠癌的组织病理学切缘和分子病理学切缘比较研究
目的 从分子病理学水平探讨直肠癌的"分子切缘".方法 37例Mile's术后标本,分别采集癌组织、肿瘤下缘0～1、1～2、2～3、3～4 cm的癌旁肠壁组织.进行常规染色和免疫组化P21蛋白检测.结果 37例有15例(40.5%)镜下远端肠壁有癌细胞浸润;癌组织P21蛋白阳性表达者20例(54.1%),癌旁黏膜表达者8例(21.6%);二者的范围均≤2 cm.远端肠壁浸润与原发肿瘤的大体类型、组织学类型等病理学因素有关(χ~2 值分别为7.6359、5.0290,P均<0.05),而与肿瘤大小无显著相关(χ~2=2.4754,P>0.05).远端癌旁黏膜镜下浸润与P2l蛋白表达差别无显著相关(P>0.05).结论 直肠癌的"分子切缘"是2 cm以内,因此保肛术中远端切缘至少达2 cm是安全、合理的.P21蛋白的表达阳性的癌旁黏膜可能存在癌前病变,手术切除有利预后.
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微小RNA-3619-5p通过靶向作用于p21基因对卵巢癌细胞生长的影响
目的:探讨微小RNA-3619-5p(miR-3619-5p)过表达对卵巢癌细胞系A2780和SKOV3中p21基因的上调作用及对卵巢癌细胞生长的影响.方法:使用Lipofectamine 3000分别向卵巢癌细胞系A2780和SKOV3瞬时转染miR-3619-5p(实验组)或者dsControl(对照组).通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21、细胞周期依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达情况.蛋白质印迹(Western blotting)检测p21、CDK4和Cyclin D1蛋白的表达情况.流式细胞术检测对照组和实验组细胞周期分布差异和细胞凋亡情况.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果:与对照组相比,转染miR-3619-5p后2种细胞系中p21 mRNA均显著升高(P<0.01),而CDK4和Cyclin D1 mRNA的表达均明显降低(P<0.01).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.与对照组相比,转染miR-3619-5p后,位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,细胞凋亡率明显升高.EdU增殖实验和集落形成实验均显示,与对照组相比,转染miR-3619-5p的卵巢癌细胞的增殖能力明显下降(P<0.05).结论:miR-3619-5p可通过激活卵巢癌细胞中p21蛋白的表达抑制卵巢癌细胞的生长.
