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沉默/增强Stat1对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响
目的研究沉默/增强Stat1对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法将胰腺癌细胞(BxPC-3)分为:对照(control)组、Stat1组和si Stat1组,分别转染Stat1质粒和特异性干扰Stat1表达的siRNA;Western blot法检测BxPC-3细胞中Stat1、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达;MTT法绘制细胞增殖曲线;Transwell法检测BxPC-3细胞侵袭能力.结果沉默Stat1表达后,BxPC-3细胞增殖及迁移能力明显增加,且VEGF、MMP-2和MMP-9表达明显增加.而增强Stat1表达后,BxPC-3细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05).结论Stat1可以抑制BxPC-3细胞增殖及迁移能力.且VEGF、MMP-2和MMP-9可能在Stat1抑制肿瘤过程中起一定作用.
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不同新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞增殖的影响
目的 观察在其他培养条件相同的情况下,不同类型新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞体外培养的影响,探讨胰腺癌BxPC-3细胞生长适应的血清类型.方法 胰腺癌细胞系BxPC-3细胞分别用含20%无噬菌体低内毒素新生牛血清、20%无支原体新生牛血清的高糖DMEM培养基培养,镜下观察细胞形态,MTr法检测细胞活力及生长曲线的比较.结果 无噬菌体低内毒素新生牛血清对于胰腺癌BxPC.3细胞形态、增殖及生长曲线,无噬菌体低内毒素新生牛血清明显好于无支原体新生牛血清,两组血清培养BxPC-3细胞的增殖有统计学差异(P＜0.05).结论 胰腺癌BxPC-3细胞能较好地适应无噬菌体、低内毒素新生牛血清,而不适应无支原体新生牛血清,甚至发生死亡.
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COX-2抑制剂联合survivin反义寡核苷酸抗胰腺癌BxPC-3细胞的效应
目的:探讨COX-2抑制剂和survivin反义寡核苷酸联合应用对胰腺癌BxPC-3细胞的抗肿瘤效应及其可能机制.方法:应用胰腺癌BxPC-3细胞进行研究,将BxPC-3细胞分为4组:A组(对照组),B组(Celecoxib 80 μmol/L)组.C组(300 nmol/L survivin ASODN),D组(80 μmol/L celecoxib+300nmol/L survivin ASOD).采用MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,caspase-3试剂盒检测caspaseμ3活性,并用RT-PCR检测Bcl-2、survivin和Mcl-1的mRNA的变化.结果:将80μmol/L celecoxib和300 nmol/L survivin反义寡核苷酸单独或联合作用于胰腺癌BxPC-3细胞24h和48h,D组细胞的存活率明显低于B,C组(24h:41.0%±0.4% vs 71.0%±2.2%,63.3%±4.5%:48h:34.2%±1.1% vs 61.6%±1.7%,55.0%±3%;P＜0.01).作用24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,D组细胞的凋亡率明显高于B,C组(30.33%±3.49% vs 11.93%±1.17%,22.07%±0.93%;P＜0.01).caspase-3活性在B,C,D组明显高于对照组(0.04867±0.0021,0.02967±0.0021,0.08767±0.0042 vs 0.007±0.0001:P＜0.01),D组细胞的caspase-3活性明显高于B,C组(0.08767±0.0042 vs 0.04867±0.0021,0.02967±0.0021:P＜0.01).用100μmol/L塞来昔布作用于胰腺癌BxPC-3细胞24h后,survivin/β-actin和Mcl-1/β-actin的mRNA的比值明显低于对照组(0.68±0.05 vs 1.05±0.06,P＜0.0 1),而Bcl-2/β-actin的mRNA的比值无明显变化(0.99±0.02 vs 1.07±0.06,P＞0.05).结论:联合应用COX-2抑制剂塞来昔布和survivin反义寡核苷酸可明显诱导胰腺癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖,并能够明显提高caspase-3活性.COX-2抑制剂塞来昔布诱导细胞凋亡可能通过survivin和Mcl-1途径,而非Bcl-2途径.
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维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响
目的:研究维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响,以期探讨其抑癌机制.方法:四甲基谷氮咪盐(methyl-thiazolyltetrazolium,MTT)比色法检测MART-10对BxPC-3细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期,观察细胞的生长情况;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测BxPC-3细胞中survivin mRNA的表达;Western blot法检测BxPC-3细胞中c-myc蛋白和P21蛋白的表达.结果:MTT结果显示,MART-10可显著抑制人胰腺癌BxPC-3细胞的生长,其抑制50％细胞生长的给药浓度(IC50)为10-7 mmol/L;流式细胞术结果显示,癌细胞在MART-10的作用下,G0/G1期的细胞比例上升而S期的细胞比例则下降;RT-PCR及Western blot结果表明,随着MART-10作用时间的延长及给药浓度的增加,胰腺癌BxPC-3细胞中survivin mRNA和c-myc蛋白的表达量逐渐减低,而P21蛋白的表达量则逐渐增强.结论:维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长具有显著抑制作用,其作用的机制可能与其调节survivin、c-myc及P21的表达有关.
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抑制MMP-2表达对人胰腺癌细胞黏附和侵袭作用的影响及其机制探讨
胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制非常复杂,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)能够降解细胞外基质,与癌细胞分泌的血管生成及淋巴趋化因子一起参与浸润癌特异性的组织重塑和基底膜降解过程.本研究设计和构建带有U6启动子的MMP-2基因特异性的小干扰RNA表达质粒,将构建好的质粒转染入人胰腺癌Bxpc-3细胞株中,观察转染后癌细胞MMP-2及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA水平的变化及癌细胞本身迁移能力的变化,旨在探讨靶向MMP-2的RNA干扰抑制人胰腺癌细胞黏附和侵袭的作用及其机制.
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桂皮酸对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨桂皮提取物桂皮酸对胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖和凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 以胰腺癌BxPC-3细胞为研究对象,用不同浓度(0～8 mmol·L-1)桂皮酸分别处理24、48、72h后,CCK-8比色法检测细胞活力;桂皮酸(0、1、2、4 mmol ·L-1)处理BxPC-3细胞48 h后,PI/Annexin Ⅴ检测细胞凋亡率,Western blot法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、PTEN、Akt、p-Akt蛋白表达的影响.结果 桂皮酸能有效抑制BxPC-39细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;桂皮酸处理BxPC-3细胞48h后,细胞凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调;此外,桂皮酸可上调PTEN蛋白表达,并下调Akt蛋白磷酸化.结论 桂皮酸可抑制BxPC-3细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与上调PTEN蛋白表达并抑制Akt蛋白磷酸化,继而上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白相关.
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胡桃醌体外抗胰腺癌细胞机制的初步研究
目的:探讨胡桃醌体外抗胰腺癌细胞的机制.方法:采用MTT法检测胡桃醌对BXPC-3细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析胡桃醌对BXPC-3细胞周期的影响.结果:MTT法试验结果显示,胡桃醌对体外培养的人胰腺癌BXPC-3细胞具有明显的生长抑制作用,24、48 h的IC50值为1.64x10-5,5.8x10-5 mol/L.同时胡桃醌能随着浓度的增加,时间的延长,诱导BXPC-3细胞周期停滞于G2期和S期,呈G2期和S期阻滞作用.结论:胡桃醌对胰腺癌BXPC-3细胞有明显的生长抑制作用,并能阻止其周期,诱导BXPC-3细胞凋亡.
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吲哚美辛对胰腺癌细胞BxPC-3生长的抑制作用及机制
目的 探讨环氧合酶抑制剂吲哚美辛体内外对胰腺癌细胞BxPC-3细胞生长的影响及其作用机制.方法 用MTT法检测吲哚美辛作用后BxPC-3细胞的增殖情况;用流式细胞分析、透射电镜和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡和细胞周期的变化;建立裸鼠胰腺癌BxPC-3细胞移植瘤模型,用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃(3 mg·kg-1·d-1,共4周),观察其对种植瘤生长曲线的影响,TUNEL法检测裸鼠移植瘤组织细胞凋亡.结果 吲哚美辛呈剂量和时间依赖性抑制BxPC-3细胞生长.TUNEL、流式细胞仪检测显示药物处理后细胞凋亡增加,细胞阻止于G0/G1.透射电镜可见细胞呈现明显凋亡形态.随着用药时间的增加,吲哚美辛对裸鼠移植瘤的生长抑制作用增加,移植瘤组织凋亡细胞增多.结论 吲哚美辛体内外可抑制胰腺癌细胞BxPC-3的生长,其机制可能与促进细胞凋亡,阻滞细胞周期有关.
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p73β基因对胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用
目的 将p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,观察其对胰腺癌细胞生物活性的影响.方法 将pcDNA3.1-N0和pcDNA3.1-p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测.结果 该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切鉴定,p73β基因相对表达量明显高于BxPC-3细胞和空载质粒转染细胞BxPC-3-pcDNA3.1-N0两对照组(P<0.05).与两对照组相比,重组质粒转染细胞pcDNA3.1-p73β实验组细胞增殖明显减弱(P<0.05).结论 包含人类p73 基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增,其末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,且对胰腺癌细胞有抑制作用.
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双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响
目的 探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法.方法 通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV-CD+TK导入包装细胞PA317,经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317/CD+TK细胞株,收集病毒上清液,浓缩后转染胰腺癌BxPC-3细胞系,再次经G418筛选,获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3/CD+TK细胞株.用RT-PCR检测双自杀基因的表达.给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine,5-FC)和(或)无环鸟苷(Ganciciovir,GCV)后,MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率.结果 双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达,联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显.结论 逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞,双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用.
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蛋白激酶Cα反义寡核苷酸对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响
目的:观察蛋白激酶Cα(PKCα)反义寡核苷酸(ASODN)对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响.方法:将BXPC-3细胞分为7组:对照组,64 mg/L随机寡核苷酸序列(RODN)转染组,4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L、32mg/L和64 mg/L ASODN转染组,RT-PCR方法检测PKCα mRNA表达情况;以有效转染浓度的ASODN转染BXPC-3细胞,并设对照和RODN组,Transwell侵袭小室方法检测BXPC-3细胞体外侵袭能力.结果:16 mg/L、32 mg/L和64 mg/L ASODN转染组PKCα/GADPH mRNA灰度值(0.637 1±0.036 0,0.563 2±0.008 0,0.238 9±0.020 0)均低于对照组(0.912 1±0.025 0)(P＜0.05),RODN组(0.914 7±0.017 0)、4 mg/L ASODN组(0.912 3±0.018 0)和8 mg/L ASODN组(0.911 6±0.029 0)与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组穿膜细胞数(286±10)和RODN组(268±3)比较,转染16 mg/L PKCα ASODN(119±9)可降低胰腺癌BXPC-3细胞的体外侵袭力(P＜0.05).结论:靶向PKCα的ASODN可有效阻断其在人胰腺癌BXPC-3细胞中的表达,并降低癌细胞体外侵袭力.
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瑞芬太尼对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响及其机制
目的 观察瑞芬太尼对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 在体外培养BxPC-3细胞,用不同浓度瑞芬太尼(终浓度0、0.5、1、2、4、8 mg/mL)分别处理24、48、72 h,采用CCK-8比色法检测药物处理后细胞活力;瑞芬太尼(0、1、2、4 mg/mL)处理BxPC-3细胞48 h后,采用PI/Annexin V双染法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、t-Akt、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达的影响;采用端粒酶重复序列扩增法检测端粒酶活性.结果 CCK-8比色法结果显示,瑞芬太尼处理后可抑制BxPC-3细胞的增殖,且呈剂量、时间依赖性;瑞芬太尼处理后,PI/Annexin V双染后流式细胞仪检测结果显示,随着药物浓度的增加,BxPC-3细胞凋亡率也逐渐增加(P＜0.05);Western blot结果显示,随着药物浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,且促凋亡蛋白Bax的表达量逐渐增高,BxPC-3细胞Akt总量未发生变化,而p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达逐渐降低(P＜0.05);端粒酶重复序列扩增法检测结果显示,随着瑞芬太尼浓度的增加,BxPC-3细胞端粒酶活性降低(P＜0.05).结论 瑞芬太尼在体外能抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt通路,上调Bax表达量,降低Bcl-2表达量,进而减弱端粒酶活性有关.
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吉西他滨衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性的研究
目的 合成吉西他滨(Gem)的衍生物,并初步研究其体外抗肿瘤活性.方法 将Gem与氯甲酸十六烷基酯反应生成吉西他滨甲酰十六烷基酯(Gem-C16),通过细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的实验评价其抗肿瘤活性.结果 成功合成了Gem-C16,其对BxPC-3、AR42J、A549三种肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用,抗增殖作用显著强于Gem.Gem-C16可引起BxPC-3细胞S期细胞增加,呈现S期阻滞现象,可明显诱导细胞发生凋亡,对细胞周期的阻滞作用和对细胞凋亡的诱导作用也显著强于Gem.结论 衍生物的设计合成路线可行性高,Gem-C16体外抗肿瘤活性较Gem显著提高.
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吲哚乙酸与辣根过氧化物酶对BXPC-3细胞凋亡的影响
目的:探讨吲哚乙酸(IAA)联合辣根过氧化物酶(HRP)对BXPC-3细胞凋亡及自由基表达的影响.方法:台盼蓝(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC-3细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测法检测细胞凋亡;生化法检测细胞内SOD,MDA的含量;激光共聚焦显微镜检测细胞内的自由基含量.结果:与对照组相比,IAA/HRP组的细胞凋亡数增加,而且随着IAA浓度的增大,细胞凋亡数存在上升的趋势;SOD活性和MDA含量在IAA/HRP组中均明显升高;对照组的自由基含量比IAA/HRP组明显降低,且自由基的含量具有浓度和时间依赖性.结论:IAA联合HRP诱导自由基产生是诱发人胰腺癌BXPC-3细胞凋亡的可能机制之一.
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IAA与HRP联合作用对人胰腺癌BXPC-3的细胞毒效应
目的研究吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用于人胰腺癌BXPC-3细胞所产生的细胞毒效应.方法 MTT法测定IAA/HRP对BXPC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪分析BXPC-3细胞周期时相变化;胎盘兰(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC-3细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测试剂盒检测IAA/HRP作用后BXPC-3细胞的凋亡.结果 IAA/HRP体外对BXPC-3细胞有抑制生长的效应,且这种效应有浓度和时间依赖性;BXPC-3细胞在IAA/HRP作用48h后细胞周期被阻滞在G1期和G2期;IAA/HRP作用72h后对照组和药物组的凋亡细胞数存在着显著性差异,且凋亡细胞数有浓度依赖性.结论 IAA/HRP对胰腺癌BXPC-3细胞有细胞毒作用,可体外抑制细胞的增殖,诱导凋亡.
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榄香烯诱导人胰腺癌BxPC-3细胞凋亡及对细胞周期阻滞的研究
目的观察榄香烯对人胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响.方法我们运用DNA含量分析、电子显微镜成相、DNA琼胶电泳、Annexin V/PI双标记法检测等技术,对榄香烯对人胰腺癌BxPC-3细胞周期、细胞超微结构、DNA片段化降解、细胞凋亡比值和对bcl-2基因表达的影响等方面进行了研究.结果 (1)榄香烯作用胰腺癌细胞后,G0/G1细胞周期相对增多,G2/M期相对下降;(2)DNA含量分析法测定榄香烯3个剂量的凋亡率分别为25.3%、40.9%、51.1%(P＜0.01);(3)Annexin V/PI双标记法检测提示:榄香烯对细胞的凋亡作用有一定的剂量依赖关系;(4)荧光显微镜下见3个剂量的榄香烯作用BxPC-3细胞均可见到凋亡细胞,电镜下可见明显细胞凋亡特征;(5)凋亡相关基因bcl-2蛋白表达量随着作用时间延长而逐渐降低.结论榄香烯通过抑制胰腺癌bcl-2基因表达是诱导胰腺癌细胞凋亡的机制.
