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GRIM-19基因的克隆及其对小鼠前列腺癌细胞株的促凋亡作用
目的 构建GRIM-19基因真核表达质粒,探讨GRIM-19基因转染对小鼠前列腺癌rm-1细胞的促凋亡作用.方法 采用RT-PCR及重组DNA技术构建pcDNA-GRIM-19真核表达质粒,体外进行基因转染.形态学观察,DNA ladder检测转染后rm-1细胞凋亡,RT-PCR方法检测rm-1细胞caspase-3活性.结果 扩增出GRIM-19 cDNA全长,测序结果与GenBank记载基本一致.转染rm-1细胞48 h后证明其能在真核细胞表达,形态学及共聚焦显微镜观察到pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组出现明显的细胞凋亡,并出现典型的DNA ladder.转染pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组caspase-3表达强度较对照组及空质粒组明显上调(P＜0.05).结论 成功克隆并构建鼠GRIM-19基因真核表达载体pcDNA3.1-GRIM-19,该载体可诱导鼠rm-1细胞凋亡.其凋亡机制与caspase-3酶活性有关.
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Survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒的构建
目的 构建survivin小干涉RNA和干扰素,维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(gene associated withretinoid interferon induced mortality-19,GRlM-1 9)共表达质粒为探讨联合基因对喉癌细胞凋亡和增殖的影响奠定基础.方法 以survivin小干涉RNA重组质粒pGCsilencer-siRNA-survivin(简称psi-survivin)为模板设计PCR引物,PCR产物经测序后与线性化pCDNA3.1-GRIM-19(简称p-GRIM-19)连接,构建survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒pCDNA3.1-siRNA survivin/GRIM-19(简称p-siRNAsurvivin/GRIM-19).将质粒用脂质体lipofetamine2000包裹转入人喉癌Hep-2细胞中,用半定量RT-PCR检测survivin和GRIM-19 mRNA的含量.结果 构建的survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒P-siRNA survivin/GRIM-19经酶切电泳和测序证实碱基序列的正确性,p-siRNAsurvivin/GRIM-19转染人喉癌Hep-2细胞,从mRNA水平能降低survivin的表达,抑制率55.9%,同时增加GRIM-19表达,表明共表达质粒的构建是成功的.结论 构建的siRNA survivin和GRIM-19共表达质粒从mRNA水平能降低survivin的表达,同时增加GRlM-19表达,为进一步实验奠定了基础.
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GRIM-19表达对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响
目的:通过体内和体外实验探讨GRIM-19表达对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的细胞株;采用RT-PCR和Western印迹法检测HeLa细胞转染GRIM19重组质粒前后GRIM-19 mRNA和蛋白水平的表达情况;应用MTT法检测各组细胞增殖水平,并将HeLa/con、HeLa/GRIM-19细胞接种到裸鼠皮下以检测荷瘤情况;同时对移植瘤检测其GRIM-19 mRNA及其下游STAT3 mRNA的表达水平.结果:建立稳定表达GRIM-19基因的HeLa/GRIM-19细胞株.RT-PCR结果显示GRIM-19基因在HeLa/GRIM-19细胞中mRHA表达明显增加,Western 印迹法检测同样发现GRIM-19蛋白的表达显著升高,而STAT3的表达明显受到抑制.MTT检测结果显示HeLa/ GRIM-19细胞增殖较HeLa/con明显减慢(P<0.05),其接种后肿瘤生长速度亦明显减慢(P<0.01).移植瘤的RT-PCR结果表明GRIM-19表达升高、STAT3表达降低.结论:GRIM-19的表达可以抑制子宫颈癌细胞的增殖,可能作为子宫颈癌治疗的一个新靶点.
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GRIM-19及其靶基因产物STAT3与结直肠癌恶性程度的关系
背景与目的:干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(gene associated with retinoid-interferon-induced mortality-19,GRIM-19)属转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)特异性抑制蛋白,STAT3及其介导的信号转导通路参与调节细胞的增殖、凋亡与分化,并介导细胞的恶性转化.本研究分析GRIM-19及其靶基因STAT3在结直肠癌组织中的表达情况,探讨GRIM-19及其靶基因产物在结直肠癌发病中的作用.方法:采用免疫组织化学染色及Western blot检测40例结直肠正常组织及癌组织中GRIM-19、STAT3、p-STAT3蛋白表达,对各表达情况与不同临床病理特征进行统计学分析.采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法及测序检测结肠癌细胞系SW480及23例结直肠正常组织及癌组织中GRIM-19mRNA有无基因突变及在mRNA的表达情况.结果:在结直肠癌组织中STAT3及p-SrFAT3蛋白均高表达,而GRIM-19 mRNA及蛋白表达在癌组织中明显低于正常组织,且GRIM-19蛋白表达水平与结直肠癌分化程度和临床分期相关(P＜0.05).GRIM-19与STAT3和p-STAT3在结直肠癌组织中表达情况呈负相关,GRIM-19基因阳性时.ST AT3基因趋向阴性(χ2=9.95,P＜0.01),p-STAT3基因也趋向阴性(χ2=5.10,P=0.02).结直肠癌组织中GRIM-19 mRNA无基因突变情况.结论:GRIM-19蛋白在结直肠癌组织中的低表达或缺失与结直肠癌的发生、发展及侵袭性相关,而与基因突变无关.在结直肠癌组织中存在STAT3的持续高表达和GRIM-19的低表达共存现象,可能与细胞更易发生恶性转化和异常增殖,促进了结直肠癌的发生发展相关.
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膀胱癌组织中GRIM-19及其靶基因产物STAT3的表达及其相关性的研究
目的:研究GRIM-19及其靶基因产物STAT3在膀胱癌组织中的表达情况及其相关性.方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织中GRIM-19及其靶基因产物STAT3的表达情况.结果:显示GRIM-19、STAT3膀胱癌、癌旁组织中的表达与正常膀胱组织比较差异有统计学意义(P＜0.01),膀胱癌、癌旁组织中的表达比较差异有统计学意义(P＜0.05).GRIM-19、STAT3膀胱癌、癌旁组织中的表达呈负相关.结论:GRIM-19、STAT3在膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织均表达,二者表达在膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织中有差异,GRIM-19、STAT3可以作为膀胱癌的早期诊断及判定预后的指标.
关键词： 膀胱癌 GRIM-19基因 靶基因产物STAT3 -
GRIM-19的表达与膀胱癌组织临床特征的相关性研究
目的:探讨细胞GRIM-19在膀胱癌组织中的表达及与病理分级和临床分期之间的关系.方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌组织、癌旁组织及38例正常膀胱组织中GRIM-19的表达情况,进行分析上述指标与膀胱癌病理分级和临床分期的关系.结果:显示GRIM-19膀胱癌、癌旁组织中的表达与正常膀胱组织比较,差异有统计学意义(P＜0.01),膀胱癌、癌旁组织中的表达比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).膀胱癌、癌旁组织中的表达:临床分级,Ⅰ级逐渐向Ⅲ级下降,差异具有统计学意义(P＜0.01)；临床分期,T2～T4高于Tis～T1,差异具有统计学意义(P＜0.01)；是否转移,转移比未转移的表达量低,差异具有统计学意义(P＜0.01).GRIM-19蛋白在病理分级、临床分期及中是否转移的表达情况,均呈正相关.结论:GRIM-19可以作为判定膀胱癌的预后的一个标准.
