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肾脾阳虚对实验大鼠大脑海马组织衰老相关基因Klotho、Akt、Foxo3a mRNA及蛋白表达的影响
目的:探讨肾脾阳虚致衰老的可能机制,以及桂附理中丸对Klotho、Akt、Foxo3a 3种基因mRNA及蛋白表达的影响.方法:本实验复制肾脾阳虚模型大鼠,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹及免疫组化技术,检测信号转导通路(Klotho-INS/IGF-1-PI3K-Akt-FOXO)中Klotho、Akt、Foxo3a 3种基因的mRNA及蛋白表达.结果:模型大鼠大脑海马组织Klotho蛋白表达减少,信号转导通路下游Akt、Foxo3a的磷酸化反应增强,磷酸化的Akt、Foxo3a蛋白表达均增多;桂附理中丸可增强Klotho mRNA及蛋白表达,抑制Akt、Foxo3a磷酸化,进而升高SOD2(MnSOD)的表达.结论:抗衰老基因Klotho蛋白表达下调是肾脾阳虚大鼠导致衰老的可能机制,同时为肾脾阳虚导致衰老的病理机制提供了分子学基础.
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针刺对支气管哮喘大鼠肺组织AKT蛋白表达的调控
目的:探讨针刺对哮喘大鼠肺组织中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)蛋白表达的影响.方法:将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组和雾化阻断剂组,每组10只.模型组、针刺组、雾化阻断剂组分别用卵蛋白激发制备大鼠哮喘模型.自造模之日起,针刺组每次雾化激发前先进行针刺干预,穴取"大椎""肺俞""风门";雾化阻断剂组给予雾化阻断剂LY294002干预,均隔日1次,共7次.空白组和模型组不干预.采用HE染色观察各组大鼠肺组织形态学改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织AKT蛋白的表达.结果:HE染色显示模型组大鼠气道周围有多种炎性细胞的浸润和聚集,支气管平滑肌痉挛,管腔狭窄;针刺组和阻断剂组有少量炎性细胞,管腔狭窄、管壁增厚程度较模型组轻.模型组AKT蛋白表达较空白组高(P<0.05);与模型组比较,针刺组、雾化阻断剂组AKT蛋白表达较低(均P<0.05);针刺组与空白组、雾化阻断剂组差异无统计学意义(均P>0.05).结论:针刺可降低哮喘大鼠肺组织中AKT蛋白表达以减轻炎性反应和改善气道重塑.
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补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织AKT 蛋白表达的影响研究
目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织AKT蛋白表达的影响.方法:选取SPF级SD雄性大鼠90只,将大鼠随机分为五组,假手术组10只,模型组、阳性组、高剂量补阳还五汤组、低剂量补阳还五汤组各20只.以阳性组为标准对照,模型组为空白对照.假手术组、模型组分别给10 mg/kg蒸馏水,阳性组给予6.8 mg/kg硫酸氢氯吡格雷,低剂量、高剂量组大鼠每天给予13 g/kg、26 g/kg补阳还五汤溶液,持续2周.取大脑中海马体部分固定、包埋后,行石蜡切片及HE染色.光镜下观察海马体组织病理组织学变化.制备蛋白样品、电泳、转膜、发生免疫反应,凝胶成像分析软件检测目标蛋白荧光强度,测定AKT、p-AKT蛋白表达.结果:模型组海马组织细胞排列紊乱,数量减少,细胞核固缩深染,染色质凝聚,空泡样变性坏死数量增加.假手术组海马体区不产生缺血性表现,细胞形态、结构正常.给药组多数神经细胞结构、形态改变相对较轻,核固缩少,且高剂量组对脑损伤的改善程度大于低剂量组.模型组p-AKT阳性细胞率显著高于假手术组(P<0.01);阳性组、补阳还五汤高剂量组p-AKT阳性细胞率显著高于模型组(P<0.01).模型组p-AKT蛋白表达水平显著低于假手术组(P<0.01);阳性组、补阳还五汤高剂量组p-AKT蛋白表达水平显著高于模型组(P<0.01);各组间AKT蛋白表达无统计学差异(P>0.05).结论:补阳还五汤可激活PI3K/AKT信号通路,信号通路中AKT、p-AKT蛋白表达升高,促进AKT磷酸化.补阳还五汤还可保护神经血管结构和功能,改善脑缺血再灌注组织病理损伤,发挥保护脑作用.
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AKT-p27Kip1-Cyclin E在胃癌组织中的表达及意义
目的:探讨AKT、p27Kip1与Cyclin E表达在胃癌发生发展中的意义.方法:收集2008-01/2010-01湘潭市第一人民医院和南华大学附属南华医院的活检标本和胃癌手术切除标本,包括正常胃黏膜组织14例（胃镜活检标本）、非典型增生胃组织10例（胃镜活检标本）、胃癌组织94例、癌旁组织49例,淋巴结转移胃癌组织35例,制作成组织芯片,每个蜡块设计5×10点阵,阵列的后一排的后一孔为空白标记,确定方位顺序.采用免疫组织化学染色,检测胃组织芯片中AKT蛋白、p27Kipl蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白表达.方向.结果:与正常胃黏膜、癌旁和非典型增生组织相比,AKT蛋白磷酸化和Cyclin E蛋白在原发癌、淋巴结转移癌中表达升高(AKT:85.1％,85.7％ vs 14.3％,26.5％,30.0％; CyclinE:85.1％,82.9％ vs 14.3％,34.7％,20.0％,均P＜0.01),而p27Kip1蛋白磷酸化水平降低(22.3％,17.1％ vs 71.4％,44.9％,40.0％,P＜0.01)；与正常胃黏膜组织比较,AKT蛋白磷酸化在非典型增生组织中表达上调(P=0.26）.结论:AKT、p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白表达与胃癌的发生发展有关,随着AKT蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白表达水平的升高,p27kipl蛋白磷酸化水平降低.
关键词： 胃癌 Akt蛋白 p27Kip1蛋白 Cyclin E蛋白 组织芯片 -
桂皮酸对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨桂皮提取物桂皮酸对胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖和凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 以胰腺癌BxPC-3细胞为研究对象,用不同浓度(0～8 mmol·L-1)桂皮酸分别处理24、48、72h后,CCK-8比色法检测细胞活力;桂皮酸(0、1、2、4 mmol ·L-1)处理BxPC-3细胞48 h后,PI/Annexin Ⅴ检测细胞凋亡率,Western blot法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、PTEN、Akt、p-Akt蛋白表达的影响.结果 桂皮酸能有效抑制BxPC-39细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;桂皮酸处理BxPC-3细胞48h后,细胞凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调;此外,桂皮酸可上调PTEN蛋白表达,并下调Akt蛋白磷酸化.结论 桂皮酸可抑制BxPC-3细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与上调PTEN蛋白表达并抑制Akt蛋白磷酸化,继而上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白相关.
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依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力影响的研究
目的 研究依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力的影响及其作用机制.方法 将实验分为空白组、对照组、实验A组和实验B组,分别用0.9％ NaCl、4mmol·mL-1丙泊酚、10μmol·mL-1依托咪酯和10 μmol·mL-1依托咪酯+荷包牡丹碱原液(DIDS)处理72 h.用电流钳技术观察垂体瘤细胞的表面氯离子通道电流,用Western blot法检测垂体瘤细胞中Akt蛋白表达,用划痕实验检测垂体瘤细胞的迁移能力.结果 与空白组相比,对照组和实验A组可以显著增高同一电压刺激下垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均有统计学意义(均P＜O.05),但空白组和实验B组对垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均无统计学意义(均P ＞0.05).空白组、对照组、实验A组和实验B组的Akt蛋白表达量分别为(0.73±0.19),(0.32±0.08),(0.35±0.10)和(0.71±0.17)单位,Akt磷酸化水平分别为(0.68±0.17),(0.29±0.07),(0.31 ±0.09)和(0.65 ±0.14),迁移能力分别为(2.82±0.37),(1.26±0.15),(1.29±0.17)和(2.74±0.45)×105个,对照组和实验A组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 依托咪酯可以抑制垂体瘤细胞的迁移,其可能的机制是通过与细胞表面γ-氨基丁酸受体的结合刺激细胞表面氯离子通道开放,进而抑制Akt蛋白的表达,下调PI3 K/Akt信号通路的活性,终抑制垂体瘤细胞的迁移.
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促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对AKT蛋白表达的影响
目的 观察促红细胞生成素(EPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对蛋白激酶B (AKT)蛋白表达的影响.方法 30只成年雄性SD大鼠先按随机数字表法分为2组,假手术(Sham)组(n=6)和模型(Model)组(n=24);模型组采用腹主动脉缩窄术建立CHF模型,术后8周存活16只,再随机分为EPO组与对照(Control)组各8只.EPO组予以3 000 U/kg EPO腹腔注射,3次/周,连续4周;Sham组、Control组给予等量的生理盐水.分别在术后4周、8周、12周(即给药4周)行心脏彩超检查大鼠心功能.第12周末全部大鼠禁食24 h后处死,观察心肌组织细胞形态、心肌细胞凋亡及计算凋亡指数(AI);采用Western blot法检测心肌P-AKT/AKT蛋白表达情况.结果 超声心动图显示Model组4周时出现心室肥厚,8周时出现心力衰竭;EPO干预4周后较Control组左室射血分数(LVEF)明显升高(P<0.05),收缩末期室间隔厚度(IVSs)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)、舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)明显降低(P<0.05).EPO组AI较Control组显著降低(23.87%±1.45%vs 35.58%±2.81%,P<0.01);与Sham组(0.81±0.17)比较,Control组(0.35±0.06)P-AKT/AKT OD值明显降低,EPO组(1.61±0.16)较Control组升高(P<0.01).结论 EPO可有效改善CHF大鼠的心功能,抑制心肌细胞凋亡,促进AKT的磷酸化.
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白藜芦醇对同型半胱氨酸损伤的人脐静脉内皮细胞的Akt通路和小窝蛋白的影响
目的：探讨Akt通路和小窝蛋白-1（Cav-1）在白藜芦醇（Res）抗人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模型动脉粥样硬化（AS）过程中的作用。方法利用同型半胱氨酸（ Hcy）诱导内皮细胞损伤模型，测定Res对于 Akt蛋白表达的影响。通过哌立福新抑制Akt蛋白表达后，观察 Res对一氧化氮（NO）系统及Cav-1表达的作用。进一步利用siRNA抑制Cav-1的表达后，进一步研究Res对NO系统的影响。结果（1）白藜芦醇可抑制Akt蛋白的表达；（2）在抑制Akt蛋白表达后，NO系统表达明显升高，且与Res浓度呈正相关，而 Cav-1表达无明显变化，但在加入Res后Cav-1表达明显下降；（3）siRNA沉默Cav-1后，NO系统表达明显升高，且与Res无浓度依赖性。结论 Res通过抑制Cav-1的表达，抑制Akt活性，促进NO系统的作用，改善AS。
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G蛋白偶联受体30和磷酸化AKT蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及意义
目的:对笔者所在医院接受治疗的子宫内膜腺癌患者的生物样本进行实验室研究,分析G蛋白偶联受体30(GPR30)和磷酸化AKT蛋白(P-AKT)在肿瘤组织中表达的意义,并进行二者之间相关性分析.方法:选取2011年-2012年来笔者所在医院接受治疗的子宫内膜腺癌患者180例的活体组织样本和50例正常子宫组织制成蜡块切片,采用EnViSion免疫组化法和FISH法对每个标本中的GPR30和P-AKT进行其相关的基因阳性表达水平进行检测,观察免疫组化评分与FISH检测G蛋白偶联受体30和磷酸化AKT蛋白的高表达与基因扩增之间的重叠率,统计二者在不同的肿瘤组织中表达率,影响二者的表达因素及二者相关性探究.结果:GPR30和P-AKT的免疫组化结果显示其阳性表达与FISH检测结果重叠率分别为74.5%、56.6%,差异显著(P<0.05);GPR30和P-AKT在正常子宫内膜中阳性表达率均明显低于子宫内膜腺癌内阳性表达率,差异均有统计学意义(P<0.05);GPR30和P-AKT的表达与患者的年龄、组织分化程度、是否出现淋巴道转移及基层浸润深度有关(P<0.05);GPR30和P-AKT之间存在明显的相关性,且相关性较好(字2=14.08,P<0.05,Φ=0.2693).结论:FISH法与EnViSion免疫组化法检测GPR30和P-AKT重叠率较好,GPR30和P-AKT与子宫内膜腺癌之间可能存在因果联系,且CPR30和P-AKT之间能够相互影响,在临床治疗过程中可根据GPR30和P-AKT判断组织分化程度和基层浸润深度,在明确诊断上有一定的意义.
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食管癌中AKT和PTEN蛋白表达及其临床相关性研究
目的:探讨食管癌组织中AKT和PTEN的表达及其临床相关性.方法:应用Western blot和免疫组织化学方法检测42例食管癌组织及其癌旁组织中AKT,PTEN蛋白的表达情况.结果:食管癌组织中,AKT蛋白水平高于癌旁组织(P＜0.01),PTEN蛋白水平低于癌旁组织(P＜0.01),二者呈负线形相关(r=-0.583,P＜0.01).AKT蛋白表达在Ⅲb-Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的食管癌中的表达高于Ⅱ-Ⅲa期、高分化、元淋巴结转移的食管癌(P＜0.01),而PTEN则完全相反(P＜0.01).二者的表达均与年龄、性别、肿瘤大小无关(P＞0.05).结论:AKT蛋白的高表达在食管癌的发生、发展起重要作用,而PTEN则抑制这一作用过程.
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慢性萎缩性胃炎组织中Bmi-1、pAkt与临床病理参数的关系
目的 研究慢性萎缩性胃炎组织中Bmi-1、pAkt蛋白表达与临床病理参数间的关系.方法 收集300例慢性萎缩性胃炎的患者,活检取得病理标本,行常规病理学检查,采用免疫组织化学法检测Bmi-1及pAkt蛋白表达,并研究蛋白表达与临床病理参数间的关系.结果 Bmi-1及pAkt蛋白在慢性萎缩性胃炎组织内的表达阳性率明显高于周围正常组织(P＜0.01),且慢性萎缩性胃炎组织中Bmi-1、pAkt蛋白表达与性别、年龄、Hp感染无关(P＞0.05),而与慢性炎症、萎缩、肠化、不典型增生有关(P＜0.01).结论 Bmi-1在慢性萎缩性胃炎组织内表达升高,检测慢性萎缩性胃炎患者Bmi-1的表达有助于预测其癌变风险.
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骨髓瘤细胞对血管内皮细胞的促生长作用及机制
目的:研究多发性骨髓瘤细胞对人内皮细胞增殖、迁移、血管生成及对内皮细胞AKT、pAKT蛋白水平的影响.方法:采用多发性骨髓瘤细胞株U266与人脐静脉内皮细胞(HVVEC)混合共培养；以同期单独培养的HUVEC 为对照,用CCK-8、划痕试验检测共培养组和对照组HUVEC的增殖、迁移能力.观察在Matrigel基质中两组HUVEC 管状结构生成的情况；Western blot方法检测共培养组和对照组HUVEC AKT、pAKT的蛋白表达水平.结果:与同期单独培养的HUVEC相比,共培养体系中的HUVEC细胞增殖明显增加,共培养组HUVEC迁移能力明显增强(125±21/视野vs.332±37/视野),共培养组HUVEC管状结构形成数量明显增加(小管数量分别为3.7±1.3/视野vs.8.3±2.7／视野).共培养体系中HUVEC pAKT表达水平明显升高.AKT表达无明显变化.结论:骨髓瘤细胞能明显促进血管内皮细胞增殖、迁移和血管生成.多发性骨髓瘤促进HUVEC增殖、迁移和血管生成的作用与AKT信号通路有关.
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子宫腺肌病中PTEN和Akt的表达及其相关性研究
目的 探讨子宫腺肌病病灶中10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(PTEN)和蛋白激酶B(PKB/Akt)的蛋白表达情况,旨在为子宫腺肌病的发生发展以及治疗提供理论依据.方法 采用免疫组织化学SP法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜(27例)、正常子宫内膜(20例)的腺上皮细胞和间质细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt(P-Akt)蛋白的表达并进行比较.结果 PTEN蛋白在腺上皮细胞中的表达,正常子宫内膜表达高于在位内膜和异位内膜(P<0.05,P<0.01),子宫腺肌病在位内膜的表达高于子宫腺肌病异位内膜的表达(P<0.01);Akt、P-Akt蛋白在子宫腺肌病异位内膜的腺上皮细胞中的表达强度高于在位内膜(P<0.05)和正常子宫内膜(P<0.01),其在位内膜腺上皮细胞中的表达强度高于正常子宫内膜(P<0.01).PTEN蛋白在间质细胞中的表达,正常子宫内膜明显高于子宫腺肌病的在位内膜和异位内膜(P<0.05),但在位内膜与异位内膜之间比较差异无统计学意义(P>0.05):Akt、P-Akt蛋白在间质细胞中的表达,异位和在位内膜明显高于正常内膜,异位内膜和在位内膜两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).FIEN与Akt、PTEN与P-Akt在子宫腺肌病异位内膜、在位子宫内膜和正常子弓内膜中的表达均呈负相关(r=-0.444;r=-0.546).结论 PTEN蛋白表达在子宫腺肌病的在位、异位内膜中减少;Akt、P-Akt蛋白表达增加.FIEN蛋白低表达不能有效的抑制Akt的激活,从而对子宫腺肌病的发生与发展起重要的作用.
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p-Akt-mTOR-p70S6K信号通路蛋白与卵巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性
目的:研究磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路中的p-Akt,mTOR和p70S6K 3种蛋白与卵巢癌临床病理特征及化学药物治疗(简称化疗)耐药的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测18例卵巢癌化疗耐药和25例化疗敏感组织中p-Akt,mTOR和p70S6K蛋白的表达,分析这些蛋白与卵巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性.结果:p-Akt蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为77.14%,50.00%和66.67%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为73.33%和75.00%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期中的表达分别为18.18%和93.75%,差异有统计学意义(P<0.05).mTOR蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为77.14%,100.00%和83.33%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为80.00%和78.57%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期中的表达分别为27.27%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05).p70S6K蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为80.00%,100.00%和100.00%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为93.33%和78.57%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期中的表达分别为45.45%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05).P-Akt蛋白在卵巢癌化疗耐药和敏感组织中的表达率分别为88.89%及64.00%;mTOR蛋白在耐药和敏感组织中的表达率分别为94.44%及68.00%;p70S6K蛋白在耐药和敏感组织中的表达率分别为100.00%及72.00%,3种蛋白在耐药组中的表达均高于敏感组(P<0.05).结论:p-Akt-mTOR-p70S6K信号通路中的3种蛋白可能参与卵巢癌的侵袭和转移,这3种蛋白的表达上调可能与卵巢癌化疗耐药有关,在临床上可作为预测卵巢癌化疗耐药的标志.
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缺氧对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及葡萄糖摄取和Akt表达的影响
目的 探讨缺氧对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)糖摄取、凋亡、增殖和Akt表达的影响.方法 将接种的P3细胞置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱中37℃孵育不同时间点(常氧、缺氧0.5、1、2、4和8 h)后分别取出,应用放射同位素法检测MSCs对氚标记-葡萄糖(3H-G)的摄取,应用Annexin V/PI双染法进行流式细胞仪(FCM)分析MSCs凋亡率(apoptotic rate,AR)和死亡率(dead rate,DR),应用MTT分析细胞增殖状态以及检测Akt蛋白表达.结果 培养的P3骨髓单个核细胞CD29+、CD71+、CD44+、CD34-和5-aza诱导后表达Tn T及骨诱导分化液诱导后细胞ALP+等证实其为骨髓MSCs;各缺氧时间点3H-G摄取量较缺氧前均显著性降低(P<0.01),而各缺氧时间点之间没有统计学意义(P>0.05);MSCs常氧、缺氧0.5、1、2、4、6和8 h时的AR均较缺氧前显著增高(P<0.01)、DR亦显著增高(P<0.05),不过,随着缺氧时间延伸,AR显著增加(P<0.05),而DR没有统计学意义(P>0.05);缺氧不同时间点MTT法OD值较常氧(缺氧结束同步时间点)均显著性降低(P<0.01),并随缺氧时间延伸显著降低(P<0.05),不过,与常氧(缺氧8h开始同步时间点)相比,均显著升高(P<0.05);与常氧相比,各缺氧时间点Akt蛋白IOD均显著增强(P<0.05),而各缺氧时间点改变无统计学意义(P>0.05).结论 缺氧既可引起MSCs摄糖量下降、增殖滞缓,又可上调Akt蛋白表达和促进MSCs凋亡.
关键词： 大鼠骨髓间充质干细胞 缺氧 摄3H-G量 细胞凋亡 Akt蛋白 -
密集化疗对乳腺癌术后患者调节性T细胞及AKT蛋白的影响
目的 探讨密集化疗方案对乳腺癌患者调节性T细胞及AKT蛋白含量的影响.方法 收集具有术后复发高危因素的乳腺癌患者36例并随机分为观察组及对照组各18例,前者给予表阿霉素(EPI)联合环磷酰胺(CTX)并序贯紫杉醇(PTX)的2周化疗方案,后者给予EPI联合PTX的3周化疗方案;于化疗前及化疗结束后1周分别采集患者的外周血,采用流式细胞术检测CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的数量;使用免疫组化SP法对病灶活检进行AKT蛋白的免疫组化检测,并采用图像分析软件对AKT蛋白的含量进行定量分析.结果 治疗前两组患者的Treg数量及AKT蛋白表达比较,差异均无显著性(P＞0.05);治疗后观察组患者Treg下降为(9.32±2.47)%,明显低于对照组的(12.96±3.65)%,差异有显著性(P=0.021);治疗后观察组AKT抗原表达密度比值下降为(0.371±0.096),对照组为(0.512±0.108),组间差异具有显著性(P=0.016);相关性分析显示,Treg与AKT蛋白含量呈显著正相关性(r=0.786,P=0.013).结论 密集化疗方案较常规方案更加有效降低具有术后复发高危因素的乳腺癌患者的Treg及AKT蛋白.
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Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖
目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.
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过氧化物酶体增殖因子激活受体α在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞的影响
目的 探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体α (peroxisome proliferators-activated receptor α,PPARα)蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响.方法 应用实时荧光定量PCR法检测PPARα mRNA在各级别胶质瘤组织中的表达水平;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测予PPARα激动剂后胶质瘤细胞的增殖、凋亡和周期的改变;应用荧光分子探针,2',7'-二氯二氢荧光素双乙酸盐法进行胶质瘤细胞内活性氧检测;Western印迹法检测AKT信号通路和PPARα下游功能蛋白的变化.结果 胶质瘤组织中PPARα的表达随着胶质瘤级别的升高而降低,增加其蛋白活性后细胞内活性氧积聚增多,并引起AKT和CyclinD1蛋白表达下降;U87胶质瘤细胞生长受到抑制,细胞生长阻滞在G1期且凋亡增加.结论 PPARα在胶质瘤中低表达;增强其蛋白活性可以造成细胞内活性氧积聚,并能影响AKT信号通路,抑制功能蛋白CyclinD1的表达,进而调控胶质瘤细胞的生长.
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RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响
目的 探讨RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组化染色法检测RAS蛋白在正常脑组织及各级别胶质瘤组织中的表达水平,并采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测降低RAS活性后U251细胞的增殖和凋亡情况；用Western印迹法检测ERK和AKT信号通路.结果 胶质瘤组织中RAS的表达随胶质瘤恶性程度增高而增强.抑制RAS 蛋白活性后,RAS信号通路的下游分子ERK和AKT蛋白磷酸化水平降低；U251胶质瘤细胞生长受抑制,细胞生长阻滞在G1期且凋亡增加.结论 RAS蛋白在胶质瘤中高表达,抑制其活性可下调ERK和AKT 信号通路,进而调控细胞的生长.
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EGFR、Raf、Akt在食管鳞癌中的表达及其临床意义
目的:检测食管鳞癌中EGFR信号传导通路相关分子EGFR、Raf、Akt的表达情况及三者之间的相互关系.方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测60例食管鳞癌组织和15例食管正常黏膜中EGFR、Raf、Akt的表达情况.结果:在60例食管癌中EGFR、Raf、Akt阳性表达率分别为61.6%(37/60)、56.6%(34/60)和67%(40/60),15例食管正常黏膜中分别为33.3%(5/15)、13.3%(2/15)和20%(3/15);EGFR、Raf和Akt表达与鳞癌分级及肿瘤侵犯深度无关(P＞0.05),与淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:食管鳞癌组织EGFR、Raf、Akt的过表达可能与食管癌的发生发展有关;有可能成为靶向治疗的新靶点.
