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依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力影响的研究
目的 研究依托咪酯对垂体瘤细胞迁移能力的影响及其作用机制.方法 将实验分为空白组、对照组、实验A组和实验B组,分别用0.9％ NaCl、4mmol·mL-1丙泊酚、10μmol·mL-1依托咪酯和10 μmol·mL-1依托咪酯+荷包牡丹碱原液(DIDS)处理72 h.用电流钳技术观察垂体瘤细胞的表面氯离子通道电流,用Western blot法检测垂体瘤细胞中Akt蛋白表达,用划痕实验检测垂体瘤细胞的迁移能力.结果 与空白组相比,对照组和实验A组可以显著增高同一电压刺激下垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均有统计学意义(均P＜O.05),但空白组和实验B组对垂体瘤细胞表面的氯离子通道电流的影响,差异均无统计学意义(均P ＞0.05).空白组、对照组、实验A组和实验B组的Akt蛋白表达量分别为(0.73±0.19),(0.32±0.08),(0.35±0.10)和(0.71±0.17)单位,Akt磷酸化水平分别为(0.68±0.17),(0.29±0.07),(0.31 ±0.09)和(0.65 ±0.14),迁移能力分别为(2.82±0.37),(1.26±0.15),(1.29±0.17)和(2.74±0.45)×105个,对照组和实验A组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 依托咪酯可以抑制垂体瘤细胞的迁移,其可能的机制是通过与细胞表面γ-氨基丁酸受体的结合刺激细胞表面氯离子通道开放,进而抑制Akt蛋白的表达,下调PI3 K/Akt信号通路的活性,终抑制垂体瘤细胞的迁移.
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SGK-1在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达及作用探讨
目的 观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK-1)在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达,并探讨其在这一过程中的作用.方法 将AtT-20细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入50、100、200 μmol/L CoCl2(模拟缺氧),对照组不处理,采用MTT法检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值;将200 μmol/L CoCl2加入AtT-20细胞,培养0、24、48、72、96 h时采用流式细胞术测算细胞凋亡率,分别采用半定量PCR法和Western blot法检测SGK-1 mRNA及蛋白.将AtT-20细胞随机分为4组,A、B组转染干扰质粒SGK-1 siRNA,C、D组转染对照质粒siCon,转染24 h后A、C 组加入200 μmol/L CoCl2,B、D组不处理,分别采用MTT法和流式细胞术检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值及细胞凋亡率.结果 缺氧处理72 h后,观察组随着CoCl2浓度增加及作用时间延长,AtT-20细胞增殖的A570值逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).与0 h时比较,处理24、48 h时细胞凋亡率无明显变化,处理72、96 h时细胞凋亡率增加(P均<0.05);与0 h时比较,处理24、48时AtT-20细胞SGK-1 mRNA及蛋白表达量均增加(P均<0.05),72 h后其表达量无显著变化(P均>0.05).A组缺氧后各时点细胞增殖的A570值均低于其余各组,C组缺氧后72、96 h细胞增殖的A570值高于A组而低于B、C组(P均<0.05).A组缺氧后各时点细胞凋亡率均高于其余各组,C组缺氧后72 h细胞凋亡率低于A组而高于B、C组(P均<0.05).结论 缺氧可抑制AtT-20细胞增殖、促进其凋亡,该过程中SGK-1表达增加可保护细胞免受缺氧导致的损伤.
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MiR-150在大鼠垂体瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响
目的 探讨微小核糖核酸-150(miR-150)在大鼠垂体瘤细胞中的表达及其对垂体细胞增殖的影响.方法 选用5周龄Fischer344雌性大鼠20只,按实验要求分为对照组(n=10)与观察组(垂体瘤组,n=10).观察组大鼠皮下埋置10 mg雌激素缓释泵诱导垂体瘤模型,对照组小鼠皮下埋置生理盐水缓释泵作为对照.造模成功后,观察组及对照组分别取垂体瘤组织及正常垂体组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-150的表达.培养正常的大鼠垂体细胞,用miR-150 mimics和miR-150 mimics control分别转染正常的垂体细胞,并观察其对细胞增殖功能的影响.结果 结果显示观察组组织中miR-150的表达量为(0.39±0.10),明显低于对照组的(1.47±0.37),差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-150 mimics的正常垂体细胞增殖(1.16±0.11),相对于转染miR-150 mimics control的(1.82±0.13)显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-150在垂体瘤中表达下调,其可能调控垂体细胞的增殖从而抑制垂体瘤的发生.
关键词： 微小核糖核酸-150 垂体瘤 垂体瘤细胞 增殖
