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氯化钴诱导人SK-N-SH细胞凋亡的研究
在神经系统中,脑组织的活动需要大量的能量,这些能量主要是由线粒体的有氧呼吸产生.虽然人脑组织的的重量仅占人体重的2%,但其耗氧量却极高,脑组织无疑是缺氧损伤的重要靶器官.近年来,关于脑缺氧损伤的研究比较多,但主要体现在缺氧导致的生理生化改变,很少在分子水平上阐述这一问题.鉴于此,我们拟建立神经细胞缺氧的体外模型,供今后研究神经细胞缺氧凋亡的机制.氯化钴(CoCl2)为红色单斜晶体,被广泛用于诱导细胞化学缺氧损伤.SK-N-SH细胞为人神经母细胞瘤细胞株.因此本研究利用CoCl2诱导SK-N-SH细胞,并检测此模型能否有效模拟缺氧条件下脑神经细胞的凋亡.
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海风藤对氯化钴诱导PC12细胞凋亡的保护作用
目的 研究海风藤对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞凋亡的分子机制,从而确定海风藤对缺氧诱导的神经细胞凋亡的保护作用.方法 设立海风藤保护组,CoCl2诱导组和正常细胞对照组;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量和活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl的表达.结果 海风藤预保护的PC12细胞在CoCl2诱导后,与CoCl2诱导组相比,细胞形态有明显改善,细胞存活率显著上升,由28.7%变为65.1%(P＜0.01);培养基中LDH含量和ROS生成量明显下降,相应吸光度分别由29.8和18.3变为18.33及7.8(P＜0.01);细胞ATP释放量明显增加,保护组为诱导组的1.2倍(P＜0.01);基因bcl-xl表达上升;Caspase-3在细胞凋亡中的活性被抑制,保护组为诱导组的81%(P＜0.01).结论 海风藤能通过抑制氧化应激损伤对线粒体功能破坏,增强bcl-xl的表达,抑制Caspase-3激活等机制提高细胞存活率,达到抑制CoCl2诱导PC12细胞凋亡作用.
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持续低氧增强人骨髓间充质干细胞体外增殖
目的探讨不同方式低氧对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖的影响.方法采用血球计数板计数法和流式细胞术分别观察了间歇性低氧(3% O2 、10% O2)和持续性低氧(3% O2 、10% O2、100 μmol/L CoCl2、200 μmol/L CoCl2)对hMSCs数量以及增殖指数的影响.结果间歇性低氧对hMSCs数量和增殖指数无明显影响;持续性低氧各组hMSCs数量和增殖指数均增加(P＜0.05).结论持续性低氧可促进体外培养的hMSCs增殖,说明持续性低氧作为体外的一种可控制因素,可调节hMSCs的增殖,对于hMSCs的临床应用具有一定的意义.
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氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡
目的研究氯化钴(CoCl2)预处理对大鼠海马神经元缺氧-复氧后凋亡的影响及其机制. 方法用CoCl2处理原代培养大鼠海马神经元,并使其暴露于无氧环境.用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙. 结果 CoCl2预处理明显减少海马神经元在缺氧-复氧后的凋亡数,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位具有稳定作用. 结论 CoCl2预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位有关.
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金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究
为探讨金雀异黄素(genistein,gen)对氯化钴(CoCl2)诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境.实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150 μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测.gen干预实验分为:①正常对照组;②CoCl2 150 μmol/L组;③CoCl2 150 μmol/L加gen 50 μmol/L组;④CoCl2 150 μmol/L加gen 100 μmol/L;组⑤CoCl2 150 μmol/L加gen 200μmol/L组.培养72小时检测.采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平.结果发现:CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系(p＜0.01);而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响(p＞0.05);gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达(p＜0.01).对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响(p＞0.05).结论:CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1αmRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平.
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血小板生成素通过PI3K/AKT通路防止CoCl2诱导内皮细胞凋亡
目的:研究血小板生成素(TPO)对化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用及其机制.方法:实验分为4组,体外培养的未经处理的HUVEC为对照组,CoCl2与HUVEC共培养的为CoCl2组,在加入CoCl2前用TPO预处理HUVEC为TPO+ CoCl2组,TPO单独处理HUVEC为TPO组.使用CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡蛋白酶Caspase-3的表达以及线粒体膜电位的变化.Western blot检测TPO对AKT通路磷酸化水平表达的影响.结果:CoCl2可以明显抑制HUVEC的生长,细胞存活率随着CoCl2的浓度的升高逐渐下降(r=-0.997);与对照组相比较,CoCl2组的细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),而TPO+CoCl2组的细胞凋亡率较前者明显下降(P＜0.001),提示TPO对HUVEC有保护作用.TPO还能减少细胞凋亡蛋白酶Caspase-3的表达和抑制细胞线粒体膜电位的降低,以及刺激HUVEC PI3K/AKT通路的活化.结论:TPO具有防止化学性缺氧所致的细胞凋亡作用,其机制可能是通过活化PI3 K/AKT通路,从而减少细胞凋亡蛋白酶Caspase-3的活化表达和稳定线粒体膜电位来发挥细胞保护作用.
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右美托咪定对化学性低氧环境下神经细胞的保护作用研究
目的：探讨右美托咪定（ Dex）在中枢神经细胞对抗化学性低氧环境损伤中的保护机制。方法建立化学性低氧环境的神经细胞模型，选取PC12细胞，采用右美托咪定及氯化钴（ CoCl2）的共同作用24 h。C组为空白对照组；Co组仅添加600μmol/L氯化钴；Dex组仅添加400μmol/L右美托咪定；CD组添加400μmol/L右美托咪定及600μmol/L氯化钴共同作用。采用Western blot法检测p38MAPK通路蛋白水平，采用MTT检测细胞存活率，采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，采用荧光光度法检测活性氧水平及线粒体膜电位水平。结果 Co组p38MAPK蛋白表达水平较C组明显上升，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组蛋白表达水平较Co组明显下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组对蛋白表达水平无影响，与C组比较差异无显著性（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞存活率明显降低、凋亡率明显提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞存活率得到明显的提升、凋亡率降低，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞存活率、凋亡率较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞活性氧水平明显提高、线粒体膜电位水平下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞活性氧水平明显降低、线粒体膜电位水平提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞活性氧水平及线粒体膜电位较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。结论右美托咪定对化学性低氧环境引发的神经细胞损伤的保护作用确切，其保护机制可能与抑制p38MAPK通路、活性氧生成有关。
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促红细胞生成素对大鼠视网膜 Müller细胞低氧损伤的保护作用
目的：探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞，分为N组（正常对照）、C50、C100、C150、C200、C300组（氯化钴浓度50，100，150，200，300μmol/L），MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响，确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组（正常对照），C组（200μmol/L氯化钴），E1C组（1×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E2C组（2×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E4C组（4×104 IU/LrhEPO＋200μmol/L氯化钴），MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时，细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始，细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组，E4C组高于E2C组和E1C组，C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示，C组低于N组，EPO干预各组蛋白表达均高于C组，并随EPO浓度增高表达增高，但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。
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高血糖对缺氧及非缺氧条件下培养的大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达的影响及机制
目的 探讨血糖对缺氧状态及非缺氧状态下大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的作用及机制. 方法 体外培养新生大鼠的心肌细胞,给予不同的处理因素培养6h,具体分组为:(1)正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖);(2)氯化钴(Cocl_2)模拟缺氧组(5.5mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2);(3)高葡萄糖组(11.1、22.2、33.3 mmol/L葡萄糖);(4)Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖组(11.1mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2,22.2mmol/L葡萄糖+400mmol/L Cocl_2>,33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/Lcocl_2);(5)高葡萄糖+抗氧化剂α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+100μmol/L α-tocopherol);(6) Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖+α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol).观察高葡萄糖、Cocl_2、高葡萄糖合并氯化钴对HIF-1α mRNA及蛋白表达的影响,以及给予α-tocopherol阻断氧化作用后,高葡萄糖、高葡萄糖合并Cocl_2对HIF-1α mRNA及蛋白表达影响的变化.结果 (1)与正常对照组相比,Cocl_2模拟缺氧后,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达增加;(2)在非缺氧状态下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加HIF-1α的表达逐渐增加;(3)Cocl_2合并高葡萄糖培养条件下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达逐渐减弱;(4)高葡萄糖合并α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+100 μmol/L α-tocopherol)培养条件下,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达较单纯高葡萄糖(33.3mmol/L)时减弱;(5)Cocl_2合并高葡萄糖及α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+400 μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol)的培养条件下,HIF-1α的表达较同样氯化钴合并高葡萄糖(33.3mmol/L Glu+400μmol/L Cocl_2)时增加. 结论 葡萄糖对非缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是增强其表达,而对缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是减弱其表达,其机制可能涉及活性氧(ROS)信号转导系统及氧化应激反应.
关键词： 高血糖 氯化钴 缺氧诱导因子1α 乳鼠心肌细胞 抗氧化剂α-tocopherol -
低氧模拟剂氯化钴诱导人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1 α、VEGF表达的研究
目的 在细胞水平探讨氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧状态下人类胆管癌细胞株QBC939HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况及其相关性.方法 ELISA技术和免疫组织化学技术检测不同浓度COCl2组(200、150、100、50 μmol/L,不加药组为对照组)、缺氧不同时间段(6、12、24、48 h)对QBC939细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响.结果 CoCl2可上调胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达,并且体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系.ELISA检测:不同浓度组(200、150、100、50 μmol/L、对照组)VEGF蛋白的浓度分别为(1215.8±8.1)、(1030.8±11.1)、(710.9±3.2)、(414.3±2.5)、(102.1±5.6)pg/ml,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧不同时间段(6、12、24、48 h)VEGF蛋白的浓度分别为(397.8±3.5)、(701.9±7.2)、(1038.8±8.2)、(1229.8±19.8)pg/ml,任意两组比较差异均有统计学意义(P(0.05).免疫组织化学检测:不同浓度组(200、150、100、50 μmol/L、对照组)VEGF蛋白的平均灰度分别为(123.1±5.9)、(146.9±4.3)、(154.6±4.9)、(162.7±4.5)、(172.7±1.8),与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),HIF-1α蛋白的平均灰度分别为(109.5±5.3)、(137.5±4.4)、(151.7±2.9)、(161.3±4.9)、(172.0±5.4),不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧不同时间段(6、12、24、48 h)VEGF蛋白的平均灰度分别为(154.8±3.8)、(142.9±2.7)、(136.6±4.7)、(110.3±4.9)任意两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).HIF-1α蛋白的平均灰度分别为(155.3±6.4)、(142.9±2.7)、(137.4±4.4)、(105.4±6.2),任意两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).分析不同浓度组及对照组、不同时间段HIF-1α和VEGF蛋白表达的相关性,相关系数分别为0.830、0.909,P均<0.01.结论 缺氧可以上调QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达,HIF-1α具有调控VEGF表达的作用.
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低剂量COCl2预处理降低耳蜗毛细胞和螺旋神经元的顺铂毒性
目的 研究低剂量氯化钴预处理对顺铂导致的耳蜗毛细胞和螺旋神经节损伤的保护作用.方法 体外培养小鼠耳蜗基底膜,随机分为4组:正常组、100μM氯化钴处理组、200μM顺铂处理组、100μM氯化钴预处理加200 μ M顺铂干预组,通过免疫荧光染色观察细胞状态并计数,通过蛋白质印记法检测各组Caspase 3、HIF-1α、NF-kB表达量.结果 氯化钴处理组与正常组之间无明显差异,顺铂处理组较正常组毛细胞和螺旋神经元损伤严重,氯化钴预处理加顺铂作用组毛细胞和螺旋神经元存活数目分别是顺铂处理组的2.81、1.40倍.氯化钴预处理组和顺铂组Caspase 3表达量分别比正常组高2.50、3.91倍.结论 氯化钴预处理对减轻顺铂对毛细胞和螺旋神经元的氧化应激损伤有明显作用.
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氯化钴诱导建立口腔鳞状细胞癌低氧模型及其生物学行为初探
目的 利用氯化钴(CoCl2)化学试剂模拟口腔鳞状细胞癌细胞低氧模型,探讨低氧环境对癌细胞生物学行为的影响.方法 用50、100、150、200 μmol/L的CoCl2化学试剂处理口腔鳞状细胞癌细胞株HSC-3及SCC-4,同时分为对照组(不含CoCl2的DMEM培养液培养细胞)和实验组(SCC-4、HSC-3细胞经不同浓度CoCl2处理).通过荧光定量PCR方法,首先在mRNA水平检测乏氧诱导因子1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)的表达,并用蛋白质印迹法进一步验证;通过细胞增殖及流式细胞术检测低氧对口腔鳞状细胞癌生长、凋亡及细胞周期的影响.采用细胞划痕及Transwell等检测细胞迁移能力的改变.结果 与对照组相比,150 μmol/L CoCl2培养24 h后,实验组SCC-4细胞内HIF-1α、VEGF及BCL-2的mRNA表达水平分别增加6.00±0.20、5.40±0.40和5.40±0.30;HSC-3细胞分别增加5.60±0.30、5.20±0.60、5.80±0.40.150 μmol/L的CoCl2培养2～3d后,HSC-3、SCC-4实验组与对照组相比,细胞生长速度降低,结果经t检验,P值均小于0.05;流式细胞术检测发现,150 μ.mol/L CoCl2培养后的细胞凋亡增加,对照组HSC-3细胞早期凋亡+晚期凋亡的比例为2.25％,实验组为5.82％;对照组SCC-4细胞早期凋亡+晚期凋亡的比例是2.58％,而实验组为10.27％.Transwell实验中对照组HSC-3和SCC-4细胞24 h迁移的面积占比分别为(31.5±2.3)％、(29.1±1.5)％,实验组该比率分别为(18.3±1.9)％、(13.2±0.8)％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 利用化学诱导剂CoCl2可在常氧条件下诱导出口腔鳞状细胞癌的低氧模型,肿瘤细胞内低氧标志物表达均明显提高,同时细胞生物学行为也发生改变,细胞增殖速度降低,凋亡增加,迁移速度降低.
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缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响
目的 探讨氯化钴(CoCl_2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响.方法 分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl_2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl_2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异.结果 经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl_2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl_2对细胞活力有负面影响.经50、100、150μmol/L CoCl_2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl_2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μnol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmaol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/LCoCl_2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异.bFGFmRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/L CoCl_2处理组在各时点没有显著差异.结论 适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl_2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用.
关键词： 成纤维细胞生长因子2 细胞低氧 氯化钴 -
大鼠玻璃体腔内注射氯化钴后视网膜的病理学观察
目的 给予大鼠玻璃体腔注射氯化钴溶液,观察其视网膜病理学变化.方法 将20只SD大鼠随机分为正常对照组、观察1周组、观察2周组、观察3周组,正常对照组不给予任何处理,正常饲养,其他各组给予左眼玻璃体腔注射4μl 3mmol/L的氯化钴,右眼注射4μl的0.01M磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为实验对照.分别于玻璃体腔注射后第1、2、3周末处死大鼠摘除眼球,利用常规病理切片HE染色及透射电镜观察视网膜组织损伤情况.结果 常规病理切片显示:玻璃体腔注射氯化钴的大鼠视网膜组织随着时间的延长,视网膜水肿,RGCs层变薄,RGCs细胞数量减少,细胞核皱缩,细胞排列紊乱;内、外核层细胞数量减少,细胞核皱缩;视锥、视杆细胞排列疏松、紊乱.透射电镜结果显示:视网膜内界膜水肿逐渐加重,外节膜盘结构逐渐紊乱,线粒体损伤严重.结论 大鼠玻璃体腔注射氯化钴可以造成视网膜组织的缺氧性损伤.
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氯化钴对大鼠脑缺血模型基质细胞衍生因子－1及趋化因子受体4表达的影响
目的：研究氯化钴预处理对脑缺血大鼠基质细胞衍生因子（ SDF－1）、CXC家族趋化因子受体4（CXCR4）蛋白表达的影响。方法45只SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、实验组，每组均15只。模型组及实验组，用线栓法制作脑缺血模型；在造模前2天与前1天，实验组腹腔注射氯化钴30 mg · kg－1。用蛋白质印迹法检测各组大鼠脑组织SDF－1、CXCR4蛋白表达，原位末端标记法（ TUNEL）检测各组大鼠脑细胞凋亡率，用氯化三苯基四氮唑（ TTC）染色并计算2d后脑组织缺血坏死面积。结果在各时间点，与假手术组（脑组织SDF－1、CXCR4蛋白表达极低）比较，实验组与模型组SDF－1、CXCR4蛋白表达均明显增高（ P＜0.05），提示氯化钴可上调SDF－1、CXCR4的表达；2 d后，实验组的脑细胞凋亡率明显低于模型组[（9.31±0.79）％ vs （18.99±1.13）％， P＜0.05]；实验组脑组织梗死灶面积也明显低于模型组（ P＜0.05）。结论氯化钴可上调SDF－1、CXCR4蛋白表达，减少脑细胞凋亡率，缩小脑细胞缺血坏死灶面积，对缺血脑组织具有保护作用。
关键词： 氯化钴 脑缺血 基质细胞衍生因子-1 趋化因子受体 预处理 -
氯化钴预处理对缺氧预适应小鼠海马组织HIF-1α表达的影响
目的 检测氯化钴预处理后小鼠海马组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在急性重复氧过程中的变化及其可能的机制.方法 用数字表法将Balb/C小鼠随机分为氯化钴实验组和生理盐水对照组,2组动物分别在实验前3 h注射氯化钴和生理盐水,进行0次(H0)、1次(H1)、4次(H4)缺氧暴露,随即分别取海马组织,用Western blot及EMSA法检测HIF-1α蛋白质含量及HIF-1 DNA结合活性.结果 生理盐水预处理后,小鼠的缺氧耐受时间逐次显著递增;氯化钴预处理后缺氧耐受时间恒定增高.氯化钴预处理H0、H1、H4组海马组织的HIF-1α蛋白质含量差异未见统计学意义,但HIF-1 DNA结合活性在H1组升高、H4组降低.生理盐水预处理组海马组织的蛋白质含量及HIF-1 DNA结合活性在H0、H1、H4组均依次增加.结论 氯化钴预处理能显著增强小鼠对缺氧的耐受能力、激活海马组织中的HIF-1,但其分子机制可能与急性重复缺氧暴露增强缺氧耐受力的机制不同.
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氯化钴预处理对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响
目的观察氯化钴对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响.方法用氯化钴(CoCl2)处理小鼠,观察小鼠在重复缺氧中缺氧耐受时间的变化及其离体海马脑片缺氧时群峰电位(PS)消失时间的变化.结果 CoCl2预处理小鼠的缺氧耐受时间不随缺氧次数的增加而增加,缺氧耐受性显著增高,CoCl2预处理小鼠离体海马脑片缺氧时群峰电位消失的时间比对照组明显延长,但明显低于预适应组.结论小鼠CoCl2预处理激活缺氧诱导因子-1(HIF-1),可对脑产生保护作用,但其机制可能不同于由急性重复缺氧获得的缺氧耐受机制.
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氯化钴诱导低氧对大鼠骨折愈合的影响
目的 探讨氯化钴诱导低氧对大鼠骨折愈合的影响.方法 选用80只SD大鼠,制作左胫骨干骨折模型后随机分为对照组和实验组,实验组术后连续注射氯化钴(10 mg/kg、ip、qd)7d.骨折后7d、14d、28 d、42 d取材,拍X线片观察骨折愈合情况,采用Western blotting和免疫组织化学方法检测骨痂组织细胞低氧诱导因子(HIF-1 α)和成骨性标志物骨钙素(Osteocalcin,OC)的表达情况,分析氯化钴对骨折愈合的作用.结果 术后42dX线片显示实验组骨折基本愈合,对照组仍可见模糊的骨折线,14 d、28 d、42 d组的Lane-Sandhu X线评分均较对照组高(P＜ 0.05);免疫组化显示实验组骨折后7d的HIF-1 α阳性细胞百分率高,后逐渐下降,但各时间组的百分率均高于对照组(P＜0.05);实验组中HIF-1α蛋白表达明显增多,其形成水平在骨折后第7天时高,并持续高表达至第14天,以后逐渐下降;OC表达趋势与之一致.结论 在大鼠骨折模型中,氯化钴能显著提高HIF-1α在骨痂组织的含量,同时增加OC的表达,促进骨折愈合.
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鹅膏蕈及镍铬钴混合物对小鼠肝毒性及SOD活性影响
目的 探讨鹅膏蕈镍铬钴混合物对小鼠肝毒性及SOD活性的影响.方法 鹅膏蕈镍铬钴混合物腹腔注射染毒小鼠,共3周.每周随机处死5只动物,称肝重、体重,测全血和肝SOD活性.结果 实验组小鼠生长缓慢,肝脏肿大,肝脏系数增高.染毒3周末,实验组小鼠肝重1.89±0.13g,肝脏系数6.21±0.18;对照组分别为1.60±0.20g和4.41±0.35,有显著性差异(P＜0.05).肝和全血SOD活性染毒1周后明显下降,第2周起又回升至原有水平,直到实验结束.病理学检查可见肝细胞变性坏死,小叶静脉充血,炎性细胞浸润.结论 鹅膏蕈镍铬钴混合物对肝脏有明显损伤作用,对体内SOD活性也有一定影响.
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天麻素改善氯化钴诱导大鼠缺氧性脑神经元损伤的效果
目的 研究天麻素对氯化钴诱导大鼠缺氧性脑神经元损伤的修复作用,为缺血缺氧性脑损伤的临床治疗提供实验依据.方法 取SD大鼠大脑皮质神经细胞,原代培养7d后按照培养皿编号,采用随机数字表法分为空白对照组、模型组、天麻素组及天麻素对照组,并实施相应处理.观察各组细胞形态学、神经元相对活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、EphA4表达的差异.结果 空白对照组神经元细胞相对活力显著高于其他各组,模型组神经元细胞相对活力显著低于天麻素组、天麻素对照组,天麻素组神经元细胞相对活力显著低于天麻素对照组(P＜0.01).模型组神经元细胞LDH活性显著高于其他各组,天麻素组、天麻素对照组神经元细胞LDH活性显著高于空白对照组(P＜0.01).模型组神经元平均累积吸光度(IOD)值显著高于其他各组,空白对照组神经元平均IOD值显著低于其他各组(P＜0.01).结论 天麻素能够显著降低大鼠缺氧损伤神经元EphA4表达水平,抑制神经元细胞LDH活性,增强细胞相对活力,对大鼠皮质神经元损伤的保护具有积极作用,值得进一步研究.
