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99Tcm-TF与99Tcm-HL91心肌乏氧显像评估SMI心肌活力进展
SPECT心肌灌注显像是评价冠心病心肌缺血的无创方法.99Tcm-TF作为新型心肌显像剂,标记简便无需水浴,本底清除快,有效缩短待检时间,诊断心肌缺血/梗死效果佳,但低估了心肌细胞的活性.18F-FDG PET心肌显像是评判心肌活力有效方法,但因其普及率低、费用昂贵,存在一定的检查失败率等因素而无法广泛使用.99Tcm-HL91是近年来研制的乏氧组织显像剂,能直接与乏氧心肌组织结合,乏氧心肌显著摄取,正常心肌摄取少,坏死心肌不摄取.SMI是冠心病发生发展过程中的一种表现,是冠心病其危险的因素之一,但又常被忽视.SMI患者行99Tcm-TF联合99Tcm-HL91乏氧显像,对心肌缺血范围、严重程度及心肌活力的判断、合理治疗方案的选择、预后疗效的判定及减轻患者综合医疗负担等方面均有积极作用.
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低氧对人胚胎干细胞多能性维持及印迹基因表达稳定性的影响
目的 研究低氧对人胚胎干细胞(hESC)生物学特性维持及印迹基因表达状态的影响.方法 在低氧(5％O2)条件下持续培养FY-hES-7细胞并采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR等方法对其胚胎干细胞特性进行鉴定.运用全基因组基因表达谱芯片技术及实时荧光定量PCR方法检测FY-hES-7早期(第32代)和晚期(第52代)细胞的55个印迹基因表达状态.所有检测同时以常氧(21％ O2)培养作为对照.结果 低氧条件下长期培养的FY-hES-7细胞具有和常氧条件下培养相似的生物学特性,阳性表达干细胞表面标志SSEA-3、SSEA-4、TRA- 1-60、TRA-1-81及碱性磷酸酶(AKP),但细胞克隆形态较常氧培养下典型,且未分化状态保持时间较常氧条件下更长.低氧长期培养后FY-hES-7细胞的55个印迹基因中,有15个印迹基因(27.27％)表达发生了变化(上调8个,下调7个),而常氧培养后则有39个印迹基因表达水平有变化(70.91％)(上调21个,下调18个),氧浓度对印迹的影响差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧更有利于hESC生物学特性的维持.长期培养能对hESC的印迹表达产生影响,但低氧培养条件下hESC的印迹稳定性要明显好于常氧培养.
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低氧环境对脐带间充质干细胞相关细胞因子表达的影响
目的：观察低氧环境对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、基质衍生因子-1（SDF-1）、干细胞因子（SCF）、胰岛素样生长因子（IGF-1）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）表达的影响。方法将第3代 hUCMSCs 分别置于20% O2（常氧组）和5% O2（低氧组）环境中培养，于8、24、32、48、56、72 h ELISA 法检测培养前及培养后上清液中 HGF、IGF-1、SDF-1、VEGF、bFGF、SCF、G-CSF 的浓度。结果低氧组培养上清液中 HGF、SDF-1、SCF、G-CSF 的浓度于培养后72 h 明显高于常氧组（P <0.05）；VEGF 的浓度于培养后56 h 明显高于常氧组（P <0.05）；bFGF 浓度于培养后32 h 明显高于常氧组（P <0.05）；IGF-1浓度在培养后较常氧组无明显变化（P >0.05）。结论脐带间充质干细胞培养后可持续表达细胞因子VEGF、HGF、IGF、bFGF、SCF、SDF-1和 G-CSF，且5%低氧培养环境可促进 VEGF、HGF、bFGF、SCF、SDF-1和G-CSF 的表达，但对 IGF-1表达无影响。
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缺氧诱导因子-1α在结直肠腺癌中的表达及意义
目的观察低氧培养条件下人结肠腺癌SW480细胞及人结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α) mRNA、蛋白表达,探讨HIF-1α在结直肠腺癌中的表达及在肿瘤血管形成中的作用.方法免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)检测SW480细胞及结直肠腺瘤、腺癌组织中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达;采用CD34标记血管内皮细胞计数微血管密度(MVD).用蛋白印迹法检测SW480细胞HIF-1α蛋白表达;原位杂交检测HIF-1α mRNA.结果 RT-PCR结果显示:低氧组SW480细胞HIF-1α mRNA表达显著升高,为常氧组的2.33倍.低氧+genistein组HIF-1α mRNA表达为常氧组的50.7%.原位杂交结果表明:HIF-1α mRNA表达低氧组(0.1628±0.0085)显著高于常氧组(0.1201±0.0038)和低氧+genistein组(0.1154±0.0056,P＜0.05).免疫细胞化学染色显示,低氧组细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达水平显著高于常氧组(P＜0.01,P＜0.05)和低氧+genistein组(P＜0.01,P＜0.05).蛋白印迹结果显示:低氧组HIF-1α蛋白表达显著高于常氧组,为常氧组3.54倍.低氧+genistein组HIF-1α蛋白约为常氧组的58.9%.结直肠腺瘤和腺癌HIF-1α mRNA阳性表达率分别为38.9%(7/18),67.7%(42/62).腺癌Dukes分期各组HIF-1α mRNA阳性细胞百分率均显著高于腺瘤组(P＜0.01),且Dukes分期A、B、C+D组间比较差异亦具显著性(P＜0.05).结直肠腺癌组织中HIF-1α、VEGF蛋白阳性率分别为43.5%(27/62)和37.1%(23/63).VEGF阳性细胞百分率腺癌组显著高于腺瘤组(P＜0.05),且随Dukes分期增加,VEGF 阳性细胞百分率也逐渐增加.腺癌组织中HIF-1α与VEGF蛋白表达一致的符合率达74.2%(46/62),两者的表达显著相关(P＜0.01).HIF-1α或VEGF表达阳性肿瘤组织与其相应的阴性组相比,两者MVD的差异有显著性(均P＜0.05).两者阳性者MVD值显著高于两者阴性的MVD值.结论低氧可诱导SW480细胞HIF-1α的过度表达而上调VEGF的表达.结直肠腺瘤癌变及结直肠腺癌发展过程中HIF-1诱导VEGF表达促进肿瘤血管生成而参与结直肠腺癌的发病机制.
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缺氧、高氧对肝星形细胞基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性的影响
目的研究缺氧、高氧对肝星形细胞基质金属蛋白酶Ⅱ(MMP-2)表达及其活性影响.方法分离大鼠肝星形细胞,在缺氧或高氧条件下培养,以免疫细胞化学标记链霉素卵白素生物素(LSAB)法及酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测细胞内MMP-2、基质金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ(TIMP-2)、膜型基质金属蛋白酶Ⅰ(MT1-MMP)的表达,和培养上清中MMP-2、TIMP-2的相对含量,并以酶谱法测培养上清MMP-2活力.结果 (1)缺氧培养12 h,MMP-2表达增高(缺氧组阳性指数:5.7±2.0; 对照组: 3.2±1.0, ; P<0.01),TIMP-2表达则降低(缺氧组阳性指数:2.5±0.7; 对照组: 3.6±1.0; P<0.05);培养上清中MMP-2酶活性明显降低(缺氧组总吸光度值:7.334±1.922; 对照组: 17.277±7.424; P<0.01).缺氧不同时段(6 、12 、24 h)比较,变化以6 h段明显.(2)高氧培养12 h,上清中MMP-2、TIMP-2蛋白相对含量均高于对照组,TIMP-2更明显(高氧组A450:0.050±0.014; 对照组:0.022±0.010; P<0.01),酶活性亦高于对照组(高氧组总吸光度值:5.252±0.771; 对照组: 4.304±1.083; P<0.05),高氧组MT1-MMP表达增强.结论肝星形细胞对氧敏感.缺氧使肝星形细胞 MMP-2表达增加,该影响在早期较明显;高氧主要使酶活性增强.
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心肌细胞缺氧损伤形式及牛磺酸的保护作用
目的:探讨心肌缺氧损伤形式及Tau保护作用.方法:将培养乳鼠心肌细胞分正常对照、Tau对照、缺氧+Tau和缺氧4组.用流式细胞术和DNA电泳判断细胞凋亡和坏死,测定培养液中CPK和LDH.结果:缺氧+Tau组CPK、LDH和坏死细胞均比缺氧组明显降低(P<0.05),但早期凋亡细胞无差别(P>0.05).两组各指标均比对照组明显升高(P<0.01).DNA电泳缺氧15h两组均见梯形带,缺氧48h均呈瀑布状.结论:缺氧引起心肌细胞凋亡和坏死.Tau可减轻细胞坏死,但对凋亡无抑制作用.
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藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Müller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响
目的 观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 改良Reichenbach等方法原代培养Müller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC.RMC培养基中加入终浓度10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L藏红花素,于1~7 d计数细胞,于24 h和48 h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素.培养液中加入终浓度为200 μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型.实验分4组:缺氧组(H组)、藏红花素处理组(C组)、缺氧+藏红花素处理组(HC组)和正常对照组(NC组),其中C和HC组培养液中加入10 μmol/L藏红花素.处理24 h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Western blot法半定量检测GFAP的表达.结果 含10 μmol/L和50 μmol/L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24 h和48 h RMC活性分别为(68±7)%、(59±9)%,与对照组相比,明显降低(t24h=3.723,P<0.05;t48h=4.103,P<0.05).在缺氧条件下,正常细胞和10 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用.在缺氧条件下,GFAP表达明显升高(t=2.945,P<0.05);藏红花素可部分抑制GFAP高表达(t=3.362,P<0.05).结论 缺氧能诱导体外培养视网膜Müller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Müller细胞死亡.
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人参皂苷 Rg1对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的保护作用
目的研究人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）对低氧-无血清培养诱导的大鼠骨髓间充质干细胞（ rBMSC）凋亡的保护作用及机制。方法 rBMSC在1％O2及无血清培养基条件下培养24 h，培养液中加或不加入人参皂苷Rg1，分析Rg1的作用。 Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率、罗丹明123染色检测线粒体膜电位、比色法检测Caspase-3酶活性，实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bad、Bax 基因的表达水平。结果与正常培养组（ C1组）比较，低氧-无血清培养基组（ C2组）细胞凋亡率是C1组的3.24倍， P＜0.01；线粒体膜电位明显下降；Caspase-3活性高5.17倍，P＜0.01；促凋亡基因Bad和Bax的mRNA表达分别增加1.16倍和0.5倍，P＜0.01和P＜0.05。人参皂苷Rg110μg/L（ Rg1-L组）、100μg/L（ Rg1-M组）和500μg/L （ Rg1-H组）细胞凋亡率分别较C2组下降19.4％、35.1％和65.5％，均P＜0.05。 Caspase-3活性在Rg1-L组与C2组之间无明显差异，但Rg1-M组和H组较C2组分别降低20％和21％，均P＜0.05。 Bad mRNA表达， Rg1-L组、Rg1-M组和Rg1-H组较C2组分别减少36.4％、50.3％和45.5％，P＜0.05或P＜0.01；Bax mRNA表达分别减少10.5％、56.7％和50.1％，P＜0.05或P＜0.01。 Bcl-2 mRNA表达，Rg1-M组和Rg1-H组较C2组分别增加53.4％和66.1％，均P＜0.05。 Bcl-xl mRNA表达水平组间比较差异无统计学意义。结论人参皂苷对低氧-无血清培养诱导的rBMSC凋亡有保护作用。
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促红细胞生成素对大鼠视网膜 Müller细胞低氧损伤的保护作用
目的：探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞，分为N组（正常对照）、C50、C100、C150、C200、C300组（氯化钴浓度50，100，150，200，300μmol/L），MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响，确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组（正常对照），C组（200μmol/L氯化钴），E1C组（1×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E2C组（2×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E4C组（4×104 IU/LrhEPO＋200μmol/L氯化钴），MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时，细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始，细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组，E4C组高于E2C组和E1C组，C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示，C组低于N组，EPO干预各组蛋白表达均高于C组，并随EPO浓度增高表达增高，但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。
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缺氧在肿瘤发病机制中的研究进展
在实体瘤中，由于肿瘤细胞增殖迅速，且肿瘤血管存在结构和功能性的异常，实体瘤内常存在缺氧区域。缺氧反应中重要的调控因子是缺氧诱导因子，其能通过转录激活多种下游靶基因，在肿瘤的发病机制中发挥重要作用。缺氧不仅促进肿瘤细胞改变代谢以增强存活能力，还能促进肿瘤生成血管、转移、扩散以及治疗抵抗等，以增强肿瘤的侵袭特性。因此，针对肿瘤缺氧的治疗是未来肿瘤治疗极具吸引力的靶点之一。
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缺氧致肿瘤恶性转化的分子机制
缺氧是实质性肿瘤微环境的基本特征之一,同时也是肿瘤发生恶性转化甚至转移的启动因子.许多临床研究均表明,肿瘤组织中存在的缺氧状态是肿瘤预后不良的指标.目前认为,缺氧致肿瘤恶性转化的分子机制主要是通过诱发肿瘤细胞的遗传不稳定性、筛选丧失凋亡潜力的肿瘤细胞以及诱导多种参与肿瘤细胞恶性转化的基因和蛋白的表达有关.并且这些已经发生恶性转化的肿瘤细胞极易通过缺氧诱生的肿瘤新生血管而发生远处转移目前已有研究通过阻断肿瘤的缺氧信号传导通路来达到治疗恶性肿瘤的目的,虽然刚刚起步,但前景广阔.
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缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响
目的研究不同程度缺氧条件下,肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达状况,及反义封闭HIF-1α后,对PPARα表达的影响,以了解PPARα和HIF-1α的相关性.方法首先将A549细胞分为4组:正常对照组(A组)、缺氧24小时组(B组)、缺氧48小时组(C组)、缺氧72小时组(D组).观察不同缺氧时间对PPARα及HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响.为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响,再设计4组:对照组2(E组),HIF-1α反义寡核苷酸组(F组),HIF-1α正义寡核苷酸组(G组),HIF-1α错义寡核苷酸组(H组).结果正常对照组,PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达;随着缺氧时间的延长,两者的表达水平逐渐升高.在缺氧24小时,两者mRNA和蛋白开始增高,48小时明显增高,至72小时达到高峰.反义封闭HIF-1α后, PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降.结论 PPARα及HIF-1α的表达水平随肿瘤细胞缺氧信号的加强而增加,且PPARα受HIF-1α的调控.
关键词： 肺肿瘤 细胞低氧 缺氧诱导因子1α 过氧化物酶体增殖物激活受体α -
内皮细胞在不同间歇缺氧方式时核因子κB和细胞间黏附分子1的变化
目的 测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧(IH)程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的变化.方法 在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH/ROX(再氧合)暴露环境,将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环.暴露时按IH/ROX时段将细胞分为11组,每组样本数为12.A组:采用21%O2 15 s/21%O2 3分钟45秒(即间歇正常氧)方案;B组:置于标准孵箱中不加暴露(标准孵育);C组:采用1.5%O215 s/21%O2 3分钟45秒方案;D组:采用10%O2 15 s/21%O2 3分钟45秒方案;以下固定IH方案为1.5%O2 15 s和ROX程度21%O2不变,IH/ROX循环频率分别为12次/h(C组)、9 次/h(E组)、6次/h(F组)、20次/h(G组)和40次/h(H组);I组:采用1.5%O230 s/21%O23分钟45秒方案;C组完成暴露后放回标准孵箱中60 min为J组,120 min为K组.分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度,并测定总蛋白含量.结果 C组NF-κB和ICAM-1水平分别为(0.82±0.28)、(1562±56) pg/ml,A组分别为(0.37±0.07)、(768±80) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(D值分别为225.00、176.04,P分别＜0.01、＜0.05);D组分别为(0.66±0.22)、(1113±76) pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为25.00、0.00,P均＜0.01);I组分别为(0.45±0.16)、(1155±19) pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为27.00、0.00,P均＜0.01);同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对高的(χ2分别为35.63、56.89,P均＜0.01);J组NF-κB水平[(0.6233±0.0534)]与C组比较差异无统计学意义(D=36.00,P＞0.05),而K组NF-κB水平[(0.3050±0.0013)]与C组比较差异有统计学意义(D=234.00,P＜0.01).结论 IH/ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复,中度频率的IH/ROX将选择性激活细胞炎性通道,而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道.
关键词： 细胞低氧 核因子κB 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 细胞间黏附分子1 -
线粒体膜电位对缺氧人肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用
目的 研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)的开放剂二氮嗪和线粒体膜电位在缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用.方法 培养HPASMC并将所培养的细胞分为6组:正常对照组(A组);MitoKATP阻断剂5-羟基癸酸盐(5-HD)组(B组);MitoKATP开放剂二氮嗪组(C组);慢性缺氧组(D组);慢性缺氧+二氮嗪组(E组);慢性缺氧+5-HD组(F组),每组样本数均为6.利用激光共焦显微镜成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、c-fos及c-jun的蛋白表达和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况.结果 C、D、E组细胞线粒体膜电位(以R123的荧光强度表示)分别为105±4、95±13、126±8,较A组(75±7)明显去极化(q值分别为5.474、3.659、9.213,P均＜0.05);C、D、E组细胞内氧自由基含量分别为3 045±126、3 116±34、3 236±31,与A组(2 772±49)比较差异有统计学意义(q值分别为6.882、7.448、16.289,P均＜0.05);C、D、E组细胞增殖活性[以MTT法检测出的A值表示]分别为0.305±0.022、0.328±0.078、0.440±0.023,与A组(0.237±0.013)比较差异有统计学意义(q值分别为2.993、 4.017、8.919,P均＜0.05),且E组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性与D组比较差异有统计学意义(q值分别为5.554、8.841、4.902,P均＜0.05).F组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性分别为71±4、2 863±132、0.264±0.045,与D组(95±13、3 116±34、0.328±0.078)比较差异有统计学意义(q值分别为4.367、5.907、2.832,P均＜0.05).结论 二氮嗪或缺氧能够通过开放HPASMC线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起线粒体膜电位去极化,增加细胞内氧自由基的含量,终导致HPASMC的增殖/凋亡的失衡,从而促进了缺氧性肺动脉重塑过程.
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长期缺氧对肺腺癌SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶表达及耐药性的影响
目的 探讨长期缺氧对SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶(GST-π)表达的影响及耐药性的改变.方法 SPCA1细胞常氧(20%O2)和缺氧(0.5%O2)条件下作用16 h后,提取RNA和蛋白,用定量RT-PCR的方法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和GST-πmRNA的表达情况,用Western blotting法检测HIF-1α蛋白;制备细胞悬液,用流式细胞仪测定GST-π表达;通过克隆形成实验分析SPCA1细胞对阿霉素和丝裂霉素的药物敏感性.通过RNA干扰技术下调HIF-1α表达后,分为对照组和干扰组,观察GST-π的表达.结果 设常氧组GST-π mRNA表达率为1,缺氧组为12.2.常氧组GST-π蛋白阳性表达率为(35.78±1.25)%,缺氧组为(72.13±2.11)%.与常氧组比较缺氧组HIF-1α表达明显增加.计算1%克隆存活的药物浓度,阿霉素处理细胞,常氧组浓度为(0.29±0.05)μg/ml;缺氧组浓度为(0.48±0.07)μg/ml;丝裂霉素处理细胞,常氧组浓度为(0.71±0.10)μg/ml;缺氧组浓度为(0.79±0.12)μg/ml.干扰HIF-1α后,HIF-1α mRNA与对照组比较下降了70%,而GST-πmRNA稍有下降.GST-π蛋白表达常氧条件下对照组为(32.14±1.23)%,干扰组为(30.88±1.65)%;缺氧条件下对照组为(64.78±2.45)%,干扰组为(67.42±2.21)%.结论 长期缺氧可诱导SPCA1细胞HIF-1α和GST-π表达增加,对阿霉素耐药性增加,对丝裂霉素没有影响,HIF-1和GST-π并没有直接的相关性.
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西罗莫司对缺氧/复氧诱导内皮细胞-中性粒细胞黏附的影响及机制
目的探讨西罗莫司对缺氧/复氧后血管内皮细胞表面黏附分子的表达和中性粒细胞-内皮细胞黏附的影响及机制.方法采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测黏附率,流式细胞术检测内皮细胞表面黏附分子E-选择素、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,Western杂交法检测内皮细胞c-Jun N端激酶(JNK)及核因子-κB[nuclear factor-κB,NF-κB(P65)]蛋白的表达.结果血管内皮细胞经缺氧/复氧处理后ROS释放增多,JNK及NF-κB(P65)蛋白表达增加,E-选择素、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的黏附增加,西罗莫司显著抑制缺氧/复氧的上述作用.结论西罗莫司抑制缺氧/复氧后血管内皮细胞与中性粒细胞的黏附,并可能通过抑制ROS、JNK、NF-κB的信号转导途径实现.
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肌纤形成调节因子1促进微丝修复减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的研究
目的 研究肌纤形成调节因子1(MR-1)通过促进心肌细胞微丝修复减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤.方法 原代培养的乳大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、模型组、过表达组、敲低组、过表达+模型组、敲低+模型组、转染对照组.采用RT-PCR检测MR-1、肌球蛋白调节型轻链2(MLC-2)mRNA表达,Western blot检测MR-Ⅰ、纤维状肌动蛋白(F-actin)/球状肌动蛋白(G-actin)、MLC-2蛋白相对含量和磷酸化,荧光染色法检测F-actin.结果 与模型组比较,过表达+模型组F-actin排列紊乱,其F-actin/G-actin比值升高22.4％ (P＜0.01),MLC-2 mRNA和蛋白表达和磷酸化分别升高26.8％、24.8％和29.6％(P＜0.01);而敲低+模型组F-actin排列紊乱,F-actin/G-actin比值降低10.1％(P＜0.01),MLC-2mRNA和蛋白表达及磷酸化分别降低18.8％、55.9％和37.6％(P＜0.01).结论 MR-1通过激活MLC-2/F-actin途径修复微丝,减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤.
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老年原发性肺癌患者缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1的表达及临床意义
目的 探讨缺氧诱导因子-1(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及老年人原发性肺癌组织中的表达及临床意义. 方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测氯化钴诱导缺氧下肺腺癌细胞A549的生长活性.分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)、免疫组化法测定缺氧不同时间下A549细胞及60例老年人原发性肺癌组织和26例老年人良性疾病(非癌组)组织中HIF-1α和GLUT-1的mRNA和蛋白表达,并分析HIF-1α、GLUT-1与临床病理特点之间的关系. 结果 肺腺癌细胞在缺氧下增殖能力较正常时增强.RT-PCR结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA的表达分别为0.69±0.08、0.65±0.09,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA表达分别为0.99±0.16、0.83±0.11,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.47±0.11、0.40±0.08(t值分别为3.81、4.97、6.35、7.89,P＜0.01);Western blot结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为1.57±0.29、1.66±0.28,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为2.31±0.46、2.22±0.34,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.93±0.07、1.06±0.17(t值分别为3.67、3.21、5.19、5.37,P＜0.01).肺癌组织中HIF-1α、GLUT-1的mRNA和蛋白阳性表达率明显高于非癌组(X2值分别为25.31、31.12、20.26、28.70,P＜0.01).有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ+Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(Ⅰ+Ⅱ期),差异有统计学意义(t值分别为2.56、2.19、3.46、2.15,X2值分别为5.14、4.15、7.54、5.57,P＜0.05).HIF-1α与GLUT-1的mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.527与r=0.408,P＜0.01). 结论 氯化钻诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1在肺腺癌细胞中的表达,加速肺癌细胞的生长,使之进一步耐受缺氧.HIF-1α、GLUT-1在老年人原发性肺癌组织中的过表达与肺癌的恶性进展有密切关系,联合两者的检测有助于老年人原发性肺癌的诊断及预后评估.
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前列腺间质细胞在低氧环境中活性氧的表达及其对细胞生长的影响
目的：探讨低氧环境中活性氧（ROS）在前列腺增生（BPH）中的作用。方法流式细胞仪检测BPH 组织及原代培养细胞中 ROS 的表达，荧光定量 PCR 法检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、雄激素受体（AR）、血管内皮生长因子（VEGF）、白介素-8（IL-8）的变化。低氧条件下用依达拉奉干预后，检测细胞生长及ROS、HIF-1α、AR、VEGF及 IL-8的变化。结果 BPH 组织在3％ O2条件下细胞ROS均升高（P＜0．01）、细胞增殖升高（P＜0．01）、细胞 HIF-1α、AR、VEGF及 IL-8表达上调（均P＜0．05）；在3％O2条件下依达拉奉干预后，ROS降低（P＜0．01），细胞 HIF-1α、VEGF 下调（均P＜0．05）；细胞增殖明显下降（P＜0．01）。结论低氧及低氧环境刺激产生的活性氧在前列腺增生中可能起关键作用。
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慢性间歇性低氧对老年大鼠血压和心肌线粒体氧化应激的影响
目的 探讨慢性间歇低氧对老年大鼠血压、交感神经活动、线粒体氧化应激状态的影响. 方法 建立慢性间歇低氧(CIH)大鼠模型,根据年龄不同以随机数字表法将84只雄性Wistar大鼠(3～4月龄和23～24月龄)分为4组,分别为青年对照组、青年CIH组、老年对照组和老年CIH组,CIH暴露3周,比较各组大鼠动脉压、颈动脉窦神经动作电位频率、肺功能差异,检测血浆中的儿茶酚胺、乌头酸酶/延胡索酸酶活性比值(A/F)、组织中的超氧化物歧化酶(SOD)水平. 结果 青年CIH组动脉血压比青年对照组增高[(150.4±25.6) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)比(102.2±7.4) mmHg,P＜0.01],老年CIH组[(132.8±16.2)mmHg]与老年对照组动脉血压[(127.1±26.8)mmHg]比较差异无统计学意义;与青年对照组比较,老年对照组通气量下降[(331.7±53.5)ml·min 1·kg 1比(554.8±111.9)ml· min-1·kg-1,P＜0.05],老年CIH组[(354.1±51.9) ml·min1·kg-1]与老年对照组通气量[(331.7±53.5)ml·min 1·k91]比较差异无统计学意义;比较低氧刺激不同年龄组颈动脉窦神经动作电位频率变化,老年对照组小于青年对照组[(6.2±5.5)倍比(11.8±6.6)倍,P＜0.01],老年CIH组小于青年CIH组[(22.2±13.5)倍比(44.2±12.1)倍,P＜0.01];血浆去甲肾上腺素、肾上腺素水平青年CIH组较青年对照组更高[(39.0±8.9) nmol/L比(20.8±10.6)nmol/L、(48.1±13.6)nmol/L比(26.7±14.3) nmol/L,均P＜0.05],老年对照组与青年对照组比较老年CIH组与老年对照组比较差异均无统计学意义;青年CIH组较青年对照组A/F降低[(0.26±0.13)比(0.58±0.04),P＜0.01],老年对照组较青年对照组减少[(0.29±0.02)比(0.58±0.04),P＜0.01],老年对照组和老年CIH组比较差异无统计学意义;青年CIH组较青年对照组SOD下降[(5.30±0.90) NU/mgprot比(6.10±1.73) NU/mgprot,P＜0.05],老年对照组和老年CIH组SOD比较差异无统计学意义. 结论 CIH对老年大鼠诱发高血压的影响与青年时期不同,表现为老年大鼠交感神经过度活动降低和线粒体氧化应激减轻,提示老化可能抑制了CIH影响血压的两个重要致病机制,降低了CIH对血压的不良影响.
