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促红细胞生成素对大鼠视网膜 Müller细胞低氧损伤的保护作用
目的：探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞，分为N组（正常对照）、C50、C100、C150、C200、C300组（氯化钴浓度50，100，150，200，300μmol/L），MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响，确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组（正常对照），C组（200μmol/L氯化钴），E1C组（1×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E2C组（2×104 IU/L rhEPO＋200μmol/L氯化钴），E4C组（4×104 IU/LrhEPO＋200μmol/L氯化钴），MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时，细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始，细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组，E4C组高于E2C组和E1C组，C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示，C组低于N组，EPO干预各组蛋白表达均高于C组，并随EPO浓度增高表达增高，但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。
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阻断谷氨酸-谷氨酰胺循环对大鼠脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用
目的 探讨阻断星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在脑缺血-再灌注损伤中的神经保护作用. 方法 采用大脑中动脉栓塞(MCAO)线栓法制备脑缺血-再灌注损伤动物模型,首次Longa神经功能评分1～3分者为模型建立成功.采用随机数字表法,将清洁级健康雄性SD大鼠30只完全随机分为空白对照组、假手术组、MCAO模型组、再灌注0h和1h给药组,每组各6只.MCAO模型组为栓线穿过大脑中动脉起始段并达大脑前动脉近端;假手术组为栓线至颈总动脉内,不阻断大脑中动脉血流;再灌注0h给药组为拔出栓线后立即腹腔注射L-蛋氨酸砜亚胺(MSO)50 mg/kg;再灌注1h给药组为拔出栓线再灌注1h后,腹腔注射MSO 50 mg/kg.拔出栓线24h后,行神经功能评分检测、脑梗死体积测定、谷氨酰胺合成酶(GS)活性和凋亡细胞检测. 结果 空白对照组和假手术组神经功能评分正常,脑组织内均未见梗死灶及凋亡细胞,GS酶活性差异无统计学意义(P ＞0.05);MCAO模型组GS活性低于空白对照组和假手术组,差异均有统计学意义[(176.7±2.8)×103U/g比(198.8±1.2)×103 U/g和(196.1±2.6)×103U/g,均P＜0.01].再灌注0h和1h给药组神经功能评分、脑梗死体积比、GS活性、凋亡细胞百分比分别与MCAO模型组比较,差异均有统计学意义[(1.2±0.4)分和(1.3±0.8)分比(2.5±0.6)分,(10.0±2.0)％和(20.9±1.1)％比(26.8±1.5)％,(22.2±1.2)×103 U/g和(22.0±1.2)×103 U/g比(176.7±2.8)×103U/g,(2.35±0.23)％和(4.36±0.30)％比(7.85±0.27)％,均P＜0.05];再灌注1h给药组神经功能评分、脑梗死体积比、GS活性与再灌注0h给药组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05);再灌注0h和1h给药组凋亡细胞百分比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 抑制GS酶活性,可阻断星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环,发挥神经保护作用.
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高糖环境下白细胞介素1β对大鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶的影响
目的 探讨高糖环境下白细胞介素1β(IL-1β)对视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶的影响及其机制.方法 将体外培养的大鼠Müller细胞随机分为对照组(5 mmol/L葡萄糖)和实验组(25 mmoL/L葡萄糖),分别以不同浓度的IL-1β(0、0.1、1.0、5.0、10.0 ng/ml)刺激24 h后,采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测两组细胞内谷氨酰胺合成酶(GS)和即早基因c-Jun的表达变化,使用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法测定两组细胞凋亡的情况.结果 细胞免疫荧光组化法和免疫印迹法检测显示在高糖环境下就有Müller细胞GS表达下降、IL-1β和c-Jun表达的升高(P＜0.05);IL-1β刺激24 h后,对照组和实验组Müller细胞中GS的表达都随IL-1β刺激浓度升高而逐渐降低同时c-Jun的表达随IL-1β刺激浓度的增加而升高,这一结果在高糖状态下尤为明显;流式细胞仪检测显示不同浓度的IL-1β刺激24 h后,两组细胞随着IL-1β浓度的增加凋亡率明显升高,在高糖环境下细胞凋亡率的增加更加明显.结论 模拟糖尿病状态下,免疫相关因子IL-1 β可使GS表达下降,从而影响了谷氨酸的循环,可能间接引起神经节细胞的死亡,出现早期神经视网膜功能的障碍.其可能机制为IL-1β激活了c-Jun途径而影响GS的功能.
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瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏与脊髓谷氨酸转运体-1和谷氨酰胺合成酶功能的关系
目的 探讨瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓谷氨酸转运体-1(GLT-1)和谷氨酰胺合成酶(GS)功能的变化.方法 取尾静脉置管成功的雄性SD大鼠32只,体重260～280 g,2～3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(I组)、瑞芬太尼组(R组)和瑞芬太尼+切口痛组(RI组).C组静脉输注生理盐水0.1 ml·kg-1·min-160 min;I组建立切口痛模型,同时尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg-1·min-160 min;瑞芬太尼组(R组)尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg-1·min-160 min;RI组建立切口痛模型,尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg-1·min-160 min.于输注瑞芬太尼或生理盐水前24 h(T0)、停止输注瑞芬太尼或生理盐水后2、6、24和48 h(T1-4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).后1次测定痛阈后处死大鼠,取脊髓L4-6节段,采用Western blot法测定脊髓GLT-1和GS的表达水平,采用免疫沉淀联合Western blot法测定脊髓硝基化GLT-1(nGLT-1)和硝基化GS(nGS)的表达水平.结果 与C组比较,I组、R组和RI组T1-4时MWT降低,TWL缩短,脊髓GLT-1和GS表达下调,nGLT-1和nGS表达上调,nGLT-1∕GLT-1比值和nGS∕GS比值升高(P<0.05).与I组和R组比较,RI组T1-4时MWT降低,TWL缩短,脊髓GLT-1和GS表达下调,nGLT-1比值和nGS表达上调,nGLT-1∕GLT-1和nGS∕GS比值升高(P<0.05).结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏形成的机制可能与脊髓GLT和GS功能受损有关.
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慢性癫痫大鼠海马谷氨酰胺合成酶的改变及丹参对其的影响
谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)是中枢神经系统中谷氨酸代谢的关键酶.以往的研究表明细胞外谷氨酸的浓度升高被认为是癫痫反复发作的重要因素,GS可能参与癫痫的复发.本实验通过观察慢性癫痫大鼠海马GS的改变,探讨慢性癫痫的发病机制.
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Wnt信号通路靶基因GS蛋白与胃癌发生发展的关系
目的 探讨Wnt信号通路的靶基因GS蛋白在胃癌发生及发展中的意义.方法 采用免疫组织化学技术(SP法)检测110例胃癌、30例肠化生、20例不典型增生及60例慢性浅表性胃炎组织中GS蛋白的表达水平,快速尿素酶法与组织病理切片染色法检测幽门螺杆菌(HP)感染的情况.结果 GS蛋白表达与胃癌组织分型、分化程度、淋巴结转移、进展程度有关(x2=3.873～34.728,P＜0.05),与肿瘤大小、部位、TNM分期、Borrmann分型、性别、年龄无关(x2=O.097～2.680,P＞0.05).GS蛋白表达与HP感染有关.结论 GS蛋白高表达与胃癌生物学行为及胃癌的发生、发展有关.
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重组人促红细胞生成素对高糖视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶表达的影响
目的 观察体外培养大鼠视网膜Müller细胞在高糖培养环境下谷氨酰胺合成酶(GS)的表达变化,探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对其表达的影响及作用机制.方法 出生后3～5 d新生Sprague-Dawley大鼠10只,摘除眼球分离视网膜,经胰酶消化后分离纯化视网膜Müller细胞.并将其随机分为正常对照组、高糖培养组、高糖+5U/ml rhEPO组、高糖+10 U/ml rhEPO组、高糖+20 U/mlrhEPO组、高糖+40 U/ml rhEPO组.48 h后原位缺口末端标记法检测高糖及不同浓度rhEPO对视网膜Müller细胞凋亡的影响；免疫细胞化学法半定量检测高糖组在不同浓度rhEPO干预下视网膜Müller细胞GS蛋白的表达水平.结果 与正常对照组比较,高糖培养组视网膜Müller细胞活性下降,细胞大量凋亡,GS蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=27.4,P＜0.0l).与高糖培养组比较,不同浓度rhEPO处理组凋亡细胞随着rhEPO浓度的增加显著性减少,差异有统计学意义(t=857.2、2 374.6、2 473.2、2 537.7,P＜0.01),GS蛋白的表达显著性升高,差异有统计学意义(t=3.2、18.0、22.5、26.4,P＜0.05).结论 rhEPO对高糖作用下视网膜Müller细胞的凋亡具有保护作用,并可上调高糖损伤细胞内下降的GS蛋白表达水平；促进谷氨酸循环,有效降低高浓度谷氨酸的兴奋性毒性作用,可能是其抗高糖损伤的保护机制之一.
关键词： 红细胞生成素/药理学 小神经胶质细胞 谷氨酰胺连接酶
